本实验用放射自显影法观察9例外周血体外受照不同剂量后，淋巴细胞转化率的变化。现报道如下：

一 方法

取9例健康人静脉血，经肝素抗凝后，分成0（对照）、100、250、500、1000及2000R六组。照射条件、培养方法及³H-Tak的掺入见文献^[1]。培养物用滴管打匀后全部转入离心管。经离心、生理盐水洗涤需天，再用0.075M KCl溶液低渗8分钟、用甲醇、冰醋酸（3：1）固定半小时并重复二头，留0.5毫升打匀，制成细胞悬液，气干法制片，用蛋清墨汁编号。

在暗室内，将核乳胶放置40℃水浴中溶化后加双蒸水1：1，稀释搅匀，用玻璃棒蘸取乳胶稀释液，均匀地涂于载有细胞的玻片上，乳版面朝上，把玻片稍倾斜地置于暗盒内，黑纸包好，放于室温（10℃）下的暗室内曝光10天。把玻片插入染色缸中，倒入D_19-6显影液显影30分钟后倒去，用蒸馏水洗一次后再倒入酸性定影液定影30分钟，自来水冲洗30分钟，取出晾干。吉姆萨染色30分钟，在油镜下观察200个淋巴细胞。细胞核内黑色银颗粒超过8个为标记细胞，即转化的淋巴细胞；少于8个为未转化的淋巴细胞，所有片子均由一人观察。

二 结果

1.各剂量组淋巴细胞相对标记百分率：按照分析标准，各剂量组淋巴细胞标记率相当于对照组淋巴细胞标记率的相对百分数结果如附表。

2.各剂量组淋巴细胞标记率与照射剂量的关系：将附表结果，经统计学处理、方差分析，F=14.86，P < 0.01，表示各剂量组间有非常显著差异。如令照射剂量为自变量X，各组淋巴细胞标记率相当于对照组标记率的百分数之对数为因变量y，用最小二乘法求得回归方程：

测验回归方程系数b的显著性，P < 0.01，证明随着照射剂量的增加，³H-TdR标记浓巴细胞百分率的减少有非常显著性差异，并呈很好的线性关系。在半对数坐标纸上，横坐标代表照射量R，纵坐标代表³H-TdR标记淋巴细胞相当对照组标记淋巴细胞的百分率作图。

三 讨论

一般认为，淋巴细胞在外周血液中处于静止状态，只有在体外培养条件下，受到非特异性丝裂原一PHA作用，才能转化为淋巴母细胞，这可能与机体的细胞免疫状态有关。而机体受到辐射损伤后，淋巴细胞的免疫功能可发生缺损。因此，这一指标在辐射损伤及核事故处理等方面的作用，日益引起人们的重视。

众所周知，脱氧核糖核酸（DNA）的代谢是细胞生长、增殖的物质基础，而淋巴细胞转化为母细胞过程中要发生DNA合成。当机体或外周血被射线照射后，DNA合成会受到抑制和破坏，使T淋巴细胞转化为淋巴母细胞随即减少^[7]。这样，用氚标记DNA的特异性前体一胸腺嘧啶核苷作示踪物掺入，能够反映转化过程中DNA的量变情况。国内外不少学者报道^[2-8]，淋巴细胞在体外受到一次大剂量照射后，用放射性核素标记方法测定³H-TdR进入DNA的掺入率，发现与剂量之间有明显的依赖关系，由此认为可作为生物剂量计。在我们的³H-TdR液体闪烁测量法^[1]中，已经观察到这个规律。本文应用³H-TdR放射自显影测量法也同样观察到这个线性依赖关系。国内苏州医学院曾报道应用放射自显影的方法观察辐射对淋巴细胞转化的影响，以回归方程所配直线比较（见附图），苏州医学院的直线比本文的直线斜率稍大，但差别不显著。其差异可能与实验方法和培养时间不同（苏医88小时，本文72小时）有关。有人报道^[6]，培养72小时所得曲线之坡度比培养48小时者大。

关于辐射对淋巴细胞转化率的影响，无论是一般涂片形态学观察法，¹²⁵I-UdR掺入法、³H-TdR液体闪烁测量法抑或³H-TdR放射自显影法等，虽然在国内外学者报道的资料^[2-8]中淋巴细胞辐射敏感性有所差异，有的甚至差别很大，但是淋巴细胞转化随照射剂量增加而抑制加剧的趋势是一致的。有文献^[4]指出，体外淋巴细胞转化和机体免疫状态呈平行关系。由此可以相信，无论采用哪种方法，只要方法统一，用辐射与淋巴细胞转化之间的依赖关系作为生物剂量计，是具有重要参考价值的。

本文观察结果提示，³H-TdR放射自显影法测定淋巴细胞转化与辐射损伤的关系，兼有形态学观察和液体闪烁测量法两者的特点，其不仅操作简单，结果准确、灵敏，可作重复分析，而且不需要昂贵的仪器，其缺点是，放射性核素掺入定量不如液体闪烁法，且费时间，但可作为液闪法的补充和对照，适用于大批人员的普查和核辐射的医学监护。

（本文统计学处理承蒙本校卫生统计学教研组臧桐华副教授指导，顺致谢意。）