药学学报  2018, Vol. 53 Issue (9): 1387-1397   PDF    
基于靶标网络分析的治痹寒热经方抗类风湿关节炎作用机制对比研究
李玮婕1,2, 卢建秋1,3, 毛霞2, 郭秋岩2, 王晓月2, 郭敏群2, 张彦琼2, 林娜2     
1. 北京中医药大学中药学院, 北京 100102;
2. 中国中医科学院中药研究所, 北京 100700;
3. 北京中医药大学图书馆, 北京 100029
摘要: 乌头汤和白虎加桂枝汤分别为寒、热痹的代表经方,临床治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)疗效确切,但其作用特点及潜在药理机制均尚未明确。本研究借助大鼠佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AIA)模型,开展全基因组表达谱芯片检测和网络药理学挖掘的整合研究。结果表明,乌头汤和白虎加桂枝汤均可有效降低AIA大鼠的发病率并改善关节炎症状,但两者对冷痛敏和热辐射反应的干预效果有明显差异。进一步的靶标网络分析发现,乌头汤和白虎加桂枝汤中分别筛选出106和132个抗RA效应基因,这些抗RA的关键候选靶标均分别参与矫正RA相关炎症-免疫失衡网络,但前者还可调节机体激素和能量代谢反应。本研究对比分析了寒热痹经方抗RA作用靶点和通路的异同点,为深入揭示经方治痹功效的生物学内涵提供了初步的科学依据。
关键词: 乌头汤     白虎加桂枝汤     类风湿关节炎     网络分析     作用机制    
A comparative study on the mechanisms of two classical herbal formulae for rheumatoid arthritis applying cold and heat patterns based on target network
LI Wei-jie1,2, LU Jian-qiu1,3, MAO Xia2, GUO Qiu-yan2, WANG Xiao-yue2, GUO Min-qun2, ZHANG Yan-qiong2, LIN Na2     
1. School of Chinese Pharmacy, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China;
2. Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China;
3. Library of Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China
Abstract: Wu-tou decoction (WTD) and Baihu-Guizhi decoction (BHGZD) as described in the Synopsis of the Golden Chamber have been used extensively for the treatment of rheumatoid arthritis (RA) with apparent therapeutic efficacy. However, characteristics of pharmacological effects and their underlying molecular mechanisms have not been fully elucidated due to a lack of appropriate scientific methodology. In the current study, we performed an integrative approach applying gene expression profiling and network analysis to examine the therapeutic effects and molecular mechanisms of WTD and BHGZD based on adjuvant-induced arthritis (AIA) animal model. Results demonstrated that both WTD and BHGZD could relieve the severity of arthritis in AIA rats, while the significant differences were observed in the changes of the withdrawal response scores and latency time of AIA rats treated with WTD and BHGZD. Mechanistically, our network pharmacology-based investigation demonstrated that the major candidate targets of WTD and BHGZD were significantly associated with several inflammation-immune regulatory pathways, such as Toll-like receptor signaling pathway, T cell receptor signaling pathway, cytokine-cytokine receptor interaction, chemokine signaling pathway, B cell receptor signaling pathway, antigen processing and presentation, Fc epsilon RI signaling pathway, natural killer cell mediated cytotoxicity, as well as leukocyte transendothelial migration. In particular, the major candidate targets of WTD were also involved in the regulation of hormone and energy metabolism, which might be imbalanced during RA progression. In conclusion, the current study revealed differences and similarities regarding the effects and network regulatory mechanisms of WTD and BHGZD. These findings may present a scientific basis for elucidation of mechanisms by which WTD and BHGZD alleviates RA.
Key words: Wu-tou decoction     Baihu-guizhi decoction     rheumatoid arthritis     network analysis     mechanism    

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以慢性滑膜炎并侵蚀软骨、最终导致骨与关节破坏为特征的世界难治性自身免疫性疾病, 具有发病率和致残率高的特点[1, 2]。目前, 治疗RA的主要药物包括改善病情的抗风湿药(disease-modifying antirheumatic drugs, DMARDs)、非甾体抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs)、糖皮质激素(glucocorticoid, GC)、生物制剂如TNF抑制剂、抗IL-6受体抗体等以及靶向小分子药物[3]。临床研究表明, 上述药物虽具有缓解疼痛、抑制疾病活动、预防关节损伤和减缓疾病发展的作用[4], 但会产生一定的毒副作用[5, 6]

素以整体观念、辨证论治为指导的中医药, 因具有药效持久、毒副作用少、复发率低等特点和优势而备受重视。根据中医理论, RA属于“痹症”的范畴, 机体正气不足, 风、寒、湿等外邪侵入人体而诱发疾病[7]。临床上张仲景《金匮要略》中多个经典方剂对RA均有效[8], 鉴于寒、热证是RA主要证型[9], 乌头汤和白虎加桂枝汤分别为治寒痹、热痹代表方, 且临床治疗RA疗效确切[10, 11], 因此, 本研究以二者为研究对象进行对比研究。其中乌头汤, 由制川乌、麻黄、黄芪、芍药及甘草组成, 具有温阳散寒、除湿止痛, 并兼通达经络之效[12, 13]。白虎加桂枝汤, 由石膏、知母、桂枝、粳米和甘草组成, 具有清热泻火、通络止痛之功效[14]。目前, 已有关于乌头汤和白虎加桂枝汤治疗RA的临床疗效[8]和药理药效学对比研究的报道, 提示二者均能显著对抗佐剂性关节炎(adjuvant- induced arthritis, AIA)模型的炎症反应以及血清白介素-6 (interleukin-6, IL-6)、类风湿因子(rheumatoid factor, RF)、抗CCP抗体(anti-cyclic citrullinated peptides antibody, AC-PA)的异常[15];二者通过调控Toll样受体2 (Toll like receptor, TLR2) /肿瘤坏死因子受体相关因子6 (tumor necrosis factor receptor- associated factor 6, TRAF6)信号通路和凋亡受体Faslg (tumor necrosis factor ligand superfamily member 6)基因产生抗炎作用[16], 并显著调节外周血T细胞亚群[17];但乌头汤具有较好的抗炎和镇痛作用, 白虎加桂枝汤则具有明显拮抗急性炎症作用[18]等特点。然而, 上述研究尚未从系统的视角较全面地对二者抗RA的作用和机制进行比较。

近年来, 转录组学(transcriptomics)、生物信息学(bioinformatics)及网络药理学(network phar-macology)等多种新兴学科的发展和应用, 为中药方剂整体药效评价及其多成分-多靶点-多途径的作用机制挖掘提供有效的技术支撑[19-22]。转录组学分析有利于揭示基因表达与生命表征的内在联系, 并挖掘机体发育和病理生理机制[23]。网络药理学, 则开创了多成分、多靶点、整合协同的研究模式, 从生物网络切入, 全面解析方剂作用原理[24]。因而, 将转录组学数据挖掘与网络药理学研究策略相整合, 不仅有利于系统阐释疾病发生、发展和转归相关的动态演变分子机制, 还为药物靶标的高效预测及潜在分子机制的揭示提供强有力手段。因此, 本研究拟采用AIA大鼠模型, 开展全基因组表达谱芯片检测和网络药理学挖掘的整合研究, 初步揭示乌头汤和白虎加桂枝汤治疗RA的作用和机制, 为深入阐明二者抗RA的作用机制提供依据。

材料与方法

实验用动物   雄性Lewis大鼠, 健康6~7周龄(30只, 体重200 ± 20 g), 清洁级, 购自中国生物制品鉴定所动物中心。动物许可证: SCXK (京) 2007-0017, SCXK (京) 2009-0017。所有动物均饲养在温度为(24 ± 1) ℃的恒温条件下, 光照/黑暗周期为12 h, 给予自由饮食。

实验药品、试剂及仪器  黄芪[Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge.]、麻黄(Ephedra sinica Stapf)、芍药(Paeonia lactiflora Pall.)、甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、制川乌(Aconitum carmichaelii Debx.)、知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge.)、桂枝(Cinnamomum cassia Presl)和石膏(Gypsum fibrosum)均购自北京同仁堂药店, 经中国中医科学院中药研究所张村研究员鉴定为合格药材。甲氨蝶呤片(上海信谊药厂有限公司产品; 国药准字H31020644);完全弗氏佐剂(Chondrex公司产品; 货号: 7002);乙醇(批号: 20101222)、丙酮(批号: 20101223)购自北京化工厂; 液体石蜡(江西德成制药有限公司; 批号: 150702)。Von frey hair疼痛测试仪(美国Stoeltingco公司); 热辐射疼痛测试仪(意大利Ugo Basile公司); 旋涡混合器(北京金北德工贸有限公司; 型号: KA-1000)。

药液制备方法   乌头汤制备方法:称取制川乌6 g, 麻黄、黄芪、白芍及炙甘草各9 g, 温水浸泡1 h。先将制川乌加入420 mL水中, 加热至沸腾后开始计时, 煮沸1.5 h, 然后同时加入其他4味中药材, 继续煎煮1.5 h, 倒出药液。再加入336 mL水, 煎煮1.5 h后, 合并两次药液, 纱布过滤。将全部药液转移至旋转蒸发仪浓缩为含饮片0.42 g·mL-1, 以此浓度稀释至给药浓度。白虎加桂枝汤制备方法:称取石膏60 g、知母15 g、甘草5 g、粳米30 g、桂枝10 g, 温水浸泡1 h。先将石膏单独煎30 min后加入其他药物, 加水至1 000 mL, 保持微沸, 煎煮30 min, 纱布过滤; 取药渣加水500 mL二次煎煮20 min, 纱布过滤并与第一次滤液合并, 并将全部药液转移至旋转蒸发仪浓缩为含饮片2 g·mL-1, 以此浓度稀释至给药浓度。

实验分组及给药方式   雄性Lewis大鼠30只, 随机分为5组, 每组6只。组别如下:正常对照组(Con)、佐剂性关节炎模型组(AIA)、乌头汤治疗组(AIA-WTD)、白虎加桂枝汤治疗组(AIA-BHGZD)和甲氨蝶呤阳性对照组(AIA-MTX)。按照本课题组前期研究的最佳药效计量和给药方式进行给药[25]:乌头汤剂量为7.5 g·kg-1, 相当于2倍临床等效剂量; 根据预实验, 白虎加桂枝汤剂量为21.4 g·kg-1, 相当于2倍临床等效剂量时的疗效最佳; 甲氨蝶呤剂量为0.2 mg·kg-1 (相当于临床等效剂量)。大鼠给药溶剂按照1 mL/100 g体重灌胃, 从免疫当天开始给药, 乌头汤和白虎加桂枝汤组每给药6天, 间歇1天; 甲氨蝶呤每给药3天, 间歇1天; 正常组和AIA模型组灌服等体积蒸馏水[25];给药至免疫第25天。

AIA大鼠模型的建立及造模方法  本研究使用的是完全弗式佐剂(CFA:热灭活的结核分枝杆菌酪酸的液体石蜡混悬液, Difco), 按照浓度10 mg·mL-1, 将热灭活的结核分枝杆菌铬酸加入到液体石蜡中, 用吸管吹打混悬, 置于4 ℃备用。根据预实验, 造模前2 h配制效果最佳, 造模时分别吸取造模剂, 吸取前注意吹打, 以避免沉淀导致浓度不准确[26]。每只Lewis大鼠于尾根单次皮内注射0.1 mL CFA, 建立AIA模型; 正常组注射等量生理盐水代替。除正常组外其他4组即AIA模型组、乌头汤、白虎加桂枝汤及甲氨蝶呤治疗组均建立AIA模型。在实验中观察到按照此方法建立的AIA模型, 造模后第11天开始出现临床红肿症状。

关节炎评价方法   发病率:截至取材前一天, 每组发病动物数占本组动物总数的比例(踝关节或者掌关节大于1分算发病)[26];关节炎评分:自免疫8天开始, 参考文献每2~3天进行1次临床积分(双人目测), 计算出临床积分, 每足20分制, 共80分[27, 28];后肢肿胀度:自免疫8天开始, 每日用游标卡尺测量大鼠的右后肢直径, 截止至取材前一天[29]

疼痛测定方法   大鼠的痛阈通过Von frey hair机械疼痛测试仪[30, 31]、热辐射疼痛测试仪和丙酮分别检测机械痛觉超敏(机械痛敏)、热辐射痛敏和冷触诱发痛(冷痛敏)。分别在造模前、造模后测量(每隔2天测量1次), 每次测量维持3个周期, 中间间隔5 min, 最后计算取平均值。

样品采集   造模第25天, 麻醉大鼠后, 综合考虑大鼠的关节炎评分、后肢肿胀度和痛敏等具体情况, 每组取3只大鼠, 于冰上快速准确取滑膜组织, 迅速放入Trizol中, 置于液氮冻存, 待全基因组表达谱芯片检测。

全基因组表达谱芯片检测及差异表达基因筛选   采用Agilent表达谱芯片配套试剂盒(Low Input Quick Amp Labeling Kit, One-Color, Cat.# 5190-2305, 美国Agilent Technologies公司)提取各组关节滑膜组织的RNA样本, 并用RNeasy mini kit (德国QIAGEN公司, Cat.# 74106)纯化标记后的cRNA。采用全基因组表达谱芯片(Agilent Whole Rat Genome Microarray 4×44K, Cat.# G4131F, 上海伯豪生物技术有限公司), 检测正常组、AIA模型组及各治疗组受累关节滑膜组织的全基因组表达谱。采用R软件中Limma包对芯片检测原始数据进行归一化, 并计算基因组间表达量差异倍数(fold-change)及t检验(student's t-test), 以fold change≤ 0.5或者fold change≥2, 且t检验P < 0.05为标准, 分别筛选RA发病相关基因(AIA vs Con)、乌头汤抗RA效应基因(AIA-WTD vs AIA)以及白虎加桂枝汤抗RA效应基因(AIA-BHGZD vs AIA)。

已知抗RA靶标分子的收集  已知抗RA靶标信息从以下数据库收集: DrugBank数据库(http://www.drugbank.ca/, version: 3.0)、OMIM数据库(http://www.omim.org/, last updated: October 31, 2013)、GAD数据库(Genetic Association Database, http://geneticasso-ciationdb.nih.gov/, last updated: August 18, 2013)和KEGG通路数据库(http://www.genome.jp/kegg/, last updated: October 16, 2012)。

网络构建与分析  基于String数据库(http://string-db.org/, version 10.5), 提取上述已知抗RA靶标基因、RA发病相关基因、乌头汤抗RA效应基因和白虎加桂枝汤抗RA效应基因的相互作用信息。限定物种为大鼠, 获取基因间相互作用信息, 结果保存成TSV格式, 选取相互作用可信度评分(combined score)等于或大于所有相互作用评分中位数的基因间相互作用信息, 并导入Cytoscape软件(version 3.4.0, 美国Cytoscape Consortium公司)构建网络并计算节点在网络中的连接度(degree)、紧密度(closeness)和介度(betweenness)。以上述网络拓扑特征参数的中位数作为卡值, 选取3个特征参数值均大于卡值的节点蛋白质作为关键网络靶标。采用Navigator software (version 2.2.1, 美国Bentley Systems公司)进行网络可视化。

基因功能和通路富集分析   基于GO数据库(Gene Ontology, http://www.geneontology.org/, last updated: March 28, 2018)和KEGG数据库(Kyoto Encyclo-pedia of Genes and Genomes, http://www.genome.jp/kegg/, last updated: Oct 16, 2012)利用Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery (DAVID, http://david.abcc.ncifcrf.gov/home.jsp, version 6.7)进行基因功能和通路的富集分析。

统计学分析  采用SPSS version 15.0 for Windows软件(美国SPSS Inc公司)进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示。受累关节比例的组间比较采用卡方检验; 关节炎评分和后肢肿胀度的组间比较采用非参数统计检验(Kruskal-Wallis检验); 其他指标的组间比较采用单因素方差分析。P < 0.05作为统计学具有显著性差异的标准。应用Microsoft Office 2016、GraghPad Prism 6.0和Adobe Photoshop CS6软件进行图表制作。

结果 1 乌头汤和白虎加桂枝汤均可显著降低AIA大鼠发病率, 缓解关节炎严重程度

本研究采用雄性Lewis大鼠成功构建了AIA模型。造模11天开始, AIA模型组大鼠关节红肿、畸形症状明显, 而乌头汤及白虎加桂枝汤治疗组虽也见关节红肿症状, 但严重度已明显减轻, 与甲氨蝶呤治疗组相似(图 1A)。

###P < 0.001 vs normal control group (Con); *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs AIA group Figure 1 Effects of Wu-tou decoction (WTD) and Baihu-guizhi decoction (BHGZD) on the severity of arthritis in adjuvant-induced arthritis (AIA) rats. A: Microscopic evidence of arthritis of AIA rats in different groups; B: Arthritis incidence of AIA rats in different groups; C: Arthritis score of AIA rats in different groups; D: The swelling degree of inflamed limbs of AIA rats in different groups.

结果表明, 造模25天后, 模型组的发病率100%, 而乌头汤和白虎加桂枝汤给药后发病率分别下降了33%和30% (均P < 0.05, 图 1B); 模型组的关节临床积分可达34.17, 乌头汤和白虎加桂枝汤给药后分别下降了10.78和9.17 (均P < 0.001, 图 1C); 模型组的关节肿胀度可达1.17 cm, 乌头汤和白虎加桂枝汤给药后分别下降了0.18和0.21 cm (均P < 0.001, 图 1D)。

2 乌头汤和白虎加桂枝汤均可缓解AIA大鼠疼痛作用

与正常组相比, AIA模型组大鼠机械痛阈值(图 2A)、冷痛阈值(图 2B)及热辐射反应时间(图 2C)均显著降低, 表明造模成功(P < 0.05、P < 0.01或P < 0.001);与AIA模型组相比, 各治疗组均具镇痛作用, 可不同程度提高痛阈值, 其中, 乌头汤最快发挥药效作用, 5天起就能明显降低机械痛阈值和热辐射痛阈值(P < 0.05, P < 0.001), 10天起显著降低冷痛痛阈(P < 0.01);白虎加桂枝汤降低痛阈值的起效时间虽然比乌头汤慢, 但镇痛强度与阳性药甲氨蝶呤相似且略强, 特别是对热辐射的抑制作用, 15天起比乌头汤更明显(P < 0.001)。

#P < 0.05, ##P < 0.01, ###P < 0.001 vs normal control group; *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs AIA group; △△△P < 0.001 vs AIA-WTD group Figure 2 Effects of WTD and BHGZD on 50% paw withdrawal threshold (A), withdrawal response score (B) and the latency time (C) of AIA rats.
3 RA发生相关基因及乌头汤和白虎加桂枝汤抗RA效应基因筛选

基于芯片检测结果和差异表达数据分析, 共获得637个RA发生相关基因(包括394个上调表达基因和243个下调表达基因)、568个乌头汤抗RA效应基因(包括338个上调表达基因和230个下调表达基因)和704个白虎加桂枝汤抗RA效应基因(包括363个上调表达基因和341个下调表达基因)。

4 乌头汤抗RA关键网络靶标可调节机体能量代谢和炎症-免疫相关信号通路

参考本课题组以往的研究策略[22, 26, 32, 33], 建立“乌头汤抗RA效应基因-RA相关基因”相互作用网络, 并计算网络中节点的连接度、紧密度和介度值, 筛选具有重要作用关键网络靶标, 结果共筛选到126个关键网络靶标, 其中有106个为乌头汤抗RA效应基因, 32个为RA相关基因(表 1)。

Table 1 Key network target gene list of WTD acting on RA

构建上述关键网络靶标的直接相互作用网络, 并进行通路富集分析, 结果显示, 乌头汤抗RA的关键网络靶标显著参与激素和能量代谢相关的通路, 如:发热正调控、脂肪细胞因子信号传导通路、促性腺激素释放激素(GnRH)信号传导通路、对ATP的反应、磷脂酰肌醇3-激酶活性的正调控、脂质激酶活性的正调控、脂肪酸衍生物转运等, 以及RA“炎症-免疫失衡”相关通路, 如:破骨细胞分化、NOD样受体信号通路、Toll样受体信号通路、T细胞受体信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、Jak-STAT信号通路、趋化因子信号通路、B细胞受体信号通路、抗原处理与呈递、FcεRI信号通路、天然杀伤细胞介导的细胞毒性、白细胞跨内皮迁移, 进而影响RA病程中的主要病理学改变(图 3)。

Figure 3 Interaction network of WTD key targets and rheumatoid arthritis (RA)-related genes, and its involved pathway and major pathological changes during RA progression. The square node refers to the herbal formula WTD and the round node refers to the key network targets
5 白虎加桂枝汤可矫正RA相关“炎症-免疫失衡”网络

采用同样方法[22, 26, 32, 33], 建立“白虎加桂枝汤抗RA效应基因-RA相关基因”相互作用网络, 并计算网络中节点的连接度、紧密度和介度值, 筛选具有重要作用关键网络靶标, 结果共筛选到162个关键网络靶标, 其中有132个为白虎加桂枝汤抗RA效应基因, 58个为RA相关基因(表 2)。

Table 2 Key network target gene list of BHGZD acting on RA

构建上述关键网络靶标的直接相互作用网络, 并进行通路富集分析, 结果显示, 白虎加桂枝汤抗RA的关键网络靶标显著参与RA“炎症-免疫失衡”相关通路, 如: FcεRI信号通路、Toll样受体信号通路、B细胞受体信号通路、VEGF信号通路、T细胞受体信号通路、白细胞跨内皮迁移、趋化因子信号通路、FcγR介导的吞噬作用、破骨细胞分化、天然杀伤细胞介导细胞毒性、细胞因子-细胞因子受体相互作用、血管平滑肌收缩、TGF-β信号传导途径、凝血与补体级联反应信号通路, 进而缓解RA病程中的主要病理学改变(图 4)。

Figure 4 Interaction network of BHGZD key targets and RA-related genes, and its involved pathway and major pathological changes during RA progression. The square node refers to the herbal formula BHGZD and the round node refers to the key network targets
讨论

为了开展全基因组表达谱芯片检测和网络药理学分析的整合研究, 本研究首先采用AIA大鼠模型, 对比分析了乌头汤和白虎加桂枝汤对RA的作用和机制。研究结果发现, 乌头汤和白虎加桂枝汤给药处理后, 均可显著降低AIA大鼠发病率, 改善关节红肿、畸变等症状, 二者作用相似, 但对AIA大鼠疼痛的缓解作用和特点略有不同。乌头汤能在最短时间内发挥降低机械痛敏、冷痛敏和热辐射痛敏的药效作用, 而白虎桂枝汤对热辐射痛敏干预效果虽较慢, 但作用稳定而持久。

基于上述实验研究结果, 课题组又开展了转录组学数据挖掘, 分别获得RA发生相关基因及乌头汤和白虎加桂枝汤抗RA药效相关效应基因集。进而整合网络药理学分析, 分别建立“两首方剂抗RA效应基因-RA相关基因”相互作用网络, 通过网络拓扑特征计算和功能挖掘, 发现乌头汤和白虎加桂枝汤抗RA的关键候选靶标均参与RA进展相关的“炎症-免疫”通路, 如Toll样受体信号通路、T细胞受体信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、趋化因子信号通路、B细胞受体信号通路等。这些通路在RA炎症、滑膜血管翳形成、炎性细胞浸润、血管生成、关节破坏和疼痛中发挥重要作用[34]。此外, 乌头汤抗RA的关键候选靶标还参与机体产热、产能及激素调节通路, 如发热正调控、脂肪细胞因子信号传导通路、GnRH信号传导通路、对ATP的反应、磷脂酰肌醇-3-激酶活性的正调控、脂质激酶活性的正调控、脂肪酸衍生物转运。研究表明, 这些通路直接或间接地与RA发展相关:脂肪细胞因子通过调节其他代谢或炎性因子在RA中发挥作用[35]; GnRH具有促炎作用[36]; RA巨噬细胞线粒体过度消耗氧气, 产生过多ATP, 最终导致组织破坏酶的过度产生, 使RA病症加重[37];磷脂酰肌醇-3-激酶通过激活促凋亡蛋白和半胱天冬酶级联诱导细胞凋亡[38];脂质激酶在免疫细胞的迁移和激活以及免疫调节中发挥作用[39, 40];消退素E1通过前列腺素E2的自分泌, 抑制核因子κB受体活化因子(RANKL)配体诱导的活化T细胞核因子(NFATc1)和原癌基因(c-fos)的表达, 以及白细胞介素-17 (IL-17)诱导的RANKL的表达, 从而抑制破骨细胞生成和骨吸收[41]

综上, 本研究采用AIA大鼠模型对比分析乌头汤和白虎加桂枝汤治疗RA的作用, 并利用全基因组表达芯片检测整合网络药理学分析方法, 对比分析二者抗RA机制的异同。与之前的同类研究[42]相比, 本研究从系统的角度初步揭示了乌头汤和白虎加桂枝汤抗RA的作用和机制, 这将为后续通痹经方功效的生物学内涵阐述奠定基础, 同时也为下一步“病-证-方”结合研究提供借鉴。

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