藏药甘青乌头中<b>1</b>个新的双二萜生物碱

引用本文

YANG Li-hua, WANG Yue, LIU Xiao-qian, LIANG Yao-hua, LI Chun, WANG Zhi-min. A novel dimeric diterpenoid alkaloid from the Tibetan medicinal plant Aconitum tanguticum (Maxim.) Stapf[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2021, 56(5): 1429-1433.

杨丽华, 王月, 刘晓谦, 梁曜华, 李春, 王智民. 藏药甘青乌头中1个新的双二萜生物碱[J]. 药学学报, 2021, 56(5): 1429-1433.

藏药甘青乌头中1个新的双二萜生物碱

杨丽华^1,2, 王月^1,3, 刘晓谦¹, 梁曜华¹, 李春¹, 王智民¹

1. 中国中医科学院中药研究所, 北京 100700;
2. 湖南科技学院, 湖南永州 425199;
3. 广东药科大学, 广东广州 510006

收稿日期: 2020-12-16; 修回日期: 2021-01-07

基金项目: 北京市自然科学基金项目（7132152）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目（ZXKT17039）

^*通讯作者: 李春, Tel: 13910436611, E-mail: cli@icmm.ac.cn;
王智民, E-mail: zmwang@icmm.ac.cn

摘要: 从甘青乌头全草中分得两个双二萜生物碱，经1D，2D-NMR及HR-MS数据解析确定了它们的结构，其中1个为新化合物，命名为tanguticurine A（1），另1个为已知化合物anthoroidine B（2），二者均为首次从甘青乌头中分离得到。抗病毒实验结果显示化合物1对HCV和EV71均有较好的抑制作用，半数有效浓度（EC₅₀）分别为15.5和9.7 μmol·L^-1，并显示较低的细胞毒性。因此，化合物1是一个较好的抗病毒先导化合物，值得深入研究。

关键词: 甘青乌头二萜生物碱结构鉴定抗病毒活性

A novel dimeric diterpenoid alkaloid from the Tibetan medicinal plant Aconitum tanguticum (Maxim.) Stapf

YANG Li-hua^1,2, WANG Yue^1,3, LIU Xiao-qian¹, LIANG Yao-hua¹, LI Chun¹, WANG Zhi-min¹

1. Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China;
2. Hunan University of Science and Engineering, Yongzhou 425199, China;
3. Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China

Abstract: Two dimeric diterpenoid alkaloids were isolated from the whole plant of Aconitum tanguticum (Maxim.) Stapf and their structures were elucidated by extensive analysis of 1D, 2D-NMR and HR-MS data. One is a new compound and named tanguticurine A (1), and the other is the known compound anthoroidine B (2); both were isolated from this plant for the first time. The antiviral activity of compounds 1 and 2 against HCV and EV71 were also evaluated. It was found that compound 1 had a good inhibitory effect on HCV and EV71 with EC₅₀ values of 15.5 and 9.7 μmol·L^-1, respectively, and showed low cytotoxicity. Therefore, compound 1 is a good antiviral lead compound and deserves further study.

Key words: Aconitum tanguticum diterpenoid alkaloid structural elucidation antiviral activity

甘青乌头[Aconitum tanguticum (Maxim.) Stapf] 主产于青海、甘肃、四川、云南和西藏, 为常用藏药榜嘎的基源植物之一, 具有清热解毒功效, 临床上用其全草治疗传染病发热, 肝、胆热病, 流行性感冒以及食物中毒等^[1]。甘青乌头中的化学成分主要是二萜生物碱, 此外还含有黄酮、酚酸和苯乙醇苷类成分^[2]。本课题组前期对甘青乌头的化学成分进行了系统研究, 从中分离得到多个结构新颖的二萜生物碱类成分^[3]。近期, 又从中分离得到两个双二萜生物碱, 其中1个为新化合物, 命名为tanguticurine A (1, 图 1), 另1个为已知化合物anthoroidine B (2), 二者均为首次从甘青乌头中分离得到。体外实验结果显示, tanguticurine A (1) 具有较好的抗HCV和EV71活性, 其半数有效浓度(EC₅₀) 分别为15.5和9.7 μmol·L^-1, 是一个较好的抗病毒先导化合物, 值得深入研究。

Figure 1 Structures of compounds 1 and 2

结果与讨论 1 结构鉴定

Tanguticurine A (1) 白色无定形粉末, 改良碘化铋钾反应呈阳性。HR-ESI-MS推断其分子式为C₄₀H₅₀N₂O₄ (m/z 623.384 0 [M+H]⁺)。¹³C NMR和DEPT谱显示, 该化合物结构中含有10个C、14个CH、14个CH₂和2个CH₃。分析其NMR数据可知, 化合物1中存在着一组典型的C20海替定型二萜生物碱的信号, 包括1个亚胺(δ_H 7.40, d, J = 2.4 Hz; δ_C 169.5 d)、1个角甲基(δ_H 1.05, 3H, s; δ_C 19.0 q)、1个环内双键(δ_H 5.24, brs; δ_C 127.4 d, 149.7 s)、以及1个20位的碳氢信号(δ_H 3.52, brs; δ_C 80.4 d)。结合分子式C₄₀H₅₀N₂O₄, 推断该化合物是由2个C20的生物碱连接而成的双二萜生物碱。与已知双二萜生物碱trichocarpinine A^[4]的核磁数据比对, 发现化合物1中C20海替定型二萜生物碱片段与trichocarpinine A结构中海替定型生物碱片段结构一致, 该片段可由2D-NMR验证。除去该生物碱片段, 还剩余1个C20的生物碱片段。剩余信号包含了1组C20海替生型二萜生物碱的特征信号, 分别是1个连氮的CH₂信号(δ_H 2.55, 1H, d, J = 11.4 Hz; δ_H 3.35, 1H, brs; δ_C 63.5 t)、1个角甲基(δ_H 1.03, 3H, s; δ_C 29.2 q) 和两个连氮的CH信号(δ_H 3.75, brs; δ_C 69.6; δ_H 3.49, brs; δ_C 65.0)。除此之外, 该结构片段还剩余1个酯羰基(δ_C 174.2 s)、1个环内双键(δ_H 5.88, 1H, d, J = 6.0 Hz; δ_C 121.7 d, 142.4 s) 和1个连氧碳(δ_H 4.69, 1H, d, J = 6.6 Hz; δ_C 74.7)。与文献数据^[5]比较可知, 该片段中A环和B环与C20海替生型二萜生物碱hetisine基本一致, 但C环不同。受化合物anthriscifolsine A^[6]结构形成的启发, 推测该C20生物碱的母核的C环与已知化合物anthriscifolsine A母核的C环的形成有类似处, 即C11-C12键断裂, C13位羟基与C11位醛基通过羟醛缩合反应形成半缩醛, 半缩醛结构再失去一分子氢形成一个含有酯键的八元环。该推测可在HMBC (图 2) 上得到验证: H-13'与C-8', C-11', C-12', C-14', C-16', C-20'有相关、环内双键氢质子H-12'与C-13', C-14', C-15', C-17'相关、H-15'与C-8', C-9', C-12', C-14', C-16', C-17'相关、H-17'与C-12', C-15', C-16'相关。该片段中还含有1个羟基, 连接在母核2'位, 可由¹H-¹H COSY和HMBC验证。此外, 两个二萜生物碱通过17位与17'位的亚甲基连接, 可由HMBC中H-17与C-16', C-17'相关、H-17'与C-16, C-17相关以及关键¹H-¹H COSY验证。该化合物的立体化学通过偶合常数和NOESY确认, NOESY图谱中, H-2'与H-5'有相关, 推测H-2'是β构型。通过进一步分析2D-NMR (¹H-¹H COSY、DEPT、HMBC) (表 1), 化合物1鉴定为tanguticurine A。

Figure 2 Key HMBC (H$ \curvearrowright$C) and ¹H-¹H COSY (—) correlations for compounds 1 and 2

表 1 NMR data assignment of compounds 1 and 2 (600 MHz for ¹H NMR, 150 MHz for ¹³C NMR, 1 in CDCl₃, 2 in CD₃OD, J in Hz). *Overlapping

No.	1				2
No.	δ_H	δ_C	COSY	HMBC (H→C)	δ_H	δ_C
1	1.50* (β), 1.65 (m, α)	28.4 (t)		2, 5, 20	1.47 (m, β), 1.66 (m, α)	29.2
2	1.26 (m, β), 1.55* (α)	20.7 (t)	H-3β		1.19 (m, β), 1.51* (α)	21.9
3	1.26 (m, α), 1.71* (β)	30.6 (t)		2, 4, 5, 19	1.21 (d-like, 13.2, α), 1.73*(β)	31.6
4	-	44.9 (s)			-	46.5
5	-	72.5 (s)			-	73.0
6	1.52* (α), 1.62* (β)	31.7 (t)		5, 7, 10	1.43 (m, α), 1.72* (β)	32.7
7	1.71* (β), 1.92 (dd, 14.4, 6.6, α)	31.1 (t)		6, 8, 9, 15	1.64 (m, β), 1.93 (ddd-like, 6.6, 6.6, 6.0, α)	32.3
8	-	43.7 (s)			-	45.0
9	1.62*	47.1 (d)			1.58*	48.3
10	-	45.3 (s)			-	46.7
11	1.31 (m, α), 1.54* (β)	27.9 (t)		16	1.31 (t-like, 13.8, 11.4, α), 1.59* (β)	28.8
12	2.29 (brs)	34.3 (d)	H11, H13α, H15		2.29 (brs)	35.6
13	1.48 (t, 10.8, 10.2, β), 1.80* (dd-like, 11.4, 2.4)	43.3 (t)	H12	8, 11, 12, 16, 20	1.49 (m), 1.82 (m)	44.3
14	1.60*	44.3 (d)		20	1.52*	45.7
15	5.24 (brs)	127.4 (d)	H12	8, 12, 17	5.24 (brs)	128.4
16	-	149.7 (s)			-	151.6
17	2.23 (dd-like, 15.6, 7.8)	31.3 (t)	H-17'	12, 15, 16, 16', 17'	2.22 (dd-like, 7.8, 6.0)	33.1
18	1.05 (s)	19.0 (q)		3, 4, 5, 19	1.00 (s)	19.3
19	7.40 (d, 2.4)	169.5 (d)	H20	4, 5, 18, 20	7.33 (d, 2.4)	172.8
20	3.52 (brs)	80.4 (d)	H14, H19	1, 5, 8, 19	3.44 (brs)	81.4
1'	1.73* (β), 1.82* (α)	33.4 (t)		2', 3', 5'	1.77 (m, β), 2.69 (d, 15.6, α)	34.0
2'	4.24 (brs, β, W_1/2 = 9.89)	66.5 (d)	H1'β, H3'β		4.11 (d, 3.0, β)	67.8
3'	1.54 * (β), 1.88*	39.6 (t)		4'	1.45 (m, β), 1.75 (m, α)	40.4
4'	-	37.2 (s)			-	37.8
5'	1.56*	57.4 (d)			1.54 (brs)	59.7
6'	3.49 (brs)	65.0 (d)	H-7'		3.29 (brs)	66.5
7'	1.70(α), 1.82	38.2 (t)	H-6'	14'	1.64 (m, α), 1.76 (m, β)	40.6
8'	-	39.4 (s)			-	40.5
9'	2.36 (brs, β)	62.9 (d)		5', 11', 14', 20'	1.55 (brs, β)	59.7
10'	-	48.0 (s)			-	46.5
11'	-	174.2 (s)			4.94 (s)	93.0
12'	5.88 (d, 6.0)	121.7 (d)	H13', H15'	13', 14', 15', 17'	5.60 (d, 6.6)	121.2
13'	4.69 (d, 6.6)	74.7 (d)	H12'	8', 11', 12', 14', 16', 20'	4.10 (dd, 6.6, 2.4)	70.9
14'	1.57*	47.3 (d)			1.72 (dd-like, 10.8, 5, 4)	48.8
15'	2.02 (d, 19.2, α), 2.36 (d, 19.2, β)	35.9 (t)		7', 8', 9', 12', 14', 16', 17'	1.84 (d, 18.6, α), 2.17 (brs, β)	37.5
16'	-	142.4 (s)			-	145.8
17'	2.11 (t-like, 15.0, 7.8)	34.1 (t)	H-17	16, 17, 12', 15', 16'	2.12 (t-like, 7.8)	35.5
18'	1.03 (s)	29.2 (q)		3', 4', 5', 19'	0.95 (s)	30.0
19'	2.55 (d, 11.4, β), 3.35 (brs, α)	63.5 (t)			2.44 (d, 11.4, β), 3.33 (brs, α)	64.2
20'	3.75 (brs)	69.6 (d)			3.59 (brs)	70.8

表 1 NMR data assignment of compounds 1 and 2 (600 MHz for ¹H NMR, 150 MHz for ¹³C NMR, 1 in CDCl₃, 2 in CD₃OD, J in Hz). *Overlapping

Anthoroidine B (2) 白色针状结晶(甲醇), 改良碘化铋钾反应呈阳性。由HR-ESI-MS推断其分子式为C₄₀H₅₂N₂O₄ (m/z 625.402 2 [M+H]⁺)。¹³C NMR和DEPT谱显示, 该化合物结构中含有9个C、15个CH、14个CH₂和2个CH₃。与化合物1核磁数据比较可发现, 化合物2同样是由2个C20生物碱连接而成的双二萜生物碱, 其中之一为1个C20海替定型二萜生物碱(δ_H 7.33, d, J = 2.4 Hz; δ_C 172.8 d; δ_H 1.00, 3H, s; δ_C 19.3 q; δ_H 3.44, 1H, brs; δ_C 81.4 d; δ_H 5.24, 1H, brs; δ_C 128.4 d; 151.6 s), 另一个为1个类海替生型的二萜生物碱(δ_H 2.44, 1H, d, J = 11.4 Hz; δ_H 3.33, 1H, brs; δ_C 64.2; δ_H 0.95, 3H, s; δ_C 30.0 q; δ_H 3.59, 1H, brs; δ_C 70.8; δ_H 3.29, 1H, brs; δ_C 66.5)。与化合物1的最大区别在于, 化合物2少了化合物1的酯羰基信号(δ_C 174.2 s), 而多了1个独特的半缩醛信号(δ_H 4.94, 1H, s; δ_C 93.0), 提示化合物2中类海替生型二萜生物碱片段上的八元环组成与化合物1不同。同样受化合物anthriscifolsine A结构的启发, 再结合化合物2比1分子量仅仅多2, 可推测化合物2中的八元环形成如下: 由C11-C12键断裂, C13位羟基与C11位醛基通过羟醛缩合反应而形成1个八元环。该推测也在HMBC (图 2) 上得到了验证。与文献值^[7]比较, 化合物2的NMR数据(表 1) 与anthoroidine B基本一致, 因此鉴定其结构为anthoroidine B。

2 化合物活性检测

采用荧光素酶报告基因法测定了两个化合物的抗病毒活性, 结果显示: tanguticurine A (1) 抗HCV的EC₅₀为15.5 μmol·L^-1, 抗EV71的EC₅₀为9.7 μmol·L^-1; 阳性药sobosbuvir抗HCV的EC₅₀为1.2 μmol·L^-1, 阳性药NITD008抗EV71的EC₅₀为0.78 μmol·L^-1。上述结果提示tanguticurine A对HCV和EV71均有较好的抑制作用, 是一个较好的抗病毒先导化合物, 具有进行结构改造的价值和潜力。Anthoroidine B (2) 对两种病毒均无抑制作用(对HCV的最大给药浓度为50 μmol·L^-1, 对EV71的最大给药浓度为100 μmol·L^-1)。

实验部分

Waters Acquity UPLC/Xevo G2 QTOF系统(包括Waters Xevo G2 QTOF质谱仪和Waters Acquity超高效液相色谱系统) (美国Waters公司); LTQ Orbitray Velos pro质谱仪(高分辨静电场轨道阱质谱, ESI源) 和Ultimate 3000超高效液相色谱仪(美国Thermo Fisher公司); Bruker Avance III 600-NMR spectrometer (内标为TMS, 德国Bruker公司); RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。柱色谱硅胶(160~200目, 200~300目, 青岛海洋化工厂); 碱性氧化铝(100~200目, 上海沪震实业有限公司), 高效薄层板GF₂₅₄ (德国Merck公司)。PURELAB Plus超纯水仪(美国波尔公司); 电热培养箱(上海浦东跃欣科学仪器厂); 5418型离心机(Eppendorf公司); 5417R型冷冻离心机(Eppendorf公司), -80 ℃冰箱(日本三洋公司); HW-8B型超级微量恒温器(上海浦江分析仪器厂); 涡旋振荡器(北京卓信伟业科技有限公司); 细胞培养皿(Thermo Scientific); 96孔板(NUNC); 移液器(Thermo Scientific); 载玻片, 盖玻片, DMEM (Gibco); 胎牛血清FBS (Gibco); 胰酶(Gibco); DMSO (Vetec); Renilia-Glo Luciferase Assay System (Promega); Pen Strep (缩写PS, Gibco)。

人肝癌细胞系Huh7.5.1和人横纹肌肉瘤RD细胞为清华大学提供。丙型肝炎病毒(HCV) 和肠道病毒EV71也均由清华大学提供。

1 提取分离

甘青乌头干燥全草(10 kg), 粗粉碎, 分别加8、6、6倍量70%乙醇回流提取3次, 每次2 h, 合并提取液, 提取液减压浓缩成浸膏。浸膏加水稀释到25 L, 加盐酸调节pH值至2.5, 用二氯甲烷萃取, 合并二氯甲烷溶液回收溶剂得到甘青乌头酸性部位; 剩余水溶液加氨水调节pH值至10, 用二氯甲烷萃取, 合并二氯甲烷萃取液减压回收溶剂后得总生物碱47 g。取甘青乌头总生物碱47 g, 经碱性氧化铝柱色谱, 氯仿-甲醇(1∶0~7∶3) 梯度洗脱, 得到7个流分S1~S7。S4经硅胶柱色谱, 石油醚-丙酮(3∶1~0∶1) 梯度洗脱, 得到S4-1~S4-4共4个流分。S4-4再经硅胶柱色谱, 以石油醚-丙酮(5∶1~2∶1) 梯度洗脱, 得到化合物1 (7 mg)。

甘青乌头干燥全草(25 kg), 粗粉碎, 加8倍量95%乙醇超声提取3次, 每次40 min, 合并提取液, 提取液经减压浓缩成浸膏, 浸膏加水稀释到10 L, 加盐酸调节pH值到2.5, 用二氯甲烷萃取, 合并二氯甲烷溶液回收溶剂得到甘青乌头酸性部位; 剩余水溶液加氨水调节pH值至10.0, 用二氯甲烷萃取, 合并二氯甲烷萃取液回收溶剂得总生物碱11.3 g。取甘青乌头总生物碱10 g, 经硅胶柱色谱, 氯仿-甲醇-氨水(50∶1∶1~8∶2∶0.2) 梯度洗脱, 得到4个流分S1~S4。S3反复甲醇重结晶得到化合物2 (10 mg)。

2 结构鉴定

Tanguticurine A (1) [α]_D²⁰ +28.38 (c 0.21, MeOH); UV (MeOH) λ_max/nm 191.2; CD谱: 210 nm处观察到一个负的Cotton效应(Δε = -4.737 14), 234 nm处观察到一个正的Cotton效应(Δε = +3.733 33); (-) ESI-MS m/z: 657 [M+Cl]^-; (+) HR-ESI-MS m/z: 623.384 0 [M+H]⁺ (Calcd. for C₄₀H₅₁O₄N₂⁺ 623.384 3), 312.197 0 [M-C₂₁H₂₈NO]⁺ (基峰), 328.191 1 [M+2H-C₂₀H₂₆NO]⁺; ¹H NMR和¹³C NMR数据见表 1。

Anthoroidine B (2) [α]_D²⁰ +31.69 (c 0.183, MeOH); UV (MeOH) λ_max/nm: 193.6; (-) ESI-MS m/z: 659 [M+Cl]^-; (+) HR-ESI-MS m/z: 625.402 2 [M+H]⁺ (Calcd. for C₄₀H₅₃O₄N₂⁺ 625.400 0), 313.205 1 [M-H-C₂₁H₂₈NO]⁺ (基峰), 304.200 2; ¹H NMR和¹³C NMR数据见表 1。

3 抗病毒活性测定 3.1 各化合物细胞毒性测定

参考文献方法^[8], 将Huh 7.5.1细胞和RD细胞分别加入含有10%胎牛血清的DMEM培养基中, 置于37 ℃、5% CO₂培养箱中培养, 取对数生长期细胞进行实验。将培养好的Huh 7.5.1细胞(EV71测活使用RD细胞) 以每孔3 000个细胞铺96孔板, 置于37 ℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。用含有5% DMSO的培养基稀释化合物。向实验组中, 每孔加入各化合物50 μL, DMEM 50 μL。另取一列加入100 μL DMEM作为细胞对照组。平行重复3次实验。将96孔板放入37 ℃、5% CO₂培养箱中培养24 h。取出96孔板, 置于显微镜下观察细胞生长状态并且记录结果。

结果显示, tanguticurine A (1) 浓度为50 μmol·L^-1时对Huh 7.5.1细胞无毒性反应, 100 μmol·L^-1对RD细胞的毒性为100%; anthoroidine B (2) 浓度为50 μmol·L^-1时对Huh 7.5.1细胞的毒性为30%, 100 μmol·L^-1对RD细胞无毒性反应。

3.2 各化合物EC₅₀测定

将培养好的Huh 7.5.1细胞(EV71测活使用RD细胞) 以每孔3 000个细胞铺96孔板。用含有5% DMSO和10% FBS的培养基稀释各化合物。用移液器吸弃96孔板中实验组每孔内的培养基, 再向96孔板中分别加入不同浓度的化合物50 μL, 每个浓度重复三孔。另外取三孔作为病毒对照组(不加化合物)。将96孔板放入37 ℃、5% CO₂培养箱中培养6~8 h。向每孔中加入浓度为100 TCID₅₀ JFH-1 HCV病毒(含荧光素酶报告基因) 50 μL (EV71测活使用含荧光素酶报告基因的EV71假病毒50 μL), 小心混匀。于37 ℃、5% CO₂培养箱中培养48 h (EV71测活时间为24 h)。48 h (24 h) 后, 取出96孔板, 吸弃上清液, 向每孔中加入100 μL Renilla-Glo^TM Luciferase reagent, 室温避光孵育3~5 min, 将每孔中的液体吸入到96孔白板中, 使用Glomax plate reader读数, 计算EC₅₀。

结果显示: tanguticurine A (1) 抗HCV的EC₅₀为15.5 μmol·L^-1, 抗EV71的EC₅₀为9.7 μmol·L^-1; 阳性药sobosbuvir抗HCV的EC₅₀为1.2 μmol·L^-1, 阳性药NITD008抗EV71的EC₅₀为0.78 μmol·L^-1; anthoroidine B (2) 即使在最大给药浓度时也均显示无效(对HCV的最大浓度为50 μmol·L^-1, 对EV71的最大浓度为100 μmol·L^-1)。

致谢: 感谢清华大学娄智勇教授测定两个化合物的抗病毒活性。

作者贡献: 李春设计和组织了整个研究; 杨丽华负责成分分离、结构鉴定和论文撰写; 王月协助提取分离工作; 刘晓谦和梁曜华对论文进行了润色; 王智民指导了化合物结构鉴定。

利益冲突: 所有作者声明不存在任何利益冲突。

参考文献

[1]	Liu ZM, Zhao JF, Qin SY, et al. Resources and usage status of Tibetan medicinal plant "Bangga"[J]. China J Chin Mater Med (中国中药杂志), 2017, 42: 4898-4904.
[2]	Yang LH, Lin LM, Wang ZM, et al. Research progress on Aconitum tanguticum[J]. Chin J Exp Tradit Med Form (中国实验方剂学杂志), 2016, 22: 43-49.
[3]	Fan XR, Yang LH, Liu ZH, et al. Diterpenoid alkaloids from the whole plant of Aconitum tanguticum (Maxim.) Stapf[J]. Photochemistry, 2019, 160: 71-77. DOI:10.1016/j.phytochem.2018.11.008
[4]	Zhang ZT, Chen DL, Chen QH, et al. Bis-diterpenoid alkaloids from Aconitum tanguticum var. trichocarpum[J]. Helv Chim Acta, 2013, 96: 710-718. DOI:10.1002/hlca.201200256
[5]	Bessonova IA, Saidkhodzhaeva SA. Hetisane-type diterpenoid alkaloids[J]. Chem Nat Compounds, 2000, 36: 419-477. DOI:10.1023/A:1002808721838
[6]	Shan LH. Studies on Diterpenoid Alkaloids Constituent of Four Herb Aconitum (四种国产草乌大花还亮草、毛果船苞翠雀花、多根乌头、林地乌头生物喊成分研究)[D]. Chengdu: Southwest Jiaotong University, 2017.
[7]	Zhang JF. Studies on Diterpenoid Alkaloids and Biological Activity of Five Specific Traditional Chinese Medicines "Cao Wu" in Xinjiang (五种新疆特有药用草乌生物碱成分及生物活性研究)[D]. Chengdu: Southwest Jiaotong University, 2018.
[8]	Fu ZX, Li S, Xiang T, et al. Differential expression of long non-coding RNAs of Huh.7.5.1 cells after infection with the hepatitis C virus and their effects on cell proliferation[J]. Chin J Virol (病毒学报), 2017, 33: 192-199.


药学学报 2021, Vol. 56 Issue (5): 1429-1433 DOI: 10.16438/j.0513-4870.2020-1912	PDF