地中海贫血是常见的溶血性单基因遗传性疾病，由珠蛋白基因点突变或缺失导致肽链合成失衡所致，是发病率最高的遗传性疾病，且发病存在明显的地域及民族差异。国内研究^[2]显示:地中海贫血在我国多发于西南地区，广西、云南和贵州等地发病率较高，且不同地区、不同民族基因突变类型也不尽相同。α型地中海贫血和β型地中海贫血是地中海贫血的常见类型，目前我国人口中已发现3种α⁺和4种α⁰地中海贫血基因突变，β基因突变类型有34种。当前对于地中海贫血的治疗尚无有效方法，给儿童生命及健康带来严重威胁。因此及时有效筛查地中海贫血患儿，对提高该地区人口素质、指导其婚姻和产前诊断等具有重要意义。目前关于贵州省黔东南州苗族和侗族2个不同民族儿童地中海贫血患病情况和特点的研究目前尚未见报告，因此本研究对贵州省黔东南州16个市(县)中6个月~14岁儿童进行筛查分析，对比苗族和侗族儿童地中海贫血的患病率及其特点，阐明地中海贫血患病的种族差异性，为不同种族地中海贫血患儿的临床治疗提供依据。

于2012年9月—2015年9月选择贵州省黔东南州16个市(县)0~14岁的儿童作为筛查对象，每个市(县)随机选取6个月~14岁儿童50~150人，共选择1 623人儿童；其中6个月~6岁者945人，7~14岁者678人；男童839人，女童784人；苗族938人，其中男童486人，女童452人；侗族685人，其中男童353人，女童332人。本研究经贵州省医科大学第二附属医院医学伦理委员会审核批准。所有患者及其家属均签署知情同意书。

采用多阶段分层随机抽样法对黔东南州下属的16个市(县)根据少数民族所占比例分为2层，每层随机抽取2个市(县)，再在每个市(县)抽取2个乡镇，每个乡镇中根据民族聚居情况决定村的数目，最后在抽取的村中采用随机抽样方法调查6个月~14岁儿童。调查时采用《地中海贫血筛查、诊断和干预对象相关情况采集表》，参加调查的调查人员均在调查前经过严格培训，并进行了标准一致性检验，Kappa值均在0.8以上。研究对象纳入标准：① 所有研究对象均是至少3代以上皆为本民族的个体，相互之间无亲缘关系；② 年龄为6个月~14岁儿童；③ 所有研究对象及家属均知情同意；④ 纳入研究对象为当地苗族和侗族人口。

① 血红蛋白电泳：所有儿童均抽取空腹静脉血5 mL，常规法制备血红蛋白溶液(血红蛋白电泳检测仪琼脂糖凝胶全自动电泳仪型号: capillaries sebia2flex piercing, 法国西比亚公司)，所有操作均按照操作说明书进行，同时检测血红蛋白A2(HbA2) 和血红蛋白F(HbF)及异常区带。② 地中海贫血分型：HbA2≤3.5%和HbH、Bart血红蛋白带异常快速表示α型地中海贫血为阳性；3.5%＜HbA2＜8%及HbF＞2.0%、血红蛋白带异常等判定为β型地中海贫血阳性表达。

采用单垂直电泳槽分析血红蛋白肽链，地中海贫血α型常显示Aγ、δ及Gγ链异常。β型中多显示Gγ链异常。

以酚-氯仿抽提法行DNA提取，筛查其阳性标本。①β型地中海贫血DNA分析先行PCR扩增再行ASO/RDB-PCR反向点杂交，对常见的17种β型基因突变型进行检测。同样方法检测α型地中海贫血中CS、QS及WS基因点突变异型。② 以单管PCR(mPCR)多重技术检测α型地中海贫血中--SEA、-α3.7及-α4.2基因缺失型。

观察并记录所有参检儿童的性别、年龄、民族及居住地等基本信息，同时记录、分析α型地中海贫血及β型地中海贫血检测阳性数及其基因类型。

采用SPSS 19.0统计软件对数据进行统计学分析。将2个民族不同基因型患者地中海贫血阳性率的原始数据转化为二分类，组间比较采用χ²检验。以α=0.05为检验水准。

苗族儿童938人中筛查出68例地中海贫血阳性者，阳性率为7.25%，其中男童32例，阳性率为6.58%；女童30例，阳性率为6.64%；其中α型地中海贫血18例，阳性率为1.92%，占贫血患者总数的26.47%；β型地中海贫血36例，阳性率为3.83%，占贫血患者总数的52.94%。αβ复合型地中海贫血阳性者14例，阳性率为1.49%，占贫血患者总数的20.59%。侗族儿童685人中检出48例地中海贫血阳性者，阳性率为7.01%，其中男童26例，阳性率为7.37%，占54.17%；女童22例，阳性率为6.63%，占45.83%；其中α型地中海贫血13例，阳性率为1.90%，占贫血患者总数的27.08%；β型地中海贫血24例，阳性率为3.50%，占贫血患者总数的50.00%。αβ复合型地中海贫血阳性者11例，阳性率为1.61%，占贫血患者总数的22.92%。

苗族和侗族儿童中α型地中海贫血主要突变类型基因阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，--SEA/-αα基因阳性率最高，其次是-α3.7基因。见表 1。

2个民族儿童中CD17/N类型基因构成比最高，其次是CD14-15/N类型；2个民族中β型地中海贫血主要突变类型基因阳性率的比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表 2。

2个民族儿童中αβ复合型地中海贫血中--SEA/β41-42基因阳性率最高，其次是--SEA/β17基因，阳性率最低的基因是-α4.2，2个民族儿童αβ复合型地中海贫血主要突变类型基因阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表 3。

地中海贫血广泛分布于全世界，其中东南亚和地中海等地发病率最高，但各个地区的发病率和基因类型各不相同。地中海贫血已成为发病区围产儿死亡、出生缺陷和妊娠期严重并发症等遗传性疾病之一，给该地区人口质量和经济发展带来严重影响。全世界地中海贫血基因携带率达7%，在世界人口迁移和增加的情况下，防治地中海贫血工作也面临严重挑战^[3]。

我国地中海贫血调查^[4]显示：在地中海贫血基因突变及其突变频数方面我国同东南亚人群较为相似。目前，泰国地中海贫血基因携带率超过25%，其中α型地中海贫血基因携带率最高，将近17%，而β型地中海贫血不足4%^[5]；我国广西壮族自治区地中海贫血基因携带率近25%，α型约占18%，β型约占7%，血红蛋白异常率为0.5%^[6]。贵州省也是地中海贫血基因携带率较高的省份，基因携带率达19.7%，但存在地域和民族差异，不同地域和民族地中海贫血基因的携带率和基因类型各不相同，也有调查^[7]表明贵州省黔东南州苗族和侗族的β型地中海贫血检出率约为7%。本研究结果显示：苗族和侗族儿童中地中海贫血总检出率为14.26%，苗族儿童中地中海贫血检出率为7.25%，侗族中检出率为7.01%，其中α型地中海贫血基因检出率苗族为1.91%，侗族为1.90%；β型地中海贫血检出率苗族为3.83%，侗族为3.50%；苗族儿童各类型地中海贫血基因检出率均稍高于侗族，但组间比较差异均无统计学意义，无差异可能与其长期相似的生活环境相关。

α型地中海贫血主要是缺乏α珠蛋白基因所致，少数是由点突变造成^[8]。现今全球鉴定出的α型地中海贫血缺乏基因总类有20多种，基因主要分为非缺失型和缺失型。在染色体等位突变情况下，不同地域和人群的基因突变类型存在明显差异，其中αα/-α3.7和αα/-α4.2基因为全球性分布基因突变类型。我国常见的α基因突变类型多为--SEA/-αα、--SEA/α3.7、-α3.7、-αcs、αqs、-α4.2和-αcs等^[9]。本研究对贵州省黔东南州苗族侗族地中海贫血进行筛查发现：2个民族的α基因突变类型主要是--SEA/-αα，其次是-α3.7，且2个民族间基因突变类型比较差异无统计学意义，该结果同我国鉴定出的α基因突变类型较为相符。由此可见，在黔东南州不同区域和民族的α基因突变类型较为相似，--SEA/-αα基因突变率最高。在临床类型上，2个民族的α地中海贫血均以标准型为主，有少数血红蛋白异常患者，但无论是轻型患儿还是标准型或是血红蛋白异常者大部分未进行治疗，这或许同人们对该疾病的认识不够有关。

李东明等^[10]报道显示：β型地中海贫血的全球发病率并不比α型低，且其基因突变频率和类型因国家及民族的不同而不同。巴基斯坦则以IVS-Ⅰ-5、CD41-42、CD69、CD8/9和CD15为主，其中IVS-Ⅰ-5型最为常见^[11]；泰国常见的β基因突变类型是CD17、CD41-42、CD71-72和IVS-Ⅰ-1等，其中CD41-42基因突变类型的检出率最高，约达37%^[12]。我国常见的β基因突变类型主要有IVS-Ⅱ-654、IVS-Ⅰ-5、CD41-42、CD17、CD41-42(TCTT)、βEM、-28M/N和-29/N等，且存在民族与地域差异^[13]。本研究中，贵州省黔东南州苗族和侗族儿童中β基因突变类型中CD17/N基因突变型的检出率最高，其突变率最高，其次是CD14-15/N、IVS-Ⅱ-654M/N和βEM，且均为无需治疗的轻型；而CD41-42/N和CD41-42(TCTT)基因突变率虽低，但常为重型，给患儿生命健康带来的威胁最大，应引起重视。

αβ复合型地中海贫血患儿多是由不同基因类型携带者结婚后所生子女^[14]。αβ复合型地中海贫血患者的临床症状通常不明显，容易被忽视，临床上常见β型表现较轻，α型常被隐匿^[15]。αβ复合型重度患儿因α/β比值平衡而临床症状常轻于β重型，多为中间型地中海贫血，尽管该类患儿不需输血治疗，但患儿仍会出现发育迟缓、肝脾肿大、地中海贫血外貌及体抗力不足等症状，因此防止该类患儿的出生应成为防止地中海贫血的重点。本研究结果表明：苗族和侗族儿童中αβ复合型地中海贫血阳性检出率均为1%~3%，--SEA/β41-42基因突变率最高。

综上所述，黔东南州苗族和侗族儿童地中海贫血的发病率相对较高，β型稍高于α型，CD17/N和--SEA/-αα为主要基因类型，2个民族间地中海贫血类型及基因突变类型和临床类型等方面均无明显差异。本次关于苗族和侗族的儿童地中海贫血的筛查为本地的产前诊断、婚姻指导和人口素质的提高提供了重要流行病学资料，意义较大。