药学学报  2017, Vol. 52 Issue (7): 1146-1149   PDF    
南鹤虱中愈创木烷型倍半萜类化学成分研究
刘贵园, 温楠, 张茂生, 徐应淑, 付少彬, 肖世基     
遵义医学院药学院, 贵州 遵义 563000
摘要: 为了阐明中药南鹤虱的化学成分,采用各种柱色谱及制备液相色谱进行分离纯化,从南鹤虱中分离得到9个愈创木烷型倍半萜成分,经理化性质和波谱数据确定其结构分别为11-羟基-8β-当归酰氧基-4-愈创木烯-3-酮(1)、11-乙酰氧基-4-愈创木烯-3-酮(2)、11-乙酰氧基-8β-异丁酰氧基-4-愈创木烯-3-酮(3)、11-乙酰氧基-8β-丙酰氧基-4-愈创木烯-3-酮(4)、11-羟基-4-愈创木烯-3-酮(5)、1β-羟基-11-乙酰氧基-8β-当归酰氧基-4-愈创木烯-3-酮(6)、11-乙酰氧基-8β-当归酰氧基-4-愈创木烯-3-酮(7)、8β-羟基-11-乙酰氧基-4-愈创木烯-3-酮(8)和8β,11-二羟基-4-愈创木烯-3-酮(9)。其中化合物1为新化合物,化合物5为新的天然产物,化合物2~4为首次从该属植物中分离得到的。
关键词: 南鹤虱     野胡萝卜     伞形科     愈创木烷     倍半萜     化学成分    
Guaiane-type sesquiterpenes from the fruits of Fructus carotae
LIU Gui-yuan, WEN Nan, ZHANG Mao-sheng, XU Ying-shu, FU Shao-bin, XIAO Shi-ji     
School of Pharmacy, Zunyi Medical University, Zunyi 563000, China
Abstract: To study the chemical constituents of the fruits of Fructus carotae, silica gel column chromatog raphy and preparative HPLC were used to isolate and purify the extract of Fructus carotae. The structures of obtained compounds were elucidated on the basis of physicochemical property and spectral data. Nine guaiane-type sesquiterpenes were isolated and identified as 8β-angeloyloxy-11-hydroxy-4-guaien-3-one(1), 11-acetoxy-4-guaien-3-one(2), 11-acetoxy-8β-isobutyryl-4-guaien-3-one(3), 11-acetoxy-8β-propionyl-4-guaien-3-one(4), 11-hydroxy-4-guaien-3-one(5), 11-acetoxy-8β-angeloyloxy-1β-hydroxy-4-guaien-3-one(6), 11-acetoxy-8β-angeloyloxy-4-guaien-3-one(7), 11-acetoxy-8β-hydroxy-4-guaien-3-one(8)and 8β, 11-dihydroxy-4-guaien-3-one(9). Compound 1 is a new compound, compound 5 is a new natural product, and compounds 2-4 were isolated from this genus for the first time.
Key words: Fructus carotae     Daucus carota     umbelliferae     guaiane     sesquiterpene     chemical constituent    

中药南鹤虱(Fructus carotae), 又名鹤虱、野胡萝卜子、窃衣子、虱子草, 是伞形科植物野胡萝卜(Daucus carota L.)的干燥成熟果实, 其主要分布于江苏、湖北、四川、浙江、安徽、贵州等地; 研究表明, 中药南鹤虱有多种药理作用, 如杀虫、抗菌、抗腹泻、抗炎、镇痛、扩张冠状动脉和肝保护等[1], 可用于治疗蛔虫、痔瘘、病毒性角膜炎、钩虫病、肠道滴虫病和水肿等多种疾病[2-5]。文献报道南鹤虱中主要含黄酮[6]、香豆素和倍半萜类化合物[7]。为了进一步阐明中药南鹤虱的化学成分, 指导民间科学用药, 本研究对其乙醇提取物进行了分离纯化, 从中分离得到了9个愈创木烷型倍半萜类化合物(图 1), 通过波谱分析鉴定了它们的结构, 其中化合物1为新化合物, 化合物5为新的天然产物, 化合物2 ~4为首次从该属植物中分离得到。

Figure 1 Structures of compounds 1 -9
结果与讨论

化合物1为淡黄色油状物, HR-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 335.221 44 [M+H]+ (计算值C20H31O5+: 335.221 69), 确定其分子式为C20H30O4, 有6个不饱和度。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) (表 1)显示有6个甲基氢信号: δH 1.02 (3H, d, J = 6.6 Hz)、1.24 (3H, s)、1.27 (3H, s)、1.72 (3H, s)、1.89 (3H, s)和2.00 (3H, br. d, J = 7.0 Hz); 1个烯氢δH 6.12 (1H, m); 1个联氧氢δH 5.44 (1H, m)。13C NMR (CDCl3, 100 MHz)结合HSQC谱显示有20个碳信号, 包括1个羰基δC 208.6; 5个sp2杂化碳δC 175.2、167.0、139.6、135.0、127.4; 2个联氧碳δC 73.5、72.7; 6个甲基碳δC 28.8、28.1、8.1、16.1、20.8、22.7; 3个仲碳δC 41.5、26.0、40.1; 3个叔碳δC 51.6、48.9、34.0;通过分析核磁数据发现其可能为愈创木烷型倍半萜类化合物。HMBC谱中(图 2), 甲基氢δH 1.89 (3H, s)和甲基氢δH 2.00 (3H, br. d, J= 7.0 Hz)同时和δC 167.0、139.6、127.4的碳信号有相关, 烯氢δH 6.12 (1H, m)和这2个甲基[δC 20.8, δH 1.89 (3H, s)]、[δH 2.00 (3H, br. d, J = 7.0 Hz), δC 16.1]都有相关, 说明结构中存在当归酰氧基片段; HMBC谱中H-8和C-6、C-9、C-1' (δC 167.0) 相关, 说明当归酰氧基连在C-8位上; 12-CH3、13-CH3和C-11 (δC 72.7) 相关, 说明有羟基连在C-11位上; 15-CH3和C-3 (δC 208.6)、C-5 (δC 175.2) 有相关, H-1及H-2也和C-3、C-5有相关, 说明分子中有α, β不饱和羰基存在于C-3、C-4、C-5位上。进一步分析核磁数据发现其和已知化合物7非常相似, 区别在于化合物1中C-11位上的羟基取代了化合物7中的乙酰氧基。综上, 化合物1的结构确定为11-羟基-8β-当归酰氧基-4-愈创木烯-3-酮。

Table 1 NMR spectral data of compounds 1 -7 (CDCl3, 400/100 MHz)

Figure 2 Key HMBC correlations of compound 1
实验部分

Agilent DD2 400-MR型核磁共振仪, TMS为内标(美国Agilent公司); Thermo Scientific LTQ Orbitrap XL型高分辨质谱仪(美国Thermo公司); LC3000型高效液相色谱仪(中国北京创新通恒公司), C18 5 μm 10 mm × 250 mm半制备HPLC柱(日本YMC公司); UV3600紫外可见近红外分光光度计(日本岛津公司); 薄层色谱硅胶GF 254和柱色谱硅胶(200~300目) (中国青岛海洋化工); Sephadex LH-20凝胶(德国Merck公司)。

南鹤虱于2016年7月购自药材市场, 由遵义医学院生药学教研室聂绪强副教授鉴定为野胡萝卜(Daucus carotaL.)的干燥成熟果实, 即中药南鹤虱(Fructus carotae), 样品标本(No.20151108) 保存在遵义医学院药学院。

1 提取分离

南鹤虱干重5.0 kg, 粉碎后用乙醇回流提取4次, 每次2 h, 合并提取液减压浓缩得乙醇总浸膏420 g, 将之分散于水中, 依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取, 减压浓缩得各部分提取物。石油醚提取物再用甲醇萃取, 得到甲醇萃取物73 g, 该部位浸膏经硅胶柱色谱(80 mm × 600 mm, 石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱, 10:1, 1:10, V/V)分为8个部分: Fr.1~8。Fr.1经半制备HPLC分离(乙腈-水, 95:5, V/V, 4.5 mL·min-1)得到化合物2 (15 mg, tR = 6.1 min)。Fr.2经硅胶柱反复分离得到化合物7 (100 mg)。Fr.5经ODS柱色谱(甲醇-水, 90:10, V/V)分离后, 再经Sephadex LH-20柱色谱分离, 纯甲醇洗脱分为3部分Fr.5.1~3。Fr.5.2经半制备HPLC分离(甲醇-水, 90:10, V/V, 3 mL·min-1)得到5个亚组分: Fr.5.2A~E; 其中亚组分Fr.5.2E经半制备HPLC分离(甲醇-水, 90:10, V/V, 3 mL·min-1)得到化合物3 (11 mg, tR = 23.2 min); 亚组分Fr.5.2A进一步经半制备HPLC分离(甲醇-水, 90:10, V/V, 3.5 mL·min-1)得到化合物4 (9 mg, tR = 13.2 min); Fr.8经ODS柱色谱(甲醇-水, 90:10, V/V)洗脱分为4部分Fr.8.1~4; Fr.8.2经Sephadex LH-20 (纯甲醇洗脱)分为8部分Fr.8.2.1~8; Fr.8.2.2经半制备HPLC分离(甲醇-水, 75:25, V/V, 4 mL·min-1)得到6个亚组分Fr.8.2.2A~F; 亚组分Fr.8.2.2A进一步经半制备HPLC分离(甲醇-水, 35:65, V/V, 3.5 mL·min-1)得到化合物9 (8 mg, tR = 4.0 min); 亚组分Fr.8.2.2B进一步经半制备HPLC分离(甲醇-水, 45:55, V/V, 4 mL·min-1)得到化合物8 (10 mg, tR = 13.7 min); 亚组分Fr.8.2.2F进一步经半制备HPLC分离(甲醇-水, 55:45, V/V, 3.5 mL·min-1)得到化合物1 (13 mg, tR = 28.4 min); Fr.8.2.3经半制备HPLC分离(甲醇-水, 95:5, V/V, 5 mL·min-1)得到5个亚组分Fr.8.2.3A~E; 亚组分Fr.8.2.3A进一步经半制备HPLC分离(甲醇-水, 70:30, V/V, 5 mL·min-1)得到化合物5 (9 mg, tR = 19.4 min)和化合物6 (12 mg, tR = 28.4 min)。

2 结构鉴定

化合物1   淡黄色油状物; C20H30O4; [α]D20-21.0 (c 0.06, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 236 (2.78) nm; HR-ESI-MS m/z 335.221 44 [M+H]+ (计算值C20H31O5+: 335.221 69); 1H NMR (400 MHz, CDCl3)和13C NMR (100 MHz, CDCl3)见表 1

化合物2   白色油状物; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.27 (1H, m, H-1), 1.98 (3H, s, H-2'), 1.45 (3H, s, H-13), 1.44 (3H, s, H-12), 1.00 (3H, m, H-14); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)见表 1。经波谱数据和文献[8]对照鉴定化合物2为11-乙酰氧基-4-愈创木烯-3-酮。

化合物3   淡黄色油状物; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.27 (1H, m, H-8), 1.93 (3H, s, H-2''), 1.67 (3H, s, H-15), 1.51 (3H, s, H-13), 1.47 (3H, s, H-12), 1.14 (6H, br. s, H-3', 4'), 0.97 (3H, br. s, H-14); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)见表 1。经波谱数据和文献[9]对照鉴定化合物3为11-乙酰氧基-8β-异丁酰氧基-4-愈创木烯-3-酮。

化合物4   淡黄色油状物; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.28 (1H, m, H-8), 1.92 (3H, s, H-2''), 1.67 (3H, s, H-15), 1.49 (3H, s, H-13), 1.45 (3H, s, H-12), 1.11 (3H, t, J = 7.2 Hz, H-3'), 0.97 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-14); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)见表 1。经波谱数据和文献[9]对照鉴定化合物4为11-乙酰氧基-8β-丙酰氧基-4-愈创木烯-3-酮。

化合物5   淡黄色油状物; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1.69 (3H, s, H-15), 1.23 (3H, s, H-13), 1.22 (3H, s, H-12), 1.02 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-14); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)见表 1。和文献[10]对照经HSQC和HMBC鉴定化合物5为11-羟基-4-愈创木烯-3-酮。

化合物6   淡黄色油状物; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.07 (1H, m, H-3'), 5.41 (1H, m, H-8), 1.98 (3H, m, H-4'), 1.96 (3H, s, H-2''), 1.89 (3H, m, H-5'), 1.70 (3H, s, H-15), 1.51 (3H, s, H-13), 1.50 (3H, s, H-12), 1.07 (3H, d, J = 6.9 Hz, H-14); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)见表 1。经波谱数据和文献[11]对照鉴定化合物6为11-乙酰氧基-8β-当归酰氧基-1β-羟基-4-愈创木烯-3-酮。

化合物7   白色晶体; [α]D20 -57.3 (c 0.06, MeOH); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.05 (1H, m, H-3'), 5.41 (1H, m, H-8), 1.97 (3H, dq, J = 7.3, 1.5 Hz, H-4'), 1.94 (3H, s, H-2''), 1.87 (3H, m, H-5'), 1.68 (3H, br. s, H-15), 1.50 (3H, s, H-13), 1.48 (3H, s, H-12), 0.99 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-14); 13C NMR (CDCl3, 100 MHz)见表 1。经波谱数据和文献[12]对照鉴定化合物7为11-乙酰氧基-8β-当归酰氧基-4-愈创木烯-3-酮。

化合物8   淡黄色油状物; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.33 (1H, td, J= 8.2, 4.6 Hz, H-8), 2.10 (3H, s, H-2'), 1.73 (3H, br. s, H-15), 1.28 (3H, s, H-13), 1.26 (3H, s, H-12), 1.02 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-14); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 208.5 (C-3), 175.1 (C-5), 170.1 (C-1'), 135.1 (C-4), 74.1 (C-8), 72.8 (C-11), 51.6 (C-1), 49.0 (C-7), 41.5 (C-2), 39.8 (C-9), 33.9 (C-10), 29.0 (C-12), 28.1 (C-13), 25.7 (C-6), 23.0 (C-14), 21.8 (C-2'), 8.1 (C-15)。经波谱数据和文献[13]对照鉴定化合物8为8β-羟基-11-乙酰氧基-4-愈创木烯-3-酮。

化合物9  淡黄色油状物; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4.42 (1H, m, H-8), 1.73 (3H, br. s, H-15), 1.42 (3H, s, H-13), 1.33 (3H, s, H-12), 1.03 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-14); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 208.7 (C-3), 176.4 (C-5), 134.6 (C-4), 73.6 (C-8), 70.8 (C-11), 52.0 (C-1), 48.9 (C-7), 44.0 (C-9), 41.5 (C-2), 33.7 (C-10), 29.4 (C-12), 28.9 (C-13), 24.4 (C-6), 23.2 (C-14), 8.1 (C-15)。经波谱数据和文献[13]对照鉴定化合物9为8β, 11-二羟基-4-愈创木烯-3-酮。

参考文献
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