吉林大学学报(医学版)  2018, Vol. 44 Issue (03): 553-557

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王军, 赵卫红, 边鹊桥, 王保占
WANG Jun, ZHAO Weihong, BIAN Queqiao, WANG Baozhan
不同临床分期湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平变化及其临床意义
Changes of levels of IL-7 and IL-10 in peripheral blood of patients with different clinical stages of eczema and thier clinical significances
吉林大学学报(医学版), 2018, 44(03): 553-557
Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2018, 44(03): 553-557
10.13481/j.1671-587x.20180318

文章历史

收稿日期: 2017-08-31
不同临床分期湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平变化及其临床意义
王军1 , 赵卫红2 , 边鹊桥1 , 王保占3     
1. 天津市第三中心医院皮肤性病科天津市肝胆疾病研究所天津市人工细胞重点实验室卫生部人工细胞 工程技术研究中心, 天津 300170;
2. 天津市宝坻区人民医院皮肤科, 天津 301800;
3. 天津市宝坻区人民 医院检验科, 天津 301800
[摘要]: 目的: 检测不同临床分期湿疹患者外周血中白细胞介素7(IL-7)和白细胞介素10(IL-10)的水平,并阐明其临床意义。方法: 选择90例湿疹患者,分为急性期湿疹组、亚急性期湿疹组和慢性期湿疹组,每组各30例;选择同期行健康体检的志愿者30人作为对照组。采用RT-PCR法检测各组研究对象外周血中IL-7和IL-10mRNA的相对表达水平,采用ELISA法测定各组研究对象外周血中IL-7和IL-10水平。计算各组研究对象湿疹面积和严重程度指数(EASI)评分。分析湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平与EASI评分的相关性。结果: 与对照组比较,各期湿疹组患者外周血中IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平明显升高(F=3.1,P=0.04;F=4.73,P=0.02),外周血中IL-7和IL-10水平也明显升高(F=6.23,P < 0.01;F=5.34,P=0.01)。湿疹组患者外周血中IL-7和IL-10水平与其对应mRNA相对表达水平(r=0.95,P < 0.01;r=0.94,P < 0.01)及EASI评分均呈正相关关系(r=0.88,P < 0.01;r=0.89,P < 0.01),且均随着患者病情严重程度的加重而升高。结论: 湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平明显高于健康体检者,且与病情严重程度呈正相关关系。细胞因子IL-7和IL-10可能参与了湿疹的病理过程,检测其表达水平有助于评估疾病的严重程度。
关键词: 湿疹    白细胞介素7    白细胞介素10    湿疹面积和严重程度指数    
Changes of levels of IL-7 and IL-10 in peripheral blood of patients with different clinical stages of eczema and thier clinical significances
WANG Jun1, ZHAO Weihong2, BIAN Queqiao1, WANG Baozhan3     
1. Department of Dermatology, Third Central Hospital, Tianjin City, Tianjin Institute of Hepatobiliary Disease, Tianjin Key Laboratory of Artificial Cell, Artificial Cell Engineering Technology Research Center, Ministry of Public Health, Tianjin 300170, China;
2. Department of Dermatology, People's Hospital, Baodi District, Tianjin City, Tianjin 301800, China;
3. Clinical Laboratory, People's Hospital, Baodi District, Tianjin City, Tianjin 301800, China
[Abstract]: Objective: To detect the levels of interleukin-7 (IL-7) and IL-10 in peripheral blood of the patients with different clinical stages of eczama, and to elucidate their clinical significances. Methods: Ninety patients with eczema were selected, and divided into acute eczama group (n=30), subacute ecxama group (n=30), and chronic eczama group (n=30).Meanwhile, 30 healthy people who went to hospital for physical examination during the same period were recruited as control group.The relative expression levels of cytokines IL-7 and IL-10 mRNA in peripheral blood of the subjects in various groups were detected by RT-PCR method.The levels of IL-7 and IL-10 in peripheral blood of the subjects in various groups were measured by ELISA method.The eczema area and severity index (EASI) scores of the subjects in various groups were detected.The relationships between IL-7 level, IL-10 level and EASI scores were analyzed. Results: Compared with control group, the relative expression levels IL-7 and IL-10 mRNA in peripheral blood of the patients with different clinical stages of eczenma were significantly increased (F=3.17, P=0.04; F=4.73, P=0.02);the expression levels of IL-7 and IL-10 in peripheral blood of the patients with different clinical stages of eczema were significantly increased (F=6.23, P < 0.01; F=5.34, P=0.01).The levels of IL-7 and IL-10 were positively correlated with the corresponding mRNA relative expression levels in peripheral blood of the patients with different clinical stages of eczema (r=0.95, P < 0.01; r=0.94, P < 0.01) and EASI scores of the patients (r=0.88, P < 0.01; r=0.89, P < 0.01), which were increased along with the increasing of severity degree of the patients. Conclusion: The levels of IL-7 and IL-10 of the patients with eczema are significantly higher than those in the healthy controls, which are positively correlated with the severity of the disease. The cytokines IL-7 and IL-10 may be involved in the pathological process of eczema, and the detection of their experssion levels contributes to assess the severity of disease.
Key words: eczema     interleukin-7     interleukin-10     eczema area and severity index    

湿疹是由多种内外因素引起的一种具有明显渗出倾向的炎症性、瘙痒性皮肤病,其发病机制非常复杂[1]。近年来,湿疹的发病率有逐年上升的趋势,欧美地区其发病率约为10.7%,在我国发病率为7.5%[2-3]。气候和环境条件等外源性因素及系统性疾病、机体免应答异常和精神情绪等内源性因素均与湿疹有关联[4]。反复发作和皮肤瘙痒是湿疹的典型特征,严重影响患者的生活质量,给患者的日常工作和身心健康均带来了极为严重的影响[5]

研究[6]表明:湿疹的主要病理机制与辅助性T细胞(Th1/ Th2)失衡引发的细胞因子分泌紊乱有关联。检测患者血浆白细胞介素8(IL-8)和白细胞介素17(IL-17)对静脉曲张性湿疹各期的诊断和预后评估具有重要临床价值[7]。细胞因子白细胞介素7(IL-7)和白细胞介素10(IL-10)在细胞免疫应答中起重要作用[8-9]。国内外关于IL-7及IL-10在不同类型湿疹患者发病中作用机制的报道较少。本研究分析不同临床分期湿疹患者外周血中细胞因子IL-7和IL-10水平及临床意义,为变态反应性疾病的诊断提供临床依据。

1 材料与方法 1.1 一般资料

选择2015年10月—2016月10月在天津市第三中心医院接受治疗的湿疹患者90例,男性42例,女性48例,年龄21~68岁,平均年龄(43.20±11.18)岁。急性期湿疹组患者30例,男性14例,女性16例,平均年龄(42.82±9.57)岁;亚急性期湿疹组患者30例,男性16例,女性14例,平均年龄(42.30±10.26)岁;慢性期湿疹组患者30例,男性15例,女性15例,平均年龄(44.31±10.02)岁。纳入同时期到天津市第三中心医院体检科行身体检查的健康志愿者30人作为对照组,男性16人,女性14人,平均年龄(42.83±11.25)岁。各组研究对象性别和年龄等临床基本资料比较差异无统计学意义(P> 0.05),具有可比性。

1.2 纳入和排除标准

纳入标准:①符合赵辨主编的《中国临床皮肤病学》[10]的诊断标准;②入组前1个月内未服用过抗组胺类药物;③所有患者自愿参加观察,并签署知情告知书。排除标准:①2周内系统性接受过皮质类固醇激素或其他免疫抑制剂治疗者;②患有严重心脑血管疾病、精神病及肝肾功能不全者;③孕妇或哺乳期女性;④并发其他皮肤疾患者。本研究已获得天津市第三中心医院伦理委员会批准。

1.3 RT-PCR法检测各组研究对象外周血中IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平

分别常规无菌采集各组研究对象外周静脉血3 mL,采用RNA提取试剂盒(天津鑫泽宝信生物科技有限公司,中国)分别提取各组患者外周血总RNA,利用反转试剂盒(TaKaRa公司,日本)合成cDNA,检测IL-7和IL-10mRNA表达水平。GAPDH:上游5′-GCACCGTCAAGGCTAGAAC-3′,下游5′-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3′;IL-7:上游5′-CTCTGTGATCTGGGAGGCAAA-3′,下游5′-CTCTTGCTGGATGGGGACA-3′;IL-10:上游5′-AGGGCACCCAGTCTGAGAACA-3′,下游5′-CGGCCTTGCTCTTGTTTTCAC-3′。RT-PCR反应条件:94 ℃预变性20 s,94 ℃变性2 s,分别于65 ℃退火30 s,72 ℃延伸35 s,40个循环,对照和样品均设置3个平行复孔。记录Ct值,对GAPDH的Ct值进行归一,IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平采用2-ΔΔCt[12]计算。

1.4 ELISA法测定各组研究对象外周血中IL-7和IL-10水平

分别取各组研究对象外周血3 mL,采用ELISA试剂盒(PerkinElmer公司,美国)测定外周血中IL-7和IL-10水平。具体操作步骤严格按照ELISA试剂盒说明书进行。

1.5 各组研究对象湿疹面积和严重程度指数(eczema area and severity index, EASI)

采用EASI评分法[11],根据不同部位皮损症状严重程度,皮损面积大小,结合成人各部位面积占全身面积的比例进行综合评分。

1.6 统计学分析

釆用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。各组研究对象外周血中IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平、IL-7和IL-10水平以及各组研究对象EASI评分以x±s表示。各组研究对象外周血中IL-7和IL-10水平及EASI评分比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),两两比较采用LSD法。湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平与EASI评分间相关性分析采用Spearman相关分析法。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 各组研究对象外周血中IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平

不同临床分期湿疹患者外周血中IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(F=3.17,P=0.04;F=4.73,P=0.02)。急性期湿疹组患者外周血中IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平最高,分别为38.34±3.27和36.62±3.08。见表 1

表 1 各组研究对象外周血中IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平 Table 1 Relative expression levels of IL-7 and IL-10 mRNA in peripheral blood of subjects in various groups
(n=30, x±s)
Group IL-7 mRNA IL-10 mRNA
Control 23.12±2.46 22.65±2.14
Acute eczema 38.34±3.27** 36.62±3.08**
Subacute eczema 30.12±3.15**△ 31.25±2.17**△
Chronic eczema 26.24±2.14*△△# 26.56±2.33*△△#
* P < 0.05, * * P < 0.01 vs control group; P < 0.05, △△ P < 0.01 vs acute eczema group; # P < 0.05 vs subacute eczema group.
2.2 各组研究对象外周血中IL-7和IL-10水平

不同临床分期湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平与IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平的趋势一致。各组患者外周血中IL-7和IL-10水平比较差异有统计学意义(F=6.23,P < 0.01;F=5.34,P=0.01)。见表 2

表 2 各组研究对象外周血中IL-7和IL-10水平 Table 2 Levels of IL-7 and IL-10 in peripheral blood of subjects in various groups
[n=30, x±s, ρB/(ng·L-1)]
Group IL-7 IL-10
Control 63.12±11.31 16.26±2.81
Acute eczema 93.35±12.37* 28.14±3.42*
Subacute eczema 80.12±11.94*△ 21.21±2.28*△
Chronic eczema 70.24±10.26*△△# 18.96±2.19*△△#
* P < 0.01 vs control group; P < 0.05, △△ P < 0.01 vs acute eczema group; # P < 0.05 vs subacute eczema group.
2.3 各组研究对象EASI评分

不同临床分期湿疹患者EASI评分随着患者病情严重程度的加重而升高,急性期湿疹患者平均EASI评分明显高于亚急性期湿疹患者,亦高于慢性期湿疹患者,各组研究对象平均EASI评分比较差异有统计学意义(F=4.79,P=0.03)。见表 3

表 3 各组研究对象EASI评分 Table 3 EASI scores of subjects in various groups
(n=30, x±s)
Group EASI score
Control 0
Acute eczema 35.34±6.37
Acute eczema 28.00±5.82*
Chronic eczema 21.24±5.54*△
* P < 0.01 vs acute group; P < 0.05 vs subacute eczema group.
2.4 湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平与EASI评分的相关性

湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平和对应mRNA相对表达水平均呈正相关关系(r=0.95,P < 0.01;r=0.94,P < 0.01)。IL-7和IL-10水平分别与EASI评分呈正相关关系(r=0.88,P < 0.01;r=0.89,P < 0.01)。见表 4

表 4 各组湿疹患者IL-7和IL-10水平与EASI评分的相关性 Table 4 Relationships between levels of IL-7 and IL-10 and EASI scores of patients with eczema in various groups
Item r
IL-7 IL-10
IL-7 mRNA 0.95 0.56
IL-10 mRNA 0.53 0.94
EASI score 0.88 0.89
3 讨论

目前根据临床上湿疹的特征表现和病情的严重程度分为急性期湿疹、亚急性期湿疹和慢性湿疹3种类型[13]。白细胞介素在介导Th1和Th2 2种细胞调节免疫功能中发挥着重要作用,Th1细胞分泌的细胞因子如IL-2、肿瘤坏死因子α(TNF-α)主要介导细胞免疫,Th2细胞分泌的细胞因子如IL-4、IL-5和IL-13介导体液免疫应答[14]。Th亚群功能失衡引起的细胞因子分泌紊乱对湿疹的发生发展起重要作用。研究[15-16]显示:IL-17和IL-23是导致湿疹的主要原因,但目前对IL-7和IL-10在不同临床分期湿疹患者病理过程中作用的报道仍较少。

研究[18]表明:IL-7参与变态反应性疾病的发病过程,在哮喘患者CD4+ T淋巴细胞中IL-7水平明显高于健康对照组。作为Th2细胞分泌的主要细胞因子之一,IL-10有多向调节功能,能够调控TNF-α等细胞因子的表达发挥其免疫效应[19]。本研究结果显示:湿疹患者外周血中无论IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平还是IL-7和IL-10水平均明显高于健康体检者,且随着患者病情严重程度的加重而升高。赖爱民等[20]研究表明:湿疹患者血清IL-7和IL-25可能参与了湿疹的病理过程,IL-7和IL-25水平均高于健康对照组,且急性期和亚急性期患者的IL-7和IL-25水平明显高于慢性期患者,与本研究结果一致。桦树花粉过敏患者外周血单核细胞培养物中IL-10呈高表达,明显高于对照组[21]。研究[16, 22-23]显示:湿疹患者外周血白细胞介素(如IL-4、IL-13、IL-17、IL-23和IL-25)水平也均明显高于健康者。这些证据均有力地支持了本研究的结果。与上述其他细胞因子一样,IL-7和IL-10亦可能参与了湿疹的发生发展。

此外,本研究检测了患者EASI评分,并进一步分析了IL-7和IL-10水平与EASI评分的相关性,结果显示:不同临床分期湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平均与EASI评分呈正相关关系。IL-7和IL-10在湿疹的发生发展过程中发挥重要作用,二者联合作用也可能是导致湿疹发生的重要因素之一。鉴于大量细胞因子在免疫反应中的复杂作用机制,该结论仍需要大量研究加以证实。

综上所述,湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平明显高于健康体检者,且其水平与病情严重程度呈正相关关系。湿疹患者病情越严重,外周血中IL-7和IL-10水平越高。IL-7和IL-10可能参与了湿疹的病理过程,通过IL-7和IL-10水平评估湿疹的严重程度具有一定的可行性,值得临床参考和借鉴。

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