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引用本文
常新见, 周金柱, 殷杰, 牛贝贝, 范宝超, 郭容利, 赵永祥, 牛家强, 何孔旺, 李彬. 2017—2019年华东地区猪场主要病毒性腹泻病原调查[J]. 畜牧兽医学报, 2020, 51(12): 3141-3150.  
CHANG Xinjian, ZHOU Jinzhu, YIN Jie, NIU Beibei, FAN Baochao, GUO Rongli, ZHAO Yongxiang, NIU Jiaqiang, HE Kongwang, LI Bin. Investigation on Pathogens of Major Viral Diarrhea in Pig Farms in East China from 2017 to 2019[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2020, 51(12): 3141-3150.  
2017—2019年华东地区猪场主要病毒性腹泻病原调查
常新见1,2, 周金柱1, 殷杰1,3, 牛贝贝1,4, 范宝超1, 郭容利1, 赵永祥1, 牛家强2, 何孔旺1, 李彬1     
1. 江苏省农业科学院兽医研究所, 南京 210014;
2. 西藏农牧学院动物科学学院, 林芝 860000;
3. 内蒙古民族大学动物科学技术学院, 通辽 028000;
4. 南京农业大学动物医学院, 南京 210014
收稿日期：2020-03-16
基金项目：国家重点研发计划(2018YFD0500101)；国家自然科学基金(31872481)；江苏省人兽共患病学重点实验室资助项目(R1907)
作者简介：常新见(1992-), 男, 河南商丘人, 硕士生, 主要从事猪预防兽医方向研究, E-mail:2899327994@qq.com; 周金柱(1986-), 男, 山西朔州人, 助理研究员, 主要从事动物腹泻防控技术, E-mail:syzhoujz@163.com.
常新见和周金柱为同等贡献作者
通信作者：李彬, 主要从事猪病毒性腹泻防控技术研究, E-mail:libinana@126.com.
摘要：本研究旨在了解当前我国华东地区引起猪腹泻的主要病毒性腹泻病原的流行情况，为该地区更好地开展猪腹泻病毒的防控工作提供临床数据。分别采用RT-PCR检测方法对2017—2019年华东地区35个场别594份临床样品检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)、猪轮状病毒(porcine rotavirus，PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine，TGEV)、猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)和猪萨佩罗病毒(porcine Sapelovirus，PSV)等5种猪的病毒性腹泻病原，并对其阳性率及混合感染情况进行统计分析。结果显示，2017—2019年的PEDV、PDCoV、PoRV、TGEV及PSV的平均阳性率为分别为62.6%(372/594)、27.9%(166/594)、16.8%(100/594)、13.3%(79/594)及3.87%(23/594)，二重混合感染中以PEDV+PDCoV及PEDV+PoRV为主，平均混合感染率分别为22.4%(133/594)和13.3%(79/594)。三重感染中以PEDV+PoRV+PDCoV混合感染为主，感染率为7.58%(45/594)，未见四重及五重病原混合感染。2017—2019年PEDV平均阳性检出率最高，且常与PoRV及PDCoV发生混合感染，是当前华东地区猪病毒性腹泻类疫病的防控重点。TGEV和PDCoV在健康育肥猪及母猪的检出率中占比较大，表明隐性感染变得普遍，值得养殖户关注。除此之外，PSV的检出率远低于其他4种腹泻病毒。总之，随着2018年后养殖场加强生物安全防控措施和猪群管理，各病原检出率和阳性场检出率呈现逐年下降趋势。
关键词：猪病毒性腹泻    PEDV    混合感染    华东地区    
Investigation on Pathogens of Major Viral Diarrhea in Pig Farms in East China from 2017 to 2019
CHANG Xinjian1,2, ZHOU Jinzhu1, YIN Jie1,3, NIU Beibei1,4, FAN Baochao1, GUO Rongli1, ZHAO Yongxiang1, NIU Jiaqiang2, HE Kongwang1, LI Bin1     
1. Institute of Veterinary Medicine, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China;
2. College of Animal Science, Tibet Agriculture and Animal Husbandry College, Linzhi 860000, China;
3. College of Animal Science and Technology, Inner Mongolia University for Nationalities, Tongliao 028000, China;
4. College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210014, China
Corresponding author: LI Bin, E-mail:libinana@126.com.
Abstract: To investigate the epidemic situation of viral diarrhea in East China in recent years, and provide epidemiological survey data for comprehensive prevention, 549 fecal samples were collected in 2017-2019 from diarrhea pigs in 5 cities of East China and RT-PCR were used to detect porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), porcine rotavirus (PoRV), porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV), porcine deltacoronavirus (PDCoV) and porcine Sapelovirus (PSV), and statistical analysis of its positive rate and mixed infection was performed.The results showed that during 2017 and 2019, PEDV, PDCoV, PoRV, TGEV and PSV positive rate were 62.6% (372/594), 27.9% (166/594), 16.8% (100/594), 13.3% (79/594), and 3.87% (23/594), respectively.In the double mixed infection, the average mixed infection rate of PEDV + PDCoV and PEDV + PoRV were the main ones, which were 22.4% (133/594) and 13.3% (79/594), respectively. Among the triple infections, the mixed infection rate of PEDV + PoRV + PDCoV was dominated by 7.58% (45/594), and there were no mixed infections of four and five pathogens. The highest positive detection rate of PEDV was during 2017 and 2019, and mixed infection with PoRV and PDCoV, which was currently the focus of prevention and control of viral diarrhea in East China. TGEV and PDCoV accounted for a large proportion of the detection rate of healthy fattening pigs and sows, indicating that recessive infections had become common and deserve attention from farmers. In addition, the detection rate of PSV was more lower than the other four diarrhea viruses. On the whole, since August 2018 that the farms strengthened biosecurity prevention and control measures, the detection rate of various pathogens and the detection rate of sites have shown a downward trend year by year.
Key words: porcine viral diarrhea    PEDV    mixed infection    East China    

猪腹泻病在猪场中占有一定的比例，临床上以猪只腹泻、呕吐、脱水为主，仔猪及母猪均能感染，但仔猪病死率更高，感染情况更严重[1-2]。引起仔猪腹泻的原因众多，主要包括病毒、细菌、寄生虫及环境应激等因素，尤以病毒性猪腹泻病在猪腹泻病因中占有比例更高[3-4]。目前主要包括猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine，TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)、猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)，除此之外，猪轮状病毒(porcine rotavirus，PoRV)及猪萨佩罗病毒(porcine Sapelovirus，PSV)也在猪病毒性腹泻病原中占有一定的比例，且5种病毒存在一定的混合感染，尤其是PEDV与PDCoV混合感染比例较高[5-7]。

美国1933年首次出现猪传染性胃肠炎。1946年，首次分离并鉴定出第一株TGEV。之后，该病在日本、英国、北美洲和亚洲等多个国家和地区被检测到，我国在20世纪60年代首次发生该病[8-9]。猪流行性腹泻是由PEDV引起的，1971年，英国科学家首次报道该病，1978年在比利时和英国暴发期间，病原得到鉴定[10-11]。中国PEDV毒株于2006年初首次发生变异并暴发流行，之后在2010年10月，中国PEDV毒株再次发生变异导致该病的再次暴发[12-13]。2012年，猪德尔塔冠状病毒在我国的香港被首次发现，2014年，美国暴发该病。随后，在亚洲其他地区也检测到该病毒[14-15]。猪德尔塔冠状病毒的临床症状与猪传染性胃肠炎病及猪流性腹泻病极其相似，区别困难[16-18]。1974年，英国的Woode等[19]首次分离出PoRV。随后，在多个国家及地区相继检测到该病毒，我国于1981年在腹泻仔猪粪便中首次分离到该病毒[20-22]。英国科学家Lamont和Betts[23]首次从腹泻猪的粪便样本分离出PSV，并将其归类为猪肠道病毒A，并命名为猪肠道病毒8型，随后在北美、西班牙、英国和韩国等其他国家和地区相继发现并报道[24-25]。2009年，Lan等[26]从PSV阳性病料中成功分离出中国首株PSV，并命名为CSH毒株。

为摸清华东地区猪群中猪病毒性腹泻病的主要原因及危害程度，本研究开展了华东地区的猪病毒性腹泻的病原调查，从2017年开始，本实验室收集了华东地区不同地方的腹泻猪样品，对包括5个省(市)的35个疑似病毒性腹泻猪场的样品进行了TGEV、PEDV、PoRV、PDCoV、PSV的病原实验室检测与分析，为进一步制定合理的综合防治措施提供技术依据，同时为养殖场猪病毒性腹泻的综合防控提供流行病学调查数据。

1 材料与方法 1.1 材料来源与试剂

2017年9月至2019年12月，病料采集于华东地区包括南京、无锡、淮安、萧山、杭州、泰安、临沂、滁州、蚌埠、上海等35个中小规模猪场，5省(市)样品数量分别如下：江苏省(247份)、山东省(51份)、浙江省(66份)、安徽省(228份)、上海市(2份)；采集的腹泻样品对应的猪只均未免疫TGEV、PEDV、PoRV、PDCoV、PSV疫苗。历年来各猪场的动物群体状况背景见表 1。

表 1 历年来各猪场的动物群体状况 Table 1 Background of animal populations in various farms over the years

主要试剂:DNA Marker DL2000、2×Taq PCR Master Mix、反转录试剂盒(Prime Script RT reagent Kit)均为大连宝生物工程有限公司产品；病毒基因组DNA/RNA快速抽提试剂盒为Axygen生物科技有限公司产品。

1.2 方法

检测方法为本实验室之前建立好的方法，其中PEDV、PoRV及TGEV的检测方法为焦点等[27]建立的三重RT-PCR检测方法；PDCoV的检测方法由逄凤娇等[28]利用N基因建立；PSV的检测方法由孙杰等[29]建立，方法的特异性及敏感性较好。

1.3 数据处理与分析

对35个场别送检的594份临床样品进行PEDV、PoRV、TGEV、PDCoV和PSV等5种猪的主要病毒性腹泻疫病的病原阳性率及混合感染情况调查与分析。同一份样品只能检测到1种病原阳性的归为单一感染，同时检测到2种病原阳性的归为二重感染，同时检测到3种病原阳性的归为三重感染，依次类推。

2 结果 2.1 猪场送检样品中各病原历年阳性检出率

2017—2019年检测结果显示(图 1)，5种病原的历年阳性检出率如下：PEDV依次为80.3%、63.2%、34.5%；TGEV依次为31.5%、9.21%、4.60%；PoRV依次为11.8%、20.8%、6.90%；PDCoV依次为36.7%、29.7%、9.20%；PSV依次为11.2%、2.11%、0.00%；整体上各病原历年检出率逐年下降，PoRV除外。

图 1 各病原历年阳性检出率 Fig. 1 Positive detection rate of various pathogens over the years
2.2 各病原的历年阳性场检出率

2017—2019年检测结果显示(表 2)，场别无重复，5种病原的阳性场检出率如下：PEDV依次为66.6%、53.8%、28.6%；TGEV依次为26.7%、23.1%、14.3%；PoRV依次为20.0%、38.5%、14.3%；PDCoV依次为33.3%、30.8%、14.3%；PSV依次为20.0%、15.4%、0.00%；整体上各病原历年阳性场检出率呈逐年下降趋势，PoRV除外。PEDV的平均阳性场检出率最高(54.30%)，其次是PDCoV(28.60%)、PoRV(25.70%)、TGEV(22.90%)、PSV(14.30%)。

表 2 各病原的历年阳性场检出率 Table 2 The positive field detection rate of each pathogen over the years 
2.3 猪场送检样品中病原混合阳性检出率

2017—2019年检测结果显示(图 2)，PEDV的平均检出率最高(62.6%)，其次是PDCoV(27.9%)、PoRV(16.8%)、TGEV(13.3%)、PSV(3.87%)；二重混合感染中以PEDV+PDCoV(22.4%)和PEDV+PoRV(13.3%)为主，其次是PEDV+TGEV(10.6%)，除此之外，可知TGEV+PoRV(4.55%)和TGEV+PDCoV(4.55%)也占有一定的比例，另外PoRV+PDCoV(2.53%)、PEDV+PSV(2.02%)、PoRV+PSV(0.84%)占比最低；三重混合感染中以PEDV+PoRV+PDCoV(7.58%)为主，其次是PEDV+TGEV+PDCoV(4.55%)、PEDV+TGEV+PoRV(3.54%)、PEDV+PoRV+PSV(0.51%)；未检测到四重及五重混合感染。

图 2 猪场送检样品中病原混合感染阳性检出率 Fig. 2 Positive detection rate of mixed pathogen infection in samples sent to pig farms
2.4 不同省份(市)的样品阳性检出率

2017—2019年检测结果显示(图 3)，安徽、山东两省的PEDV检出率较高，分别为80.40%、76.80%；而江苏省(22.70%)的TGEV检出率最高；安徽省(82.40%)的PoRV检出率最高；江苏(39.60%)、浙江(40.90%)、安徽(80.40%)等省份的PDCoV检出率相对较高；江苏(6.50%)、浙江(10.60%)的PSV检出率相对较高。

图 3 不同省份(市)的猪场送检样品阳性检出率 Fig. 3 Positive detection rate of samples sent to pig farms in different provinces (cities)
2.5 不同类型的样品阳性检出率

2017—2019年检测结果显示(图 4)，PEDV在不同类型的样品检出率中由高到低依次为肠管(73.4%)、粪便(52.4%)、粪便拭子(30.4%)；以此类推，TGEV由高到低依次为粪便(26.5%)、肠管(7.45%)、粪便拭子(5.36%)；PoRV由高到低依次为肠管(19.5%)、粪便(12.7%)、粪便拭子(12.5%)；PDCoV由高到低依次为粪便(41.3%)、粪便拭子(39.3%)、肠管(18.9%)；PSV由高到低依次为粪便拭子(12.5%)、粪便(4.76%)、肠管(2.01%)。

图 4 不同类型的样品阳性检出率 Fig. 4 Positive detection rate of different types of samples
2.6 不同年龄段猪群中样品的阳性检出率

2017—2019年检测结果显示(图 5)，PEDV在猪不同年龄段的样品中检出率中由高到低依次为育肥猪(77.7%)、仔猪(69.1%)、母猪(10.7%)、保育猪(10.0%)；以此类推，TGEV由高到低依次为育肥猪(32.3%)、母猪(12.0%)、仔猪(7.39%)、保育猪(0%)；PoRV由高到低依次为仔猪(18.5%)、育肥猪(16.2%)、保育猪(10%)、母猪(9.33%)；PDCoV由高到低依次为育肥猪(62.3%)、母猪(25.3%)、仔猪(17.4%)、保育猪(0%)；PSV由高到低依次为保育猪(25%)、育肥猪(7.69%)、母猪(2.67%)、仔猪(1.85%)。

图 5 不同年龄段的样品阳性检出率 Fig. 5 Positive detection rate of samples in pigs of different ages
3 讨论

2016年，朱子健等[30]对东北地区规模猪场的264份临床腹泻样品进行检测，PEDV阳性率为74.62%，PoRV阳性率为25.76%，TGEV阳性率为6.06%。宋亚兵等[31]对广东省2012—2016年420份猪腹泻样品进行检测发现，PDCoV阳性率为13.33%，PDCoV与PEDV混合感染率为5.95%。2017年, 徐丽华等[32]对浙江地区调查后发现，PEDV感染率高达51.89%，PoRV感染率为5.19%，PDCoV感染率为4.25%，TGEV感染率为0.94%；同时存在混合感染，其中，PEDV和PoRV的二重感染最严重，感染率为15.1%。2017年，王淞等[33]检测山东省不同地区仔猪腹泻样品，PEDV、PoRV和TGEV的阳性率分别为34.9%、28.8%和2.2%。仇国明[34]对河北地区2016—2018年收集的342份临床病料样本检测，PEDV阳性率为18.71%，TGEV为3.22%，PoRV为8.19%。孙杰等[29]通过RT-PCR方法对2014—2016年我国7个省市的345份临床样品进行检测，结果显示，临床PSV感染率为8.12% (28/345)，表明我国猪场中存在PSV感染。本研究对2017—2019年的临床检测结果进行分析，所用样品来源于35个中小规模集约化猪场。在采集的样品过程，猪只整体情况包括健康育肥猪(21.90%)、健康母猪(13.61%)、健康仔猪(16.82%)，死亡仔猪(2.53%)、腹泻母猪(0.84%)、腹泻仔猪(42.62%)和腹泻保育猪(1.68%)，结果显示，送检的规模猪场存在PEDV、PoRV、TGEV、PDCoV、PSV 5种病原的不同程度感染，样品的平均阳性率从大到小分别为PEDV(62.6%)、PDCoV(27.9%)、PoRV(16.8%)、TGEV(13.3%)、PSV(3.87%)，这与国内其他实验室的报道基本一致。二重混合感染中以PEDV+PDCoV(22.4%)和PEDV+PoRV(13.3%)为主，其次是PEDV+TGEV(10.6%)，三重混合感染中以PEDV+PoRV+PDCoV(7.58%)为主，未检测到四重及五重混合感染。调查结果表明，PEDV仍是国内引起规模猪场腹泻疫病的主要病原。

自从2018年8月3日全国爆发非洲猪瘟后，各个猪场纷纷加强了生物安全防控措施[35]。从整体上来看，5种病原的历年检出率按大小排序分别为：PEDV为2017年(80.3%)、2018年(63.2%)、2019年(34.5%)；TGEV为2017年(31.5%)、2018年(9.21%)、2019年(4.60%)；PoRV为2018年(20.8%)、2017年(11.8%)、2019年(6.90%)；PDCoV为2017年(36.7%)、2018年(29.7%)、2019年(9.20%)；PSV为2017年(11.2%)、2018年(2.11%)、2019年(0.00%)。由此可知，整体上各病原历年检出率逐年下降，说明安全防控措施的提高对于腹泻病毒的防控起到明显的作用。同时, 5种病原的历年场别检出率按大小排序分别为：PEDV为2017年(66.6%)、2018年(53.8%)、2019年(28.6%)；TGEV为2017年(26.7%)、2018年(23.1%)、2019年(14.3%)；PoRV为2018年(38.5%)、2017年(20.0%)、2019年(14.3%)；PDCoV为2017年(33.3%)、2018年(30.8%)、2019年(14.3%)；PSV为2017年(20.0%)、2018年(15.4%)、2019年(0.0%)；整体上也呈现逐年下降趋势，这里释放了一个较好的信号，即华东地区的腹泻病毒的感染得到了很好的控制，故猪病毒性腹泻病的防控应以预防为主，合理制定免疫预防策略及切实做好疫苗的免疫预防是防控病毒性腹泻的必要手段。除此之外，饲养人员还应加强猪只饲养管理，尤其是保证未断奶仔猪能够及时吃到母乳，同时，还要降低后期仔猪因断奶产生的应激反应[36-37]。另一方面，管理人员应严格把控猪场生物安全，措施包括严禁场外人员进出猪舍，工作人员进出猪舍均需消毒等[38]。

4 结论

2017—2019年，华东地区PEDV阳性检出率最高，并且常与PoRV及PDCoV发生混合感染，是当前猪病毒性腹泻类疫病的防控重点。TGEV和PDCoV在健康育肥猪及母猪的检出率中占比较大，表明隐性感染变得普遍，值得养殖户关注。除此之外，PSV的检出率远低于其他4种腹泻病毒。从整体上看，自2018年8月份养殖场加强生物安全防控措施和猪群管理后，各病原检出率和阳性场的检出率呈现逐年下降趋势，表明猪场重视生物安全防控不仅对非洲猪瘟防控有利，对腹泻相关病毒的防控也具有重要意义。

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