2. 中国食品药品检定研究院, 北京 100050
2. National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China
佛手药材来源于芸香科植物佛手Citrus medica L. var. sarcodactylis(Noot.)Swingle的干燥果实,生长于热带、亚热带,在我国栽培和药用历史悠久。本草典籍谓其味辛、苦、酸,性温,入肝、胃经,有疏肝理气、和胃止痛之功效[1-4]。佛手不仅具有较高的药用价值,而且具有观赏性和经济效益,其果实形状特异并具有芳香气味,被用于园林美化和制作盆景;提取的挥发油可用于食品和化妆品;果实还可以加工成糖果蜜饯等多种果脯和保健食品。随着对佛手的深层开发利用和栽培引种技术的发展,我国佛手的分布区域日益广泛,生境也各不相同[5-9]。
佛手因产地不同,其商品规格有广佛手、川佛手、云佛手、金佛手之分:“广佛手”主产于广东肇庆、高要,广西凌乐、灌阳、大新等地,“川佛手”主产于四川合江、江津、沪县、犍为等地,“云佛手”主产于云南易门、宾川、新平、峨山等地,“金佛手”主产于福建永春、福安、莆田、闽侯、兰溪等地及浙江金华,亦有将“川佛手”与“云佛手”统称为“川佛手”[9-12]。
佛手在使用的历史中,形成了不同主产区。典籍最早记载佛手的产地为两广地区[1],传统认为广东佛手为道地药材,也有人认为四川佛手品质更佳[12-13]。这些不同产区的佛手药材在化学成分上是否存在差异性,目前尚无相关的报道。
本课题组较全面地收集了全国各主要产区的佛手样品,采用HPLC测定佛手中主要指标性成分橙皮苷[14-17]的含量,同时确定特征图谱,构建多元统计数学模型,更全面地分析产地对佛手化学成分的影响,为评价不同产地佛手的品质提供参考。
1 仪器与试药沃特世公司Waters e2695高效液相色谱仪,PDA检测器;梅特勒-托利多公司Mettler Toledo分析天平(精确度0.000 1 g);常州国华电器有限公司HH-4数显恒温水浴锅;昆山禾创超声仪器有限公司KH-400KDB型高功率数控超声波清洗器。
乙腈、甲醇为色谱纯,冰醋酸为分析纯,水为纯化水。
橙皮苷对照品(批号110721-201316)购自中国食品药品检定研究院。
收集了18批产自广东、广西、福建、四川、云南、浙江的佛手药材样品,每个产地3批。
2 方法与结果参考文献资料[17-21],建立同时测定佛手中橙皮苷含量和佛手特征图谱的方法,将色谱图导入ChemPattern软件,建立相似度二维模型和多元统计三维模型进行差异分析。
2.1 对照品溶液的制备取橙皮苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液,即得。
2.2 供试品溶液的制备分别将不同产地佛手药材粉碎,过5号筛,取约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称量,加热回流1 h,放冷至室温,再称量,用甲醇补足减失的量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3 色谱条件采用阿克苏诺贝尔公司Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.5%醋酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~3 min,5%A;3~8 min,10%A;8~48 min,27%A;48~63 min,55%A;63~68 min,100%A;68~75 min,5%A),检测波长284 nm,柱温25 ℃,流速1.0 mL·min-1,进样量10 μL。
2.4 含量测定结果按上述方法测定18批不同产地的佛手样品,外标法计算,对照品及样品对比图见图 1,橙皮苷含量结果见表 1。
分别将18批样品的HPLC色谱图导入Chem Pattern色谱分析软件,结果见图 2;进行共有峰分析,得到共有模式色谱图,确定6个共有峰,见图 3。18批样品与共有模式色谱图的相似度分析结果见图 4。浙江、福建、四川、广东、广西产的佛手与共有模式比较,相似度在0.85以上,云南产佛手与共有模式比较,相似度在0.80以下。
由图 4可见,云南佛手明显离群,与四川佛手差异较大,因此将两者合称为“川佛手”是不合适的。进一步分析发现,云南佛手中未检出共有峰峰6,且各主要成分色谱峰之间的峰面积相关系数也与其他产地有较大差异,详见图 5。
结合橙皮苷含量的差异,进一步构建三维数学模型,进行多元统计分析(单项多元方差分析),详见图 6。
由图 6可见,广东、广西、四川产佛手距离较近。橙皮苷含量最低的浙江佛手和福建佛手在建立的模型中与广东、广西、四川的样品相距较远;同时云南佛手虽然橙皮苷含量较高,但是由于特征峰的差异性,也与广东、广西、四川的样品相距较远。
3 讨论《中华人民共和国药典》(2015年版)收载了佛手的橙皮苷含量测定方法[17],本实验在药典方法的基础上进行了改进,改变流动相体系,可同时测定橙皮苷含量和特征图谱。结果表明,本方法的专属性强,精密度好,橙皮苷质量浓度在1.928~60.70 μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 5),平均回收率为97.8%(RSD=1.3%,n=6),含量测定的重复性实验结果的RSD为0.8%;特征峰的相对保留时间和相对峰面积稳定,重复性好。
本文引入数学模型多元统计分析方法,对不同产地佛手的差异性进行比较,结果广东、广西、四川佛手橙皮苷含量较高且HPLC特征图谱较为相似;浙江、福建佛手与以上产地佛手的HPLC色谱相似度较高,但橙皮苷含量较低;云南佛手在HPLC色谱图上体现出与其他产地较大的差异性,其种质资源有待进一步研究。本研究表明,不同产地的佛手化学成分有一定的差异性。
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