2. 临沂大学农林科学学院, 临沂 276000;
3. 临沂市农业科学院, 临沂 276012
2. College of Agriculture and Forestry Science, Linyi University, Linyi 276000, China;
3. Linyi Academy of Agricultural Sciences, Linyi 276012, China
剪毛是绵羊日常管理中的一项重要措施，不仅可以获得羊毛、有效降低皮外寄生虫病，同时还可以有效提高绵羊对环境的适应能力并改善其福利水平[1]。但由于在剪毛过程中常伴随着捕捉、隔离、捆绑及剪毛等一系列引起羊只强烈不适的操作，以及与人接触的恐惧感和经常由剪毛引起的皮肤伤害，使剪毛成为一种强烈的应激并引起一些行为及生理的改变[2-3]。但相对于隔离和噪音等其他管理措施而言，剪毛是一种短期的强烈应激[4-6]。Pierzchala等[7]将剪毛应激分为将羊只赶至剪毛地点、剪毛、剪毛后环境应激3个部分，其中剪毛是最主要的应激源。剪毛也是提高动物福利一项重要措施[5, 8]，对小尾寒羊来说，在气温较高的春末夏初和秋末冬初的两次剪毛可以提高绵羊的舒适性，以更好的适应环境、增加采食量、提高日粮利用效率和机体脂肪存储进而提高其生产性能。
Romero等[9]和Boonstra[10]指出应激反应包括从行为~生理的一系列反应，其中动物行为变化最为明显[11]，进而是心率、脉搏、体温及相关激素的变化[12]。动物机体在应激反应过程中会动用多种激素，如促肾上腺激素、糖皮质激素、泌乳素、儿茶酚胺等[13-14]。应激反应主要通过交感神经系统和下丘脑-脑下垂体-肾上腺轴分泌儿茶酚胺和糖皮质激素来进行调控[15]。其中肾上腺既包含在下丘脑-垂体-肾上腺轴也包含在交感-肾上腺髓质系统中，因而在应激应答中发挥重要作用[13]。而肾上腺反应会进一步引发糖皮质激素及儿茶酚胺分泌的增多[16]。这些激素会诱发动物警觉，并给予其对环境应激做出反应及维持体内平衡的能力，同时，应激条件下机体会动用更多能量供应给脑和肌肉，以引发更为有效应对应激的行为效应。
小尾寒羊是中国重要的肉毛兼用型的优良地方品种，因其耐粗饲、生长快，多羔、常年发情、群居性好而大量养殖。目前，关于剪毛对小尾寒羊行为和生理影响方面的研究鲜见报道，因此，开展剪毛对小尾寒羊行为和生理等方面影响的研究，对于减少小尾寒羊应激，改善动物福利，提高小尾寒羊生产性能具有重要意义。
1 材料与方法 1.1 试验动物及处理选择体况相近的8~10月龄青年健康公羊9只、母羊13只进行剪毛，剪毛地点为临沂白沙埠小尾寒羊养殖场，剪毛时间设定为粗毛羊的普遍剪毛期2015年9月1日-10日。用线绳将前后肢分别捆绑后前后拉伸侧卧固定，用普通剪毛剪进行剪毛，剪毛时段为每天上午9:00-12:00，剪毛持续时间为每只30~40 min。剪毛绵羊与其他绵羊均正常饲喂混合日粮(苜蓿草粉70%，玉米30%)，每天饲喂2次，每次按1.5 kg·只-1饲喂，饲喂时间分别为上午7：00和下午17:00，自由采食和饮水。
1.2 行为观察及数据收集剪毛过程行为数据采集：用录像将整个剪毛过程录下，带回实验室用Observe XT观测系统进行观察分析。观察方法：目标动物取样法。记录采用所有事件记录方法。观察行为谱(表 1)。
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表 1 剪毛过程小尾寒羊行为谱 Table 1 Behavior ethogram of Small-tail Han sheep during shearing |
剪毛前后行为数据采集：用录像机将剪毛前1 d(记做-1)及剪毛后第1(记做1)、4(记做4)、7(记做7)天的行为进行录像并拷贝存储，带回实验室进行观察分析。以扫描取样法收集每天9:00-12:00(与剪毛相同时段)的行为，扫描间隔为5 min。观察行为谱(表 2)。
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表 2 剪毛前后小尾寒羊行为谱 Table 2 Behavior ethogram of Small-tail Han sheep before and after shearing |
分别于剪毛前1天(-1)及剪毛后第1(1)、4(4)、7(7)天上午10：00-11：00利用普通体温计和听诊器测定剪毛绵羊的直肠体温(RT)、心率(HR)和呼吸频率(RF)。
1.4 血液指标测定分别于剪毛前5 min，剪毛开始后10 min、剪毛结束时和剪毛后10 min用肝素钠抗凝管颈静脉采血5 mL，冰盒保存带回实验室，3 000 r·min-1离心5 min后, 取上清液，-20 ℃冷冻保存。
利用比浊法测定血浆中的钾(K+)、钠(Na+)水平，利用络-合指示剂法测定血浆中的镁(Mg2+)水平，利用ELISA法测定血浆中的β-内啡肽(β-EP)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、催乳素(PRL)、儿茶酚胺(CA)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)、抗利尿激素(ADH)、皮质醇(CORT)、促生长素(GH)、血糖(GLU)含量。
1.5 数据分析利用Excel对所得数据进行整理，然后利用SPSS 17.0对观察数据进行统计分析。利用单因素方差分析(one-way ANOVA)比较分析不同时段内各测定指标的变化，利用非独立t检验分析相同时段内各指标的性别差异。数据用“平均数±标准误”表示。P < 0.05表示差异显著，用P < 0.01表示差异极显著。
2 结果 2.1 剪毛过程及剪毛前后小尾寒羊的行为变化由表 3可知，在剪毛过程中，母羊的眨眼和鸣叫频率分别极显著(P=0.006)和显著(P=0.022)高于公羊，而抬头、摇耳、摆尾及排粪尿频率与公羊相比均差异不显著(P>0.05)。
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表 3 剪毛过程中的小尾寒羊行为变化 Table 3 Changes of Small-tail Han sheep's behavior during shearing |
剪毛前后的行为变化如表 4所示，公、母羊在剪毛后的卧息频率显著低于剪毛前(P < 0.05)，且无性别差异(P>0.05)。剪毛后公羊的静立频率与剪毛前相比也显著降低(P < 0.05)，但母羊剪毛前后静立频率无显著差异。剪毛后，公、母羊的反刍频率、母羊的饮水频率显著高于剪毛前(P < 0.05)，公、母羊的采食频率剪毛后显著或极显著高于剪毛前(P < 0.05或P < 0.01)；剪毛前母羊的反刍频率极显著高于公羊(P=0.003)。剪毛前公羊的采食频率多于母羊，而剪毛后母羊采食频率多于公羊。移动频率在剪毛前公羊显著高于母羊(P=0.036 < 0.05)，在剪毛后公母羊移动增多，但都未达到显著差异水平(P>0.05)，而且公、母羊之间存在差异，公羊移动频率多于母羊。
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表 4 剪毛前后绵羊行为变化 Table 4 Changes of Small-tail Han sheep's behavior before and after shearing |
剪毛前后绵羊生理变化如表 5所示。公、母羊直肠体温(RT)在剪毛后均低于剪毛前，且母羊在剪毛后第7天的直肠体温显著低于剪毛前(P < 0.05)；剪毛对绵羊心率(HR)没有明显影响(P>0.05)；公母羊剪毛后呼吸频率(RF)均显著降低(P < 0.05)，且呼吸频率存在性别差异，除剪毛后第4天外，其余时间均是母羊显著高于公羊(P < 0.05)。
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表 5 剪毛前后绵羊生理变化 Table 5 Changes of Small-tail Han sheep's physiology before and after shearing |
如表 6所示，无论公母羊，随着剪毛的进行血液中K+含量均表现降低(P>0.05)，但Mg2+变化不明显；母羊的血液Na+随剪毛进程先升高后降低，但公羊的没变化。性别间血液Na+存在差异，在剪毛结束时母羊血液Na+极显著高于公羊(P=0.008)。
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表 6 剪毛过程中及剪毛前后小尾寒羊体内血液商子及代谢物水平变化 Table 6 Changes of ions and metabolites in Small-tail Ilan sheep before, after and during shearing |
无论性别，ACTH水平均随剪毛进程表现先升高后降低的趋势，而且对母羊来说ACTH在剪毛开始10 min还显著高于剪毛结束时及结束后10 min(P < 0.05)；对于GH，公羊的血液水平随着剪毛进程持续降低，而母羊则随着剪毛进程先升高后降低，并且在剪毛开始10 min时还显著高于其他时段(P < 0.05)；对于β-EP、CORT和GLU，无论公母羊，其血液水平均随着剪毛进程表现先升高后降低的趋势，但变化差异不显著(P>0.05)；对于T3、T4和PRL在剪毛过程中也无明显变化(P>0.05)。血液代谢物水平也存在性别差异。在剪毛结束时，公羊的血液ACTH、CA和T4则显著或极显著高于母羊(P=0.050、0.004和0.029)；在剪毛结束后10 min，公羊的血液ACTH和T3则显著高于母羊(P=0.037和0.031)。
3 讨论 3.1 剪毛对小尾寒羊行为的影响Hargreaves等[4]和Boonstra[10]指出，剪毛是一种短期强烈应激，会首先引起动物行为方面的系列反应。但公母羊对剪毛应激的反应不同，从试验结果可以看出，在整个剪毛过程中，母羊的抬头、眨眼、鸣叫、摇耳、摆尾及排粪尿的行为频率都要多于公羊，其中眨眼和鸣叫行为分别为极显著和显著高于公羊，这可能是由于剪毛对母羊的应激更大所致。
剪毛前后行为发生明显变化。与剪毛前相比，剪毛后公母羊的移动、反刍、饮水和采食行为增加，而卧息和静立行为减少。绵羊属于昼行性动物，在白天具有较高的移动是反刍动物福利行为的一个体现[17]，而反刍则是绵羊作为反刍动物的一种本能行为和特有行为，因此，移动和反刍行为的增多表明小尾寒羊处于一种舒适自然的状态，说明剪毛改善了绵羊的福利。而采食和饮水行为的增加有助于绵羊的生长。同时，母羊在剪毛后的反刍和采食行为均多于公羊，这应该与剪毛更加有利于提高母羊的适应性及与所剪毛母羊带羔需要更多食物摄入有关。
3.2 剪毛对小尾寒羊生理的影响Carere等[12]研究表明，剪毛可显著影响小尾寒羊的生理。剪毛后母羊会出现体温下降、呼吸频率降低和心率升高[8, 18]。本试验也表明，无论公、母羊，剪毛后小尾寒羊的直肠体温和呼吸频率都表现降低，除公羊RT降低不显著外，其他均显著降低(P < 0.05)。这是由于本试验期在9月初，气温还相对较高，呼吸是小尾寒羊体热散失的一个有效途径，而被毛却是其体热散失的一道屏障。但剪毛对心率影响不大，这可能与环境温度未达热应激程度有关。
3.3 剪毛对小尾寒羊血液离子及代谢物的影响剪毛应激属于短期强应激，而应激反应主要通过交感神经系统和下丘脑-脑下垂体-肾上腺轴(HPA轴)分泌CA和Cortisol来进行调控[14-15]。其中肾上腺既包含在HPA轴也包含在交感-肾上腺髓质系统中，因而在应激应答中发挥重要作用[13]。一般应激反应会引发CORT及CA分泌的增多[8]，而CORT和CA的升高又会诱发血液Na+升高和K+降低，以维持体内离子平衡[19]。本试验中也发现剪毛引发了公母羊Cortisol和CA的类似变化，但变化不明显。至于剪毛应激如何影响血液Mg2+则报道较少[20]，本试验也没有发现剪毛对血液Mg2+的影响。Moberg等[13]研究表明应激反应会引起ACTH和PRL的分泌增加。本研究结果也呈现了类似趋势，但增加未达显著水平。血液CORT、CA、ACTH、PRL和Na+、K+含量在剪毛应激下的变化趋势虽与其他试验结果相似，但均未达差异显著性水平，这可能与应激原(如争斗行为)及应激时的环境(如高温)不同有关[13]。边疆晖等[21]指出β-内啡肽也会参与HPA轴负反馈的调节。本研究结果表明，剪毛应激会影响β-内啡肽的分泌，随剪毛进程的进行，无论公羊还是母羊血液β-内啡肽水平均表现出先高后低的趋势，这也与Hashizume等[22]试验结果相一致。
生长激素(GH)也是参与应激反应的重要激素，但其浓度变化因动物种类和心理状态不同而异[23]，对人[24]、猪[25]和猴[26]而言，应激会导致血液GH升高，而对啮齿类动物却出现降低[27]。Lovinger等[28]及Cronin等[29]研究发现，处于外科手术应激下的狗和处于暗室受到限制应激下的绵羊均未表现出GH的变化。但就急性应激来说，对血液GH究竟会有怎样的影响并无定论。在本试验中，剪毛对公羊GH影响不大，但明显改变了母羊的GH水平，随着剪毛的进行，母羊的GH先是显著升高然后又恢复到原来水平。
应激条件下，机体会动用更多能量供应给脑和肌肉，以引发更为有效应对应激的行为效应。因此，应激反应往往会引起血糖的升高[30]，而血糖的变化受到肝糖分解诱导的CA和胰高血糖素变化的影响，其中肝糖分解往往又伴随着甲状腺激素的变化[7]。T3是主要的甲状腺激素并且可以直接产热供能[31]。本试验结果表明，剪毛应激引发了血糖和甲状腺激素的变化，随剪毛的进行，公母羊血糖水平均出现先高后低的趋势，而对T3，只有公羊出现了先高后低的水平变化，母羊的T3和公母羊的T4均未表现出变化。这种未达显著水平的血糖变化可能也是受到绵羊情绪的影响[32-33]，但这种变化趋势也可以反映剪毛条件下的小尾寒羊的应激进程。
血液离子及代谢物水平存在性别差异。公羊ACTH和CA含量高于母羊。血液Na+、T3和T4含量在剪毛前公母羊含量基本相近，而在剪毛过程中母羊血液Na+水平高于公羊，T3和T4却显著低于公羊，这可能由于剪毛对母羊所引起的应激更大所致。
4 结论剪毛对小尾寒羊产生了短期强烈应激，并导致其行为和生理的变化。剪毛过程中，公、母羊均表现明显的眨眼、摆尾、抬头等行为，其生理指标、血液离子和血液代谢物也随着剪毛过程发生变化，并且这种变化存在性别差异。相比较而言，公羊的应激耐受性要强于母羊。剪毛也显著改善了小尾寒羊的福利水平，剪毛后小尾寒羊采食、饮水、反刍和移动增加，静立行为减少，同时直肠体温和呼吸频率降低等，说明剪毛提高了小尾寒羊在高温环境下的适应能力。
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