2. 韶关学院英东生物与农业学院, 韶关 512005;
3. 黄埔区动物卫生监督所, 广州 510799
, SU Yiman1, YE Jiali1, ZHANG Xinting1, PANG Xiaoyue1, WANG Rongmei2, XIE Zimao3, ZHANG Hui1, TANG Zhaoxin1, SU Rongsheng1
2. Yingdong College of Biology and Agriculture, Shaoguan University, Shaoguan 512005, China;
3. Huangpu District Animal Health Supervision Institute, Guangzhou 510799, China
急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)是由细菌、病毒和其他有毒物质引起的一种肾疾病[1]。细菌感染引起的急性肾损伤是家禽养殖业常见的疾病之一，以肾肿大和肾功能障碍为主要特征，严重威胁着家禽养殖业的发展[2]。禽病原性大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli)是引起细菌性感染性疾病的重要病原菌，各日龄段的鸡都可能被大肠杆菌感染，其中以1个月内的雏鸡更易感[3]。抗生素是目前治疗细菌性疾病的主要药物，然而，抗生素的滥用易使细菌产生耐药性，加之我国养殖行业减抗、限抗、替抗政策的实施，寻找新的天然产物来替代抗生素的工作显得更加迫切。
脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是大肠杆菌细胞壁的重要组成成分，当细菌死亡时释放大量LPS并可引起肾急性损伤[4]。研究表明，LPS可以激活小鼠心肌细胞凋亡和抑制自噬，从而引起心功能障碍[5]。细胞凋亡是机体组织进行自我更新的一种程序性死亡方式，但过度的细胞凋亡是疾病发生的基础，LPS引起AKI和细胞凋亡有密切关系[6-7]。自噬是细胞维持稳态的一种方式，细胞通过自噬溶酶体途径降解受损细胞器[8-9]。自噬和凋亡往往相伴出现，相互影响并参与调控疾病的发生发展[10]。
积雪草酸(Asiatic acid，AA)具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等生物活性功能[11-13]，在许多疾病的预防和治疗中受到广泛关注。研究发现，AA能够通过减少视网膜细胞凋亡预防青光眼[14]；AA还可通过减少内质网应激和触发自噬改善急性肝损伤[15]。然而，AA对LPS引起肉鸡AKI中细胞凋亡和自噬的影响尚未见报道。因此，本研究拟通过肉鸡腹腔注射LPS构建AKI模型，旨在探讨AA对LPS诱导肉鸡AKI的预防效果并从细胞凋亡和自噬角度来阐明其具体作用机制。
1 材料与方法 1.1 试验设计从新兴大华农公司购买40只1日龄健康雄性黄羽肉仔鸡(SCXK 2018-0019)，经适应性饲养至7日龄时，随机分为4组，即空白对照组(Con)、LPS诱导的肾损伤模型组(LPS)、AA低剂量组(LPS+AA 15 mg·kg-1)和AA高剂量组(LPS+AA 30 mg·kg-1)。基于前期的研究成果[16]，本研究选择了15和30 mg·kg-1剂量的AA进行动物试验。AA悬浮于羧甲基纤维素钠悬浮液中，AA处理组的肉鸡从7日龄开始，每日用相应剂量的AA灌胃14 d，LPS组和AA处理组的肉鸡在第16、18和20日龄时腹腔注射0.5 mg·kg-1 LPS构建急性肾损伤模型，Con组注射相应剂量的生理盐水，在第20日龄腹腔注射LPS 12 h后处死肉鸡并采集肾组织样品，Con组和LPS组肉鸡灌胃相等剂量的羧甲基纤维素钠悬浮液。本次动物试验经华南农业大学动物使用伦理委员会批准(2021b112)。
1.2 试验试剂与仪器脂多糖(E.coli 055:B5 L2880)、多聚甲醛固定液购自美国Sigma公司；积雪草酸(98%)购自上海阿拉丁有限公司；羧甲基纤维素钠购自北京索莱宝；组织包埋块、电泳液粉末和转膜液粉末购自武汉塞维尔有限公司；RNA逆转录试剂盒(R312-01)、qPCR荧光染料Master Mix (Q711-02)购自南京诺唯赞有限公司；TRIzol裂解液购自日本TaKaRa；MDA、GSH-Px、SOD、CAT检测试剂盒，RIPA裂解液和PMSF抑制剂购自上海碧云天；辣根过氧化物酶标记二抗购自康为世纪生物公司；Beclin1、ATG5、LC3、P62抗体购自武汉三鹰生物有限公司；BAX、Bak1、BCl2抗体由上海Abmart提供；P53、Cleaved-Caspase3/Caspase3抗体购自沈阳万类生物公司；GAPDH抗体购自南京巴傲得生物公司。
酶标仪(Elx808)购自美国Bioteck公司；微量紫外分光光度计(Nanodrop-2000)购自美国Thermo Fisher；基因扩增仪(MyCycler Thermal)购自美国Bio-Rad公司；荧光定量PCR仪(LightCycler480)购自美国Roche公司；光学显微镜(DM1000)、正置荧光显微镜(DMi8)、组织切片机(RM2235)购自德国Leica；低温高速离心机(D3024R)购自美国SCILOGEX公司；SDS-PAGE蛋白电泳仪(BG-power 600)购自上海天能公司。
1.3 组织病理学染色肾组织包埋由武汉塞维尔提供服务，使用切片机将组织包埋块切成4 μm的薄片并黏附在病理级载玻片上，37 ℃烘烤过夜。随后55 ℃融蜡1 h，经透明、梯度酒精脱水后进行苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin, HE)染色，随后在光学显微镜下观察肾组织的病理变化。
1.4 肾组织中氧化-抗氧化指标的测定肾组织在匀浆液中匀浆，12 500×g条件下离心10 min后取上清液，经BCA试剂盒测定蛋白浓度；检测步骤根据碧云天氧化应激试剂盒说明书严格进行操作，采集数据后进行统计分析。
1.5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)称取20 mg肾组织放入含有500 μL TRIzol裂解液的EP管中，手动匀浆后12 500×g离心10 min，并按照TRIzol试剂盒的步骤提取肾组织总RNA；将提取后的RNA在微量紫外分光光度计测定浓度和纯度，并稀释至500 ng·μL-1; 按照RNA逆转录试剂盒说明书将RNA逆转录成cDNA，稀释10倍后用于后续试验。从NCBI获取引物序列，引物序列由广州擎科生物公司合成；引物序列见表 1，以GAPDH作为管家基因。按照cDNA 2 μL，上、下游引物各0.8 μL，DEPC水6.4 μL和荧光染料Master Mix 10 μL的体系混合后经过实时荧光定量PCR仪检测其基因表达水平；qRT-PCR的反应条件为预变性95 ℃ 30 s；95 ℃反应10 s，60 ℃反应30 s，反应循环40次，得到熔解曲线并计算其Ct值，随后分析肾中细胞凋亡和自噬相关基因的表达水平。
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表 1 qRT-PCR检测中使用的引物序列 Table 1 The primer sequences used in qRT-PCR assay |
称取20 mg肾组织至2 mL EP管中，并加入250 μL RIPA蛋白裂解液，手动匀浆后静置10 min以充分裂解组织蛋白，随后12 500×g条件下离心10 min；取上清并用BCA试剂盒将蛋白定量至1.25 μg·μL-1，稀释后的样品、Lodding buffer体积比按照4∶1进行混合后在100 ℃下沸腾10 min，结束后分装储存。将制备好的总蛋白样品通过12.5%的SDS-PAGE凝胶分离后，经过转膜步骤转移至PVDF膜上；5%脱脂奶粉封闭1 h，经PBS清洗3次后与Bak1、BAX、BCl2、Cleaved-Caspase3/Caspase3、P62、Beclin1、ATG5和LC3抗体在4 ℃条件下孵育16 h；PBS清洗3遍后使用HRP标记的羊抗兔或羊抗鼠二抗孵育1 h，在全自动化学发光系统检测蛋白条带的表达。
1.7 免疫组织化学技术检测Cytc蛋白的表达与分布肾组织包埋块经切片机制成4 μm的薄片，黏附在防脱病理级切片，37 ℃烤片过夜后备用。55 ℃烤片1 h，经二甲苯透明和梯度酒精脱水等步骤后，在加热至即将沸腾的10 mmol·L-1的柠檬酸钠溶液(pH=6.0)反应10 min进行抗原修复操作。随后使用85%的甲醇配制3%的H2O2溶液阻断肾组织中的内源性过氧化物酶；经过3次PBS清洗后，使用10%的马血清在37 ℃条件下封闭1 h，封闭结束后使用Cytc抗体在4 ℃条件下孵育组织切片18 h；使用辣根过氧化物酶标记二抗在室温条件下孵育1 h，并在DAB显示液作用下显色。在光学显微镜下观察肾组织中Cytc蛋白的表达与分布并采集相片，ImageJ分析上述结果的光密度值。
1.8 免疫荧光技术检测LC3-II蛋白的表达与分布肾组织切片的制备同“1.7”，肾组织切片在55 ℃条件下烤片1 h，经二甲苯透明和梯度酒精脱水后，使用1%的Triton溶液进行细胞膜穿孔15 min，随后使用马血清在37 ℃条件下封闭肾组织1 h以去除非特异性蛋白的影响，经PBS清洗3遍后使用LC3-II抗体在4 ℃条件下孵育肾组织18 h；PBS清洗3次后使用Cy3标记二抗在室温下孵育肾组织切片1 h后DAPI染细胞核进行定位。抗荧光淬灭剂滴加在组织上后即可封片，并在正置荧光显微镜下观察并采集照片以用于后续分析。
1.9 TUNEL染色检测细胞凋亡率肾组织切片在55 ℃条件下烤片1 h，新鲜二甲苯透明和梯度酒精脱水后使用蛋白酶K孵育30 min，经PBS清洗3遍后，使用PBS配制3%的H2O2溶液，组织切片在室温条件下浸泡20 min以灭活组织内源性过氧化物酶，随后按照说明书步骤配制Streptavidin-HRP工作液，每个组织滴加50 μL工作液并孵育30 min，再次用PBS清洗3遍后使用DAB显色液显色，显色结束后用苏木精染细胞核以进行定位，梯度酒精脱水和新鲜二甲苯透明后使用中性树脂封片，光学显微镜下观察并采集图像，ImageJ进行分析。
1.10 数据处理最终数据以“平均值±标准差(mean±SD)”表示，本研究所有试验数据均来源于至少3个独立试验，数据经Excel 2016简单后处理使用GraphPad Prism 9进行作图，组间采用单因素方差分析(one-way ANOVA)并进行Turkey检验；*表示与对照组相比较以及两组之间的比较，#表示与LPS组相比较；P＜0.05表示差异有统计学意义。
2 结果 2.1 AA减轻LPS诱导的肉鸡AKI如图 1所示，Con组肾细胞结构完整，无任何病理变化。LPS组肾小球扩张、剥落，还可见细胞肿胀，肾小球空泡变性和萎缩。AA预处理低剂量组和高剂量组都减轻了LPS引起的肉鸡肾的病变，且AA在30 mg·kg-1范围内呈现剂量依赖性。相比起对照组肉鸡肾脏系数，LPS引起肉鸡肾脏系数极显著增加(P＜0.001)，这是肾肿胀的表现；而AA低剂量和高剂量预处理肉鸡都能够显著地降低LPS诱导的肉鸡AKI中的肾脏系数(P＜0.05)。
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A. 肾组织病理学检查(400×)；蓝色箭头：肾小管扩张和肾小管上皮细胞脱落；黑色箭头：肾小球空泡变性；红色箭头：肾小球萎缩；B. 肾脏系数：*表示与对照组相比较以及两组之间的比较，****P＜0.001，#表示与LPS组相比较，##P＜0.01，下同；C. 积雪草酸分子结构图 A. Histopathology of kidney (400×); Blue arrow: Dilation of renal tubules and detachment of renal tubular epithelial cells; Black arrow: Glomerular vacuolar degeneration; Red arrow: Glomerular atrophy; B. Kidney coefficient: * is expressed comparison with the control group and between the two groups, ****P < 0.001, # is expressed comparison with the LPS group, ##P < 0.01, the same as below; C. Molecular structure of Asiatic acid 图 1 AA对LPS诱导肉鸡AKI的保护作用 Fig. 1 Protective effect of AA on LPS-induced AKI of broilers |
与Con组相比，LPS显著增加了肉鸡肾中的MDA水平(P＜0.05)，AA低剂量和高剂量都显著降低了LPS诱导肉鸡AKI的MDA水平且呈剂量依赖性(P＜0.05)。与Con组相比，LPS均显著降低了肉鸡肾中的GSH-Px、CAT和SOD酶活性(P＜0.05)，而AA低剂量和高剂量预处理组肉鸡肾中CAT和SOD酶活性均显著升高(P＜0.05)，AA低剂量虽增加了GSH-Px的活性，但差异不显著(P>0.05), AA高剂量则显著增加了肉鸡肾中GSH-Px的活性(P＜0.05), AA预处理效果呈剂量依赖性(表 2)。
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表 2 AA对LPS诱导肉鸡AKI氧化-抗氧化指标的影响 Table 2 Effect of AA on LPS-induced AKI oxidant-antioxidant indexes of broilers |
如图 2所示，与对照组相比，LPS显著增加了P53、BAX、Caspse3的mRNA水平(P＜0.05)，增加了Bak1和Cytc的mRNA水平(P>0.05)，抑制了BCl2的mRNA水平(P>0.05)。AA预处理显著降低了LPS肉鸡肾中P53、BAX、Caspse3的mRNA水平，且呈剂量依赖性(P＜0.05)；AA降低了Bak1和Cytc的mRNA水平，但差异不显著(P>0.05)。AA剂量依赖性地增加了LPS肉鸡肾中BCl2的mRNA水平(P＜0.05)。Western blot结果显示，LPS处理显著增加了P53、Bak1、BAX和Cleaved-Caspase3的蛋白表达(P＜0.05)，而抑制了BCl2蛋白的表达(P＜0.05)。AA预处理呈剂量依赖性地降低了LPS肉鸡肾中P53、Bak1、BAX和Cleaved-Caspase3的蛋白表达(P＜0.05)，而升高了BCl2蛋白表达，但差异不显著(P>0.05)。
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A~F. 细胞凋亡相关mRNA表达水平；G. Western bolt检测细胞凋亡相关蛋白表达；H~L. 细胞凋亡相关蛋白的表达；*表示与对照组相比较以及两组之间的比较(*P＜0.05, **P＜0.01和***P＜0.001)，#表示与LPS组相比较(#P＜0.05, ##P＜0.01和###、####P＜0.001)；P＜0.05表示差异有统计学意义。下同 A-F. Apoptosis-related mRNA expression levels; G. Western blot detects relative protein expressions of apoptosis; H-L. Relative protein expressions of apoptosis; * is expressed comparison with the control group and between the two groups (*P < 0.05, **P < 0.01 and ***P < 0.001); # is expressed comparison with the LPS group (#P < 0.05, ##P < 0.01 and ###, ####P < 0.001); P < 0.05 indicates a statistically significant difference. The same as below. 图 2 AA对LPS诱导肉鸡AKI中细胞凋亡相关基因和蛋白表达水平的影响 Fig. 2 Effect of AA on the expression levels of apoptosis related genes and proteins in LPS induced AKI of broilers |
如图 3A、3B所示，与Con组相比，LPS极显著地增加了肉鸡肾组织中Cytc蛋白的表达与分布(P＜0.001)，而AA预处理在30 mg·kg-1剂量内呈剂量依赖性的降低了LPS肉鸡肾组织中Cytc蛋白的表达与分布，且差异极显著(P＜0.001)。为进一步证明AA对LPS诱导肉鸡肾细胞凋亡的保护作用，使用TUNEL染色检测肾细胞凋亡率。TUNEL染色结果如图 3C、3D所示，与Con组肉鸡肾凋亡率相比，LPS极显著增加了肾细胞凋亡率(P＜0.001)，AA低剂量和AA高剂量预处理组都极显著地降低了LPS肉鸡肾细胞凋亡率(P＜0.001)，且呈剂量依赖性。
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A、B. 免疫组化检测Cytc蛋白的表达与分布；黑色箭头：Cytc蛋白表达；C. TUNEL染色；黑色箭头：凋亡细胞D. 细胞凋亡率 A, B. Immunohistochemistry detects the protein expression and distribution of Cytc; Black arrow: the protein expression of Cytc; C. TUNEL staining; Black arrow: apoptotic cell; D. Apoptosis rate 图 3 AA对LPS诱导肉鸡AKI中Cytc蛋白表达与分布和肾细胞凋亡率的影响 Fig. 3 The effect of AA on the protein expression and distribution of Cytc and kidney apoptosis rate in LPS induced AKI of broilers |
如图 4所示，与Con组相比，LPS处理升高了肉鸡肾组织中P62的mRNA水平(P>0.05)，同时降低了ATG5(P>0.05)、Beclin1(P＜0.05)、LC3-I(P>0.05)和LC3-II(P＜0.05)的mRNA水平。AA预处理组肉鸡和LPS模型组肉鸡肾中P62的mRNA水平差异不显著，但呈下降趋势(P>0.05)。AA预处理还呈剂量依赖性地升高了ATG5、Beclin1、LC3-I和LC3-II的mRNA水平(P＜0.05)。Western blot结果显示，LPS处理升高了肉鸡肾中P62的蛋白表达(P>0.05)，而AA预处理降低了LPS诱导肉鸡AKI中P62的蛋白表达，差异不显著(P>0.05)。LPS显著降低了肉鸡肾中ATG5、Beclin1和LC3-II/LC3-I的蛋白表达(P＜0.05)，而AA预处理显著地升高了LPS诱导肉鸡AKI中ATG5、Beclin1和LC3-II/LC3-I的蛋白表达(P＜0.05)，且呈剂量依赖性。
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A~E. 细胞自噬相关mRNA表达水平；F. Western blot检测细胞自噬相关蛋白；G~J. 细胞自噬相关蛋白表达 A-E. Autophagy-related mRNA expression levels; F. Western blot detects relative protein expressions of autophagy; G-J. Relative protein expressions of autophagy 图 4 AA对LPS诱导肉鸡AKI中细胞自噬相关基因和蛋白表达水平的影响 Fig. 4 Effect of AA on the expression levels of autophagy related genes and proteins in LPS induced AKI of broilers |
如图 5A、5B所示，与Con相比，LPS极显著降低了肉鸡肾组织中LC3-II的表达与分布(P＜0.001)。而AA高剂量和低剂量都极显著地增加了LPS组肉鸡肾组织中LC3-II蛋白的表达与分布(P＜0.001)。
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A、B. 免疫荧光检测LC3-II蛋白的表达与分布 A, B. Immunofluorescence detects the protein expression and distribution of LC3-II 图 5 AA对LPS诱导肉鸡AKI中LC3-II蛋白表达与分布的影响(200×) Fig. 5 The effect of AA on the protein expression and distribution of LC3-II in LPS induced AKI of broilers (200×) |
细菌感染引起的肉鸡AKI是家禽集约化养殖中较常见的疾病之一，它能导致肉鸡生长缓慢甚至死亡，给家禽养殖业造成严重的损失。抗生素是细菌感染性疾病的主要治疗药物，但长期使用抗生素会使细菌产生耐药性，还可引起家禽发生内毒素血症并导致家禽死亡。目前我国已实施减抗、限抗、替抗政策，加之中国中草药资源丰富，天然产物在家禽养殖中的作用受到越来越多的关注[17-18]。AA是从积雪草中提取的五环三萜皂苷，已被证明具有抗炎、抗凋亡和抗肿瘤等生物活性[19]。本团队之前的研究表明，60 mg·kg-1剂量的AA处理肉鸡未见明显毒性，且30 mg·kg-1剂量的AA能更有效地减轻LPS诱导的肝损伤和肾损伤[9, 16]。因此，本试验选择了15和30 mg·kg-1剂量的AA进行研究。结果表明，AA通过抑制氧化应激和细胞凋亡以及促进细胞自噬减轻LPS诱导的肉鸡AKI, 这一结论进一步证明了AA在LPS诱导肉鸡AKI中的保护作用。
LPS是革兰阴性菌细胞壁的主要成分，伴随着细菌的死亡释放至血液中并作用于肾等器官。LPS常用于诱导炎性因子释放和建立AKI模型。LPS诱导AKI的机理是其与Toll样受体4(TLR4)结合并激活炎症反应和氧化应激[20]。尽管LPS诱导AKI的致病机理已初步阐明，但其具体发病机制和治疗策略仍有待进一步研究。研究表明，LPS可引起肾严重的病理损伤，包括肾小管扩张、肾小管上皮细胞脱落和肾小球萎缩等病理变化[21]。本研究通过给肉仔鸡腹腔注射0.5 mg·kg-1剂量的LPS成功建立AKI模型，结果发现LPS会引起肉鸡肾小管扩增、肾小管上皮细胞脱落，肾小球萎缩和肾小球空泡样病变，前期试验结果也支持了这一点[16]。AA预处理减轻了LPS诱导肉鸡肾的病理损伤，这和前人的研究结果是一致的[22]。此外，LPS处理显著增加了肉鸡的肾脏系数，表明LPS会引起肉鸡肾肿胀，这和之前的研究发现是一致的[23]；而AA预处理14 d后可以显著降低LPS诱导肉鸡AKI的肾脏系数，这表明AA可以缓解LPS引起的肉鸡肾肿胀。LPS不仅可以刺激炎症因子的释放同时会诱导过量ROS的产生并激活氧化应激，引起细胞抗氧化酶活性下降和脂质过氧化物MDA水平增加[24-25]；研究结果显示，LPS处理显著增加肉鸡肾组织中MDA水平以及显著降低GSH-Px、SOD和CAT酶的活性，这和前人的研究结果是相符合的[26]。有趣的是，AA预处理可以显著降低LPS肉鸡肾组织的MDA水平，同时升高GSH-Px、SOD和CAT的酶活性。总之，上述结果表明，AA能够抑制LPS引起肉鸡肾组织的氧化应激，从而减轻LPS诱导肉鸡AKI。
凋亡是细胞自我更新的程序性死亡方式，而过度的细胞凋亡是组织损伤的表现；氧化应激会引起线粒体通透性增加并导致Cytc从线粒体转运到细胞质中，随后激活Caspase3并触发线粒体途径的细胞凋亡[27]。细胞凋亡的特征还包括促凋亡蛋白P53、BAX和Bak1的表达增加，抗凋亡蛋白的表达减少[28]。先前的研究表明，LPS诱导的器官损伤和细胞凋亡有着密切联系，LPS可激活过度的炎性反应和氧化应激，进而介导细胞凋亡[29]。本研究发现，LPS处理增加肉鸡肾中P53、BAX、Bak1、Cytc和Caspase3的mRNA表达水平，降低BCl2的mRNA水平；同时，LPS处理增加了肉鸡肾中P53、BAX、Bak1和Cleaved-Caspase3的蛋白表达以及降低BCl2蛋白的表达；此外，免疫组织化学的结果显示，LPS处理显著增加Cytc在肾组织中的表达；TUNEL结果发现，LPS极显著地增加肾组织中的细胞凋亡率，这和前人的研究结果是一致的[30]。有意思的是，AA预处理可显著降低P53、BAX、Bak1、Cytc和Caspase3的基因和蛋白表达，上调BCl2基因和蛋白的表达；AA还能降低Cytc蛋白在LPS诱导肉鸡AKI中的表达，且极显著抑制LPS诱导肉鸡肾组织的细胞凋亡率。上述结果首次表明，AA预处理通过调控细胞凋亡相关基因和蛋白表达水平减轻了LPS诱导的肉鸡AKI。
自噬是溶酶体降解受损的细胞器并进行自我更新的过程，在维持细胞稳态方面具有重要作用[31]。P62是具有多结构的蛋白，在细胞信号转导、增殖和炎症中起着关键作用[32]；Beclin1是调节自噬活性的关键因子，当Beclin1表达减弱时表明自噬被抑制[33-34]。ATG5和LC3是自噬的重要标志物，抑制自噬会导致ATG5和LC3蛋白的表达降低[35-36]。研究表明，LPS可引起过度自噬诱导细胞损伤[37]；然而，也有研究证明LPS处理可以抑制细胞自噬，导致细胞功能障碍并诱导器官损伤[38]。本研究发现，LPS处理降低了肉鸡肾组织自噬相关基因和蛋白的表达水平，而AA预处理显著增加LPS诱导的肉鸡AKI中自噬相关基因和蛋白的表达水平；此外，免疫荧光结果显示，AA预处理极显著地增加了LPS诱导的肉鸡AKI中LC3-II蛋白的表达。本研究首次表明AA预处理能通过促进自噬减轻LPS诱导肉鸡的AKI。
4 结论总之，积雪草酸(AA)通过降低肾氧化应激水平、减少细胞凋亡和促进细胞自噬减轻LPS诱导的肉鸡急性肾损伤(AKI)，这为AA成为潜在的家禽饲料添加剂提供了有力的理论依据。
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(编辑 范子娟)