药学学报  2015, Vol. 50 Issue (7): 854-860   PDF    
Aurora激酶抑制剂ZLJ213抗人结肠癌的作用
周琬琪1, 张莉婧2, 杨瀚泽1, 冯志强2 , 李燕1     
1. 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所 天然药物活性物质与功能国家重点实验室, 北京 100050;
2. 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所 活性物质发现与适药性北京市重点实验室, 北京 100050
摘要:ZLJ213是一个定向合成的Aurora激酶及血管内皮生长因子受体 (vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR) 双靶点抑制剂。因此, 预计它可以同时抑制肿瘤的增殖及新生血管的生成。本研究通过观察化合物ZLJ213在体外及体内的抗肿瘤作用, 初步探讨其作用机制。研究结果显示, ZLJ213在体外对结肠癌细胞HCT116及SW48有较好的生长抑制作用, 72 h的IC50分别为0.21 μmol·L-1和0.28 μmol·L-1; 明显抑制肿瘤细胞集落的形成, 使细胞周期阻滞在G2/M期, 进而促进结肠癌细胞的凋亡。ZLJ213在100 mg·kg-1剂量下, 可明显抑制人结肠癌HCT116裸鼠异体移植瘤的生长, 抑制率达73.24% (按肿瘤体积计算)。ELISA方法检测到ZLJ213对p-Aurora A的IC50为0.258 μmol·L-1。Western blot结果表明, 0.08 μmol·L-1 ZLJ213可明显抑制p-Aurora A、p-Histone H3及p-VEGFR的表达, 同时下调周期相关蛋白Cyclin B水平, 升高凋亡相关蛋白cleaved Caspase 3和cleaved PARP的水平, 推断ZLJ213有可能是通过抑制Aurora及VEGFR的激酶活性而发挥其抗肿瘤作用。
关键词2-(间环丁甲酰氨基苯胺基)-4-(2-环丙甲酰氨基-4-甲基噻唑-5-基) 吡啶     结肠癌     抗肿瘤     Aurora激酶     血管内皮生长因子受体    
The anti-tumor activity and molecular mechanisms of an Aurora kinase inhibitor ZLJ213 in suppressing colon cancer growth
ZHOU Wan-qi1, ZHANG Li-jing2, YANG Han-ze1, FENG Zhi-qiang2 , LI Yan1     
1. State Key Laboratory of Bioactive Substances and Functions of Nature Medicines, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China;
2. Beijing Key Laboratory of Active Substance Discovery and Drug Ability Evaluation, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China
Abstract: The aim of this study is to evaluate anti-tumor activities and mechanism of a novel kinase inhibitor ZLJ213 which targeted Aurora A and vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR) in vitro and in vivo against human colon cancer. Results showed that ZLJ213 inhibited cell proliferation and induced cell cycle arrest and apoptosis of HCT116 and SW48 cell lines. In HCT116-derived xenograft, ZLJ213 dosed at 100 mg·kg-1 inhibited tumor growth by 73.24%. The IC50 of ZLJ213 on the expression of p-Aurora A was 0.258 μmol·L-1 analyzed by ELISA. Under the concentration of 0.08 μmol·L-1, ZLJ213 could inhibit the activities of Aurora A, Histone H3 and VEGFR of HCT116 and SW48 cell lines. Simultaneously, ZLJ213 induced activation of Caspase 3 and PARP cleavage. Above data suggested that ZLJ213 had the ability to inhibit cell proliferation and induce cell apoptosis both in vitro and in vivo in colon cancer, and down-regulate the expression of p-Aurora A and p-VEGFR. ZLJ213 might be a potential therapeutic agent against colon cancer.
Key words: 2-(m-cyclobutylcarbamoy1-phenylamino)-4-(2-cyclopropylcarbamoyl-4-methylthiazok-5-y1) pyridine     colon cancer     anti-tumor     Aurora kinase     vascular endothelial growth factor receptor    

Aurora家族是一类能调节细胞中心体和微管功能的丝/苏氨酸蛋白激酶, 包括Aurora A、Aurora B和Aurora C, 在细胞的有丝分裂中扮演着重要的角色。它们参与调节中心体和微管功能, 并参与了中心体的复制与分离、纺锤体微管的组装和稳定、染色体浓集和染色体中板聚合等多种事件, 对执行各种有丝分裂活动和维持基因组的完整性方面有着重要的影响, 在细胞有丝分裂的正常进程中起着非常重要的作用[1,2]。有文献[3,4,5,6,7,8,9,10,11]表明, Aurora A在结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌和胰腺癌中均有较高的表达。而Aurora A作为中心体相关激酶, 当其过表达时可导致中心体的扩增、染色体不稳定和细胞恶性转化[12]。因此, Aurora A的异常可能与恶性肿瘤的病理特点、临床分期及预后有一定相关性[13]。这也使得Aurora激酶成为抗肿瘤药物研究的重要靶点。

目前研究的Aurora激酶抑制剂主要是ATP竞争性激酶抑制剂。它们通过与ATP口袋结合, 竞争性地抑制Aurora激酶的活性, 主要分为喹唑啉、吡唑−嘧啶、吡唑并四氢吡咯和吡唑−苯并咪唑等类。CYC116是嘧啶类Aurora激酶/血管内皮生长因子受体 (vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR) 双靶点抑制剂, 它可以有效地抑制Aurora A及Aurora B的活性。有研究表明, CYC116具有广谱抗癌效果, 其对肿瘤细胞增殖的抑制活性与Aurora A和B调节相关, 如抑制Aurora激酶和Histone H3磷酸化和降低多倍性, 使细胞由于无法分裂而导致细胞的死亡。并且, CYC116可以有效地抑制VEGFR的活性, 最终影响肿瘤细胞新生血管的生成, 使其死亡[14]

ZLJ213为本所化学合成室冯志强研究员课题组设计合成的Aurora激酶和VEGFR双靶点抑制剂, 它是一个新型结构的2-苯胺基-4-噻唑基吡啶衍生物 [2-(间环丁甲酰氨基苯胺基)-4-(2-环丙甲酰氨基-4-甲基噻唑-5-基) 吡啶]。前期研究发现, ZLJ213在体外有较好的抗肿瘤活性。本实验进一步研究ZLJ213对结肠癌的抗肿瘤活性并对其机制进行初步的探讨。

材料与方法 药品及试剂

ZLJ213及CYC116由中国医学科学院药物研究所冯志强研究员课题组提供。体外实验化合物均用二甲基亚砜 (DMSO) 配制, 并以DMSO作为溶剂对照, 其终浓度小于0.1%; 体内实验用20% PEG400溶解化合物。DMEM培养基、胰酶及胎牛血清均购自Gibco公司, 青霉素钠盐及硫酸链霉素由 华北制药股份有限公司生产。溴化四氮唑蓝 (MTT)、十二烷基磺酸钠 (SDS)、过硫酸铵、丙烯酰胺、牛 血清白蛋白 (BSA)、Tween-20、二甲基苯磺酰氟 (DMSF)、焦硫酸二乙酯、甘氨酸和三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 均购自美国Sigma公司。考马斯亮蓝G250和甲叉双丙烯酰胺 (N, M'-methylene-bis-acrylamide), 购自Fluka公司。溴酚蓝由上海试剂三厂生产。BCA蛋白定量试剂盒购自北京康为世纪公司, ECL超敏显色剂购自北京普利莱公司。姬姆萨染色液购自北京 赛驰生物科技有限公司。乙二胺四乙酸二钠 (EDTA- Na2)、DMSO、无水甲醇和无水乙醇均由北京化工厂生产。小鼠抗人β-Actin抗体购自Santa Cruz公司, 其余抗体均购于美国Cell Signaling Technology公司。辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔和山羊抗小鼠二抗均购自中杉金桥生物技术有限公司。

细胞培养

人结肠癌细胞株HCT-116和SW48购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心; 细胞置于含5% CO2、37 ℃培养箱中, 用含10% 胎牛血清及100 u·mL−1青霉素、100 μg·mL−1链霉素的DMEM培养基培养。用0.25% 胰蛋白酶-EDTA消化传代。

MTT法测定肿瘤细胞存活率

取对数生长期的细胞用胰酶消化后配制成浓度为每毫升1×104的细胞悬液, 按每孔1 000个接种于96孔板, 次日加入不同浓度ZLJ213、CYC116及相应溶剂对照的新鲜培养基, 每孔加入100 μL (DMSO终浓度< 0.1%)。ZLJ213及CYC116设7个剂量组, 每组设3个平行孔。于37 ℃培养箱继续培养72 h后, 弃上清液, 每孔加入新鲜配制的含0.5 mg·mL−1 MTT的无血清培养基100 μL, 继续培养4 h后弃上清液, 每孔加入200 μL DMSO溶解甲臜沉淀, 微型振荡器振荡混匀后, 检测波长570 nm条件下测定吸光度 (A), 以溶剂处理的肿瘤细胞为溶剂对照组, 按下列公式计算药物对肿瘤细胞的抑制率, 并按照中效方程计算半数抑制浓度 (IC50)。此实验重复3次。

抑制率(%)=(A溶剂对照组A给药组)/A溶剂对照组× 100
集落形成实验

取对数生长期的肿瘤细胞, 用胰蛋白酶-EDTA消化成单细胞悬液, 镜下计数后调整细胞数至每毫升150个。将其接种于6孔板中, 每孔2 mL。培养24 h后, 加入不同浓度的ZLJ213及CYC116。空白对照、溶剂对照和化合物各剂量组均设置3个平行孔。作用14天后, 弃去培养基, 每孔用预冷的PBS洗2次, 无水甲醇固定15 min, 弃去后静置干燥, 每孔加入1 mL姬姆萨染色液染色10 min, 洗净多余染料, 室温干燥并计数。

人结肠癌HCT116裸鼠异体移植瘤实验

雌性BALB/c裸鼠购自北京华阜康生物科技有股份有限公司 (合格证号: SCXK (京) 2014-0004)。无菌条件下, 剥离传代于裸鼠腋下的HCT116结肠癌肿瘤, 去除筋膜, 剪碎瘤组织后分成大小均一的2~3 mm瘤块, 接种于BALB/c裸鼠左腋下。待肿瘤平均体积达到100~150 mm3时, 将动物随机分为4组, 分别为溶剂对照组、CYC116 50 mg·kg−1剂量组、ZLJ213 50 mg·kg−1和100 mg·kg−1剂量组。各给药组每日灌胃给药一次, 每周给药6天, 共给药16天。每周两次使用游标卡尺测量瘤体积, 计算相对肿瘤体积 (relative tumor volume, RTV = 长×宽×宽/2) 及相对肿瘤增殖率 (relative tumor growth rate, T/C)。实验结束处死动物, 剥离肿瘤并称重, 计算肿瘤生长抑制率。部分肿瘤组织于−80 ℃冰箱保存用于后续机制研究。

流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡情况

ZLJ213及CYC116处理结肠癌细胞72 h后, 将细 胞用预冷的PBS洗2遍。用胰蛋白酶-EDTA消化, 以含10% 胎牛血清的DMEM培养基终止消化。4 ℃, 800 r·min−1条件下离心5 min, 收集细胞。弃去上清液, PBS洗2遍后置于预冷的70% 乙醇中, 于−20 ℃冻存24 h以上后取出, 于4 ℃, 800 r·min−1条件下离心5 min, 彻底去除乙醇。PBS清洗2遍, 将细胞重悬, 加入PI染液 (0.1 mg·mL-1 PI, 0.02 mg·mL-1 RNase A, 1 mg·mL−1柠檬酸钠和0.3% Triton X-100), 混匀后于37 ℃避光放置0.5 h, 过300目筛, 在流式细胞仪上计数10 000个细胞, 分析细胞周期。

双抗体夹心酶联免疫分析法

(ELISA) 检测化合物对细胞内p-Aurora A的抑制活性 取包被液适当稀释的兔抗人Aurora A抗体, 加到聚苯乙烯反应板各孔中。加盖, 于4 ℃作用24 h, 次日用洗涤液充分洗涤3次, 甩干。各孔内加入4% BSA置37 ℃温箱封闭120 min。各孔内加250 μL蛋白提取液 (受试化合物设6个剂量组, 处理细胞2 h后, 收集细胞, 提取蛋白)。检测时每组设3个平行孔, 置37 ℃温箱60 min, 移去液体。用前法洗涤3次, 甩干。各孔内加1∶5 000稀释的HRP-抗磷酸化Aurora A抗体 0.1 mL, 置37 ℃温箱60 min, 移去液体, 同前法洗 3次, 甩干。各孔加TMB底物液0.1 mL, 置黑暗处20 min。各孔内加2 mmol·L-1 H2SO4 0.05 mL, 终止 反应。450 nm检测吸光度值。按以下公式计算抑制率, 并按中效方程计算EC50

抑制率(%)=(A对照组A给药组) / A对照组×100
Western blot检测分析蛋白表达

ZLJ213及CYC116处理结肠癌细胞72 h后, 提取总蛋白, 于−80 ℃储存备用。采用BCA法, 以一定浓度梯度的BSA溶液为标准, 于570 nm处测定吸光度值, 绘制标准曲线, 同时测定样品的吸光度值, 计算蛋白含 量, 之后用细胞裂解液将各样品调至相同浓度。进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白电转移[15]。将PVDF膜以含有5% 脱脂奶粉的TTBS (0.1% Tween-20, 10 mmol·L−1 Tris-HCl, pH 7.5, 150 mmol·L−1 NaCl) 室温封闭非特异结合位点2 h。将膜与稀释的一抗4 ℃孵育过夜, TTBS液洗膜3次。将膜移入二抗工作液 (用TTBS液按1∶5 000稀释HRP标记的二抗), 室温反应1 h。TTBS液洗膜3次, 加入化学发光底物反应液, ECL照相系统照相。

统计学处理

结果数据用x± s表示, 数据分析采用Student’s t-test检验。

结果 1 ZLJ213对结肠癌细胞的增殖抑制作用

ZLJ213分别处理细胞24、72 h后, 采用MTT 法进行检测。结果显示, 在24 h时ZLJ213对结肠 癌细胞HCT116及SW48无明显抑制作用, IC50 > 10 μmol·L−1。在72 h时, ZLJ213对这两株细胞有明显的生长抑制作用, 其IC50分别为 (0.21 ± 0.02) μmol·L−1及 (0.28 ± 0.03) μmol·L−1, 与阳性对照化合物CYC116作用相当 [IC50分别为 (0.38 ± 0.05) μmol·L−1及 (0.20 ± 0.02) μmol·L−1]。

集落形成实验进一步验证了ZLJ213对结肠癌细胞增殖的抑制作用。化合物作用于上述结肠癌细胞14天, 对集落形成情况进行统计。结果 (表 1, 图 1) 显示, 空白对照组的人结肠癌细胞HCT116及SW48集落形成数目较多, 每孔细胞集落数分别为 (208.00 ± 12.12) 及(314.33 ± 8.14)。溶剂对照组 (DMSO) 对细胞集落形成无明显影响; ZLJ213对集落形成有显著的抑制作用, 且随化合物浓度升高集落形成数目减少, 抑制作用增强。ZLI213对HCT116及SW48细胞集落形成抑制作用的EC50分别为0.023 μmol·L−1及0.032 μmol·L−1, 强于CYC116的半数有效浓度0.049 μmol·L−1及0.149 μmol·L−1

Table 1 The effect of ZLJ213 on the colony formation of human colon cancer cells

Figure 1 The effect of ZLJ213 on the colony formation of colon cancer cells. The HCT116 and SW48 cells were assayed for their ability to form colonies following 24 h of treatment with indicated concentration of ZLJ213 or control in DMSO followed by 14 days of culture in full-serum media. Colonies were counted as described in Methods. n = 3, x± s. **P < 0.01, ***P < 0.001 vs control group
2 ZLJ213对人结肠癌HCT116裸鼠异体移植瘤的生长抑制作用

ZLJ213可显著抑制裸鼠移植瘤HCT116的生长, 且具有较好的剂量效应关系。如图 2A、2B和表 2所示, 在50 mg·kg−1及100 mg·kg−1剂量下, 其对肿瘤生长的抑制率分别为34.45% 和70.67% (按肿瘤重量计算) , RTV分别为74.85% 和32.65%; 而阳性对照化合物CYC116在50 mg·kg−1剂量下, 其抑制率为39.76% (按肿瘤重量计算), RTV为69.53%。上述结果提示, 在相同剂量下, ZLJ213与CYC116的抑制作用相当, 但是在此剂量下, CYC116处理组动物体重显著下降, 由给药前的 (15.7 ± 0.4) g下降到 (12.8 ± 1.4) g , 而ZLJ213在相同剂量下对动物体重无明显影响, 仅在100 mg·kg−1处理组的动物体重出现一定程度的降低 (图 2C和表 2)。

Figure 2 The antitumor activity of compounds on the colon cancer HCT116 xenograft model. Activity of ZLJ213 was determined in HCT116 human tumor xenografts of nude mice. Animals were randomly divided into four groups when tumor volume reached 100−150 mm3. The dosage of ZLJ213 was 50 and 100 mg·kg−1. Each treatment arm involved 5 independent tumor-bearing mice representing the same xenograft line. A: Mean RTV ± SD at given time-points for HCT116 xenograft (RTV, relative tumor volume = Vt /V0). B: The corresponding tumor weight for HCT116 xenografts. C: Mean body weights shown on graphs were mean ± SD

Table 2 The antitumor activity of compounds on the colon cancer HCT116 xenograft model. P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs control group
3 ZLJ213HCT116SW48结肠癌细胞周期及细胞凋亡的影响

采用流式细胞术研究ZLJ213及CYC116对结肠癌细胞周期及细胞凋亡的影响 (图 3)。ZLJ213处理HCT116和SW48细胞72 h后, 随着加药剂量的增加,G1期细胞数量减少, 而G2期细胞增加, 同时凋亡细胞所占的比例亦剂量依赖的升高。在HCT116细胞 中, 16和80 nmol·L−1剂量作用下, G2期的细胞百分比分别为 (9.53 ± 0.68) % 和 (23.58 ± 0.45) %, 凋亡细胞百分比分别为 (28.58 ± 0.91) % 和 (38.61 ± 1.60) %。在SW48细胞中, 在80和400 nmol·L−1剂量下, G2期的细胞百分比分别为 (8.40 ± 0.64) % 和 (9.14 ± 0.88) %, 凋亡细胞百分比分别为 (30.14 ± 0.91) % 和 (45.30 ± 1.44) %, 因此可以看出, ZLJ213能够有效地将结肠癌细胞阻滞在G2期, 并促进结肠癌细胞的凋亡。

Figure 3 The effect of ZLJ213 on the cell cycle and apoptosis of HCT116 cells (A and B) and SW48 cells (C and D). ZLJ213 treatment induced apoptosis of HCT116 and SW48 cells. Cells were incubated with ZLJ213 for 72 h, apoptotic cells represented PI positive cells as determined by flow cytometry. Quantitation of the PI staining data was presented as the percentages of the cell distribution. n = 3, x± s. P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs control group
4 ZLI213对结肠癌HCT116SW48细胞内相关蛋白表达的影响

细胞增殖的失控和细胞凋亡的抑制是肿瘤发生发展的重要原因。这两者共同引起体内细胞动态平衡的破坏[16]。 ZLJ213为靶向合成的Aurora激酶和VEGFR双靶点抑制剂, 因此, 检测相关靶点及细胞凋亡周期相关蛋白的表达变化是研究该化合物作用机制所必需的。

采用ELISA方法对靶点Aurora A的激酶活性进行检测发现, 化合物ZLJ213作用细胞2 h后, 细胞内p-Aurora A的表达显著降低, IC50为 (0.240 ± 0.001) μmol·L−1, 作用与CYC116的 (0.265 ± 0.091) μmol·L−1相当。

ZLJ213处理HCT116细胞72 h后, 在80.0 nmol·L−1剂量下, 可明显抑制p-Aurora A及p-Histone H3的表达, 而对Aurora A的表达无明显影响 (图 4A)。在16.0和80.0 nmol·L−1处理的细胞中, 可见p-VEGFR2的表达水平显著降低。同时, 可以剂量依赖性地抑制Cyclin B及PCNA的表达, 并上调凋亡相关蛋白cleaved Caspase 3的表达 (图 4B)。

Figure 4 The effect of ZLJ213 on the related protein expression of HCT116 (A, B) and SW48 (C, D) cells by Western blot analysis

在SW48细胞中, 观察到与HCT116细胞相似的结果。即在ZLJ213处理SW48细胞72 h后, ZLJ213可以抑制p-Aurora A、Aurora A、p-Histone H3、p-VEGFR2和VEGFR2的表达 (图 4C)。且Cyclin B、PCNA、Caspase 3和Bcl-2呈剂量依赖性地降低, 而cleaved Caspase 3、cleaved PARP及Bax均有不同程度的升高 (图 4D)。通过以上结果推断, ZLJ213有可能是通过影响Aurora A及VEGFR的激酶活性而引起细胞周期阻滞, 诱导肿瘤细胞发生凋亡, 从而抑制结肠癌细胞的增殖。

讨论

结肠癌是发生于结肠部位的常见消化道恶性肿瘤, 为世界范围内诊断的第三大常见癌症。发病率在世界男性肿瘤中排第二位, 女性中排第三位[17]。2012年新增结肠癌病例为140万, 约占总发病率的9.7%。结肠癌具有发病隐匿、进展快、病程短、生存期短和恶性程度高等特点, 发现时大多已为晚期, 病死率高, 故临床治疗难度大[18]。因此, 寻找有效的治疗结肠癌的方法及药物具有重要的意义。

细胞周期是一个经过严格调控、高度有序的过程, 细胞的有丝分裂对肿瘤细胞扩增起着十分重要的调节作用。而有丝分裂的偏差往往会导致基因组的不稳定, 进而导致肿瘤的发生[19]。Aurora A在有丝分裂中发挥着重要的作用, 它是一个中心体相关激酶, 当其过表达时会使中心体扩增, 染色体不稳定, 并使细胞向恶性转化。Aurora A定位在20q13.2, Aurora B定位在17p13, 都在易位、缺失或扩增较活跃的区域, 说明它们具有天然的不稳定性。而这两个染色体区在结肠癌的肿瘤组织及细胞株中普遍存在扩增[20], 因此, Aurora激酶的过表达是结肠癌发生发展的一个因素, 抑制其活性可以达到抑制肿瘤的效果[12]。由于其在细胞周期中的重要作用及其在肿瘤细胞中高表达的特点, 使得Aurora A成为肿瘤靶向治疗的一个重要靶点。目前已经有许多小分子Aurora激酶抑制剂如VX-680、AZD1152和CYC116等化合物进入了临床I期或II期评价[21, 22], 而化合物Alisertib (MLN8237) 已经进入了临床III期评价。本研究证明ZLJ213在体外对结肠癌细胞具有较好的抗肿瘤作用, 且活性与CYC116相当。

ZLJ213对人结肠癌细胞HCT116裸鼠异体移植瘤的生长具有明显的抑制作用, 在相同剂量下, 与阳性化合物CYC116的抑制效果相当, 但毒性明显低于CYC116。ZLJ213为吡啶类Aurora激酶抑制剂, 在结构上与CYC116同属于鸟嘌呤或腺嘌呤类似物。CYC116可以同时抑制Aurora A及Aurora B的活性。有文献[23]表明, Aurora激酶抑制剂常见的不良反应包括伴或不伴发热的中性粒细胞减少、胃肠道反应 (如恶心、呕吐、厌食、便秘和腹泻)、口腔炎和疲劳等。这可能是由于正常增殖的细胞群会对Aurora B的抑制剂起反应。因此推测CYC116的不良反应可能是由于抑制了Aurora B的活性引起的。ZLJ213为定向合成的Aurora A抑制剂, 其毒性小于CYC116可能与其对Aurora B的抑制活性较弱有关。

Histone H3是Aurora A和B激酶的磷酸化底物, 可通过观察其磷酸化程度间接反映Aurora A和B的活性[24]。ZLJ213可以抑制p-Aurora A及p-Histone H3的表达, 表明ZLJ213可明显抑制Aurora激酶的活性。同时, ZLJ213可以剂量依赖性地抑制血管内皮生长因子受体VEGFR2及p-VEGFR2的表达, 因此, ZLJ213可在抑制结肠癌细胞增殖的同时, 通过抑制肿瘤组织内血管的生成, 起到抑制结肠癌细胞生长的作用。进一步的研究表明, ZLJ213可以通过将结肠癌细胞阻滞于G2/M期, 进而诱导结肠癌细胞的凋亡。其机制与凋亡相关蛋白Caspase 3、PARP、Bax、Bcl-2及周期相关蛋白Cyclin B有关。

随着对Aurora激酶的深入研究, 其作为抗肿瘤的靶点已被国内外许多学者所认同。虽然Aurora激酶抑制剂仍存在一些问题, 如体外肿瘤抑制活性较好, 在人体试验中也存在一定的抗肿瘤活性, 但达不到理想的治疗效果, 而且存在一些毒性反应[14]。但随着研究的深入, Aurora激酶抑制剂的临床地位依然是值得肯定的。ZLJ213作为Aurora激酶及VEGFR双靶点抑制剂, 具有较强的体内外抗肿瘤活性, 可以口服给药, 在临床上患者的依从性较好, 并且毒性相对较低。相信经过结构改造, 进一步增强其抗肿瘤活性, 将具有开发成有效抗肿瘤药物的良好前景。

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