微核测定是监测染色体损伤的一种简便的细胞遗传学方法。它见于已进行核分裂的细胞中。若以微核计数准确地反映染色体损伤，所计数的微核应限于第一细胞周期中的微核^[1]。传统应用的常规微核法(Conventional Micronucleus Method简称CMN法)不能区分已经过几次核分裂的细胞，往往低估微核的实际值，使结果欠准确。1985年Fenech^[2]首先提出用松胞素B(Cytochalasin B简称Cyto-B)阻止胞质分裂，通过计数双核细胞中的微核来准确计数只经过一次核分裂细胞中的微核。此法称为胞质分裂阻滞微核法(Cytokinesis-block micronucleus method，简称CBMN法)，并同时证明CBMN法比CMN法敏感。我们用CBMN法对54例健康者在不同年龄段性别、吸烟和嗜酒等因素的影响作了初步探讨，现报告如下：

一 材料和方法

1.材料：采集健康献血员和个体饮食服务行业者54份血样，其中男33例，女31例，年龄范围为18~67岁。

2.培养体系的组成：每份0.2ml血样接种在1.5ml含有RPMI1640 (GIBCO)培养液中，热灭活小牛血清0.5ml，PHA适量。

3.Cyto-B的配制：用DMSO将Cyto-B配成1000r/ml的储存液，分装后于-40℃~-70℃保存。用时取出融化，用1640培养液稀释成120r/ml的工作液。

4.CBMN法：当全血细胞在37℃恒温下培养44h后，加入终浓度为6μg/ml的Cyto-B工作液，混匀后继续培养28h，终止培养，经0.1Mkcl低渗处理，固定，制片，Giemsa染色后镜下观察。

每份样本计数1000个胞浆完整的双核淋巴细胞，微核判断采用文献^[3]规定的标准。

二 结果

用CBMN法对54份样品分析得出的微核自发率的范围是0.002~0.034/细胞，见附图。根据年龄≤29岁、30~49岁和≥50岁将其样本分成一、二、三组。研究结果是，随着年龄的增长，双核细胞中的微核自发率和微核细胞率均呈逐渐增高的趋势。微核率的年平均增长率为4.80%，而微核细胞率的年平均增长率为4.67%。对各组微核率行统计学t检验发现：第一组与第二组无显著性差别(P >0.05)，而第一组与第三组之问却有非常显著性差别(P < 0.001)，第二组与第三组之间有显著性差别(P < 0.05)。对各组间的微核细胞率进行t检验得出的结果是：第一组与第二组之间有显著性差异(P < 0.05), 第一组与第三组之间有非常显著性差异(P < 0.001)，而第二组与第三组之间无显著性差异(P>0.05)。

对三个年龄组男女性别间的微核率和微核细胞率进行统计学t检验结果是，它们之间均无显著性差別。但是，女性微核率的年平均增长率为8.5%，男性为1.26%;女性微核细胞率的年平均增长率7.12%，男性为1.66%，见附表.因此看来，女性的CB微核率的年平均增长速度和微核细胞率的年平均增长速度比男性快。但经u检验，P值仍大于0.05。

此外，对54例样品的研究结果，未发现吸烟和嗜酒与微核自发率有相关性。

三 讨论

CB微核率和微核细胞率随着年龄的增长有不断增高的趋势，年平均增长率分别为4.80%和4.67%，并且年龄越大增长速度越快。对此结果，国外也有相同结论的报道^[1.2]。随年龄的增长，染色体畸变、微核形成和基因突变均明显增多，表明人体衰老与体细胞突变是密切相关的。另外，研究表明，女性CB微核率和微核细胞率的年平均增长率高于男性。对此结果，我们认为可能是女性衰老早于男性所致。

有人提出老化的体细胞突变理论，随年龄增长突变增加的可能原因是未修复DNA损伤的积累和/或修复DNA损伤的能力降低^[6]。Norman^[7]认为，微核计数随年龄增高的一个重要因素是淋巴细胞对其内部和外部增殖过程中的染色体损伤和细胞异常分裂的敏感性增高的结果。而Fenech^[1]则认为，随年龄的增长，遗传物质丢失的增多也是微核率增高的原因。而且年长者淋巴细胞分裂能力的下降也是常规法低估微核率的一个原因。因此，在以微核计数估算剂量效应时，首先作微核率的年龄校正，而且男女性别分别考虑也许是有意义的。

Prosser等^[8]对14例20~45岁健康、不吸烟者的CBMN率的研究认为，个体间微核率没有显著性差异，微核率的变化范围仅是0.010~0.018/细胞。这个结果的得出也许由于作者研究的年龄范围狭窄之故。Fenech^[1]对40例年龄20~85岁健康个体的研究证明，CBMN的自发率随年龄增长接近指数形式增高，并且在40岁以上的个体间微核率的离散度增大。薛开先等^[5]用CMN法对250例6~88岁健康者的自发微核率的检测发现，6~45岁微核自发率无明显改变，46岁后才有显著增加。这样看来，上述作者间的结果并不矛盾。