鸡球虫病是一种严重危害家禽养殖的肠道寄生虫病。鸡球虫在国内外公认的有7个种，其中, 柔嫩、毒害、巨型和堆型艾美耳球虫的感染性比较强^[1]。临床上往往是几种球虫的混合感染，感染后引起鸡肠道组织损伤，导致消化功能紊乱、脱水、失血并继发感染细菌性疾病^[2-3]。以往抗生素和化学合成抗球虫药物是防治鸡球虫病的主要途径，随着球虫耐药性和药物残留的日趋严重，以及绿色健康养殖的逐步实施，迫切需要研发新型抗球虫药物^[4-5]。

中药常山为虎耳草科植物的干燥根，别名黄常山、鸡骨常山、鸡骨风、风骨木等，分布于陕西、湖南、甘肃、安徽、湖北等地^[6-8]。《本草纲目》中记载：“常山有截痰截疟之功”，在民间主要用于治疗疟疾。现代研究表明，常山具有抗疟疾、抗球虫、抗肿瘤、抗瘢痕等广泛的药理活性^[9]。利用现代中药提取分离技术，从中药常山中将有效成分常山碱充分提取出来，制成常山口服液，并用于防治鸡球虫病。依据农业农村部第1596号公告《兽用中药、天然药物临床试验技术指导原则》和第2337号公告《兽药临床试验质量管理规范》的相关规定，开展试验感染鸡治疗效果和临床病例治疗效果的分析，旨在验证常山口服液的抗球虫疗效、最佳给药剂量和给药时间，为今后申报新兽药和防治鸡球虫病奠定基础。

1 材料与方法 1.1 试验药物

常山口服液中试产品(500 mL·瓶^-1，批号15090501)，石家庄正道动物药业有限公司生产，推荐剂量是5 mL·L^-1饮水给药。百球清(妥曲珠利溶液，含量2.5%)为对照药物，购自拜耳(四川)动物保健有限公司，按1 mL·L^-1饮水给药。

1.2 试验虫株

柔嫩艾美耳球虫广东株(1996年分离自广东花都)，由中国农业科学院兰州兽医研究所禽病研究室保存和提供^[10]。

1.3 试验动物和饲料

1日龄AA黄羽肉鸡，购自兰州市某种鸡场，饲养于无鸡球虫污染笼舍内；饲料为肉小鸡全价料，不含任何抗球虫药物，购自兰州养动力饲料有限公司。

1.4 试验感染鸡治疗效果分析

1.4.1 动物分组与处理 　　1日龄健康雏鸡，在无球虫感染条件下饲养至16日龄，随机分为6组，包括健康对照组、感染对照组、妥曲珠利对照组、常山口服液低中高剂量组，每组20只鸡。除健康对照组外，其余各组每只鸡经口感染6×10⁴个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊(攻虫前2个月健康雏鸡复壮，以保证虫株感染活力)，攻虫24 h后开始给药，每天观察各组试验鸡的精神状态、饮食饮水和血便情况。如有死亡鸡，应及时进行解剖，观察各脏器病理变化。具体分组与处理见表 1。

1.4.2 抗球虫效果评判标准 　　试验前(16日龄)和试验结束(24日龄)，每组鸡称重，计算平均增重。试验结束(24日龄)全部捕杀，收集盲肠，纵向剪开后对每对盲肠按Johnson与Reid(1970)的方法进行病变计分，收集盲肠内容物进行球虫卵囊计数。根据各组试验鸡的相对增重率、存活率、病变值和卵囊值，按照美国Merck公司的计算公式，计算抗球虫指数(ACI)^[11-13]。

ACI=(相对增重率+存活率)×100 -(病变值+卵囊值)

以ACI来判定药效：ACI＜120为无效；ACI=120~160为低效；ACI=160~180为良好；ACI＞180为高效。

1.5 临床病例治疗效果分析

1.5.1 动物分组和处理 　　选取自然感染球虫的病鸡开展本试验。经流行病学调查、临床诊断、死亡鸡剖解、粪便中球虫卵囊检查诊断为鸡球虫病。所有病例的畜主均同意参加试验并按照本方案进行治疗。依据常山口服液抗球虫预试验结果，确定其临床推荐剂量为5 mL·L^-1饮水^[14]，具体分组与处理见表 2。

1.5.2 疗效判定 　　根据以下标准进行判定。

治愈：用药后临床症状消失，血便停止，精神及采食量恢复正常，7 d后粪检无卵囊，判为治愈，每组治愈鸡数占每组试验鸡总数的百分率为治愈率。

有效：用药后临床症状减轻，血便减少，精神及采食量基本恢复正常判为有效，每组治愈鸡数加上有效数占每组试验鸡总数的百分率为有效率。

无效：用药后临床症状未见任何减轻，血便没有减少，甚至加重或死亡，判为无效。

1.5.3 组织病理学检查 　　试验结束后，常山口服液组、妥曲珠利组和感染对照组经尸体解剖学检查的部分试验鸡，采集盲肠，10%甲醛溶液固定，制作石蜡组织切片，HE染色，观察组织病理学变化，在显微镜下观察鸡盲肠上皮细胞形态变化、炎症细胞浸润等情况，并和健康对照组进行比较。

2 结果 2.1 试验感染鸡治疗效果分析

2.1.1 临床症状 　　结果显示，感染对照组试验鸡攻虫后4~5 d，开始出现临床症状，包括精神不振、饮食欲减退、羽毛蓬乱，病鸡排出血便。但常山口服液中、高剂量组和妥曲珠利对照组试验鸡临床症状明显减轻或消失，无血便排出。健康对照组试验鸡精神状态和饮食均正常。

2.1.2 盲肠剖解变化 　　结果显示，感染对照组试验鸡盲肠明显肿胀，内容物中血液较多。常山口服液中、高剂量组和妥曲珠利对照组试验鸡盲肠肿胀明显减轻，内容物中血液明显减少。健康对照组试验鸡盲肠无肿胀和内容物无血液(图 1)。

2.1.3 抗球虫效果 　　结果显示，常山口服液中、高剂量组试验鸡的相对增重率(101.6%和119.8%)和存活率(100%)均高于妥曲珠利组和攻虫不给药组。但妥曲珠利组试验鸡的病变值(22.5)和卵囊值(10)均低于常山口服液各剂量组。通过相对增重率、存活率、病便值和卵囊值计算抗球虫指数，结果表明, 常山口服液中、高剂量组抗球虫指数分别为166.6和173.8(表 3和4)。

2.2 临床病例治疗效果分析

2.2.1 病例纳入情况 　　试验鸡品种：清远麻鸡，存栏量：20 000羽，试验地点：云南省石林县板桥。临床症状：51日龄鸡群有血便，剖检盲肠内有血液，小肠有点状出血，肠管充气肿胀，51日龄开始每天死亡10~20只。实验室检查：病鸡粪便中检出大量鸡球虫卵囊(图 2)。

2.2.2 临床病例治疗效果分析 　　参照鸡球虫病诊断标准，将“2.2.1”中发病初期的病鸡随机挑出1 000只(51日龄)，开展本试验，试验分组和处置见表 2。结果表明，常山口服液和妥曲珠利给药后第1天，试验组鸡每天死亡2~3只；给药后第2天，试验组鸡死亡停止，血便明显减少，采食量提升；给药后第3天，试验鸡血便排出停止；给药后第4天，病鸡临床表现基本恢复正常。空白对照组病鸡死亡数随时间呈上升趋势。具体治疗结果见表 5。

2.2.3 盲肠组织病理学结果 　　结果表明，健康对照组鸡盲肠结构完整，盲肠上皮细胞形态良好，可见大量杯状细胞。感染对照组鸡盲肠肌肉厚度和隐窝深度增加，盲肠上皮细胞内可见较多球虫配子或卵囊，组织内有大量炎性细胞和红细胞浸润，杯状细胞明显减少。常山口服液组和妥曲珠利组鸡盲肠结构基本完整，隐窝深度、肌层和浆膜厚度与健康组比较增加不明显，杯状细胞数量减少(图 3)。

3 讨论

随着现代肉鸡养殖业规模化、集约化的快速发展，球虫病的危害也日益加重，其中柔嫩、堆型、巨型艾美耳球虫危害最为严重。球虫病的暴发会导致鸡生长受阻、饲料转化率降低和肉蛋品质下降，全世界每年由于该病造成的经济损失高达30亿元^[15-16]。目前鸡球虫病的防治主要依靠化学合成药物(如妥曲珠利、地克珠利、常山酮、磺胺类药等)，以上药物的使用降低了鸡球虫病的危害，但也引起耐药虫株的不断出现，同时药物残留导致的食品安全问题也引起了人们的高度关注^[17-18]。

中药防治鸡球虫病的作用机理与西药不同，西药是直接抑杀球虫，而对于球虫引起患病鸡肠道损伤和全身临床症状无明显的治疗作用，而中药是依据中兽医药理论，在对球虫病辩证的基础上进行合理组方，不仅可以有效抑杀球虫，还能修复损伤的肠道，减轻临床症状^[19-20]。结果表明，中药复方(由常山、槟榔、地榆、黄芩等组成)高、中剂量对鸡球虫病有良好的预防效果，抗球虫指数分别为183.01、183.83^[21]。自拟方剂(由青蒿、常山、仙鹤草和地榆组成)同样对鸡球虫病有良好的治疗效果，抗球虫指数为170.41，且能有效改善球虫病鸡受损的盲肠组织，加快其肠道功能恢复^[22]。常山红藤汤(由常山、红藤、白头翁、柴胡等组成)对兔球虫病有较好的治疗效果，给药组病兔临床表现、肠道病变值、每克粪便卵囊数均明显低于阳性对照组，平均增重明显高于阳性对照组^[23]。

常山具有良好的抗球虫效果，主要有效成分为常山碱甲和乙；但目前国内外对于常山碱的分离纯化、抗球虫作用及机理研究甚少。养鸡生产中有直接应用常山原粉的防治方法，但鸡不能很好地消化纤维素，导致常山碱不能被充分吸收利用，抗球虫效果大幅降低^[24-25]。本课题组利用现代中药提取分离技术，将常山碱从中药常山中充分提取出来，制成口服液制剂，具有易吸收、起效快和疗效好的特点，便于现代规模化养鸡场临床给药，更好发挥抗球虫作用^[26]。

本试验结果表明，常山口服液中、高剂量组具有良好的抗球虫效果，抗球虫指数分别为166.6和173.8；且药物对试验鸡具有较好的促生长效果(相对增重率为101.6%、119.8%)。在临床实践中，鸡球虫病多是几种球虫混合感染，如柔嫩艾美耳、毒害艾美耳混合引起的球虫病，临床上病鸡排出番茄样粪便或血便，剖解盲肠和十二指肠均有出血点。临床病例治疗效果分析表明，常山口服液以5.0 mL·L^-1饮水给药，连续给药4 d，可有效治疗自然感染球虫的病鸡，治愈率和有效率分别为80.7%和96.7%；病鸡一般给药3 d即可治愈，为了巩固疗效，临床上多给药1 d，共计4 d，取得了良好的防治效果，后期随访无复发。组织病理学结果发现，感染对照组鸡盲肠上皮细胞内可见较多球虫配子或卵囊，组织内有大量炎性细胞和红细胞浸润。但常山口服液组和妥曲珠利组鸡盲肠结构基本完整，隐窝深度、肌层和浆膜厚度基本正常。

综合分析以上试验结果，发现常山口服液和妥曲珠利防治鸡球虫病各有所长，前者在促增重方面略胜一筹，这可能和其能够提高机体免疫力有关^[27]；后者在减轻鸡盲肠病变和减少球虫卵囊方面效果较好(病变值和卵囊值分别为22.5和10.0)。但妥曲珠利是化学合成药物，在临床上使用已有几十年，临床上耐药性和药物残留比较严重，本试验中抗球虫指数为154.4，可能和其产生耐药性有关。

4 结论

常山口服液按照5.0 mL·L^-1饮水给药，连用4 d，对人工感染和自然感染的鸡球虫病有较好的治疗效果和促增重作用。常山口服液作为一类纯中药制剂，具有绿色环保、抗球虫疗效好等特点，为进一步研发新药提供了重要的数据支撑。