2017, Vol. 43扩展功能
文章信息
- 强欣, 霍文艳, 杨灿, 范亚楠, 石彩云, 白海花
- QIANG Xin, HUO Wenyan, YANG Can, FAN Yanan, SHI Caiyun, BAI Haihua
- p16INK4a蛋白在蒙古族患者宫颈病变组织中的表达及其意义
- Expressions of p16INK4a protein in cervical lesion tissues of Mongolian patients and their significances
- 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(02): 353-355
- Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2017, 43(02): 353-355
- 10.13481/j.1671-587x.20170227
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文章历史
- 收稿日期: 2016-05-04
2. 内蒙古民族大学附属医院分子生物学实验室, 内蒙古 通辽 028007
2. Molecular Biology Laboratory, Affiliated Hospital, Inner Mongolia University for Nationalities, Tongliao 028000, China
宫颈癌是目前妇科最常见的恶性肿瘤[1]，其死亡率已占妇科肿瘤的首位[2]。宫颈癌发病率在世界范围内呈现年轻化和逐年上升的趋势, 其病变的发生往往是从宫颈不典型增生→宫颈上皮内瘤变 (cervical intraepithelial neoplasia, CIN) →宫颈浸润癌由量变到质变、渐变到突变的连续发展过程中形成的[3]。在宫颈癌的发生发展过程中, 有多种癌基因、抑癌基因以及相关因子参与，INK4a基因是人们发现的第1个直接参与细胞周期调控的抑癌基因，而且，研究[4]表明：诱发宫颈癌INK4a/ARF基因沉默，可促进肿瘤细胞凋亡。本研究选择内蒙古民族大学医学院病理科检测的100例蒙古族患者为研究对象, 采用免疫组织化学分析方法观察p16INK4a蛋白在蒙古族患者宫颈病变组织中的表达，探讨宫颈癌的发生发展是否与INK4a基因有关，为宫颈癌的预防和诊断提供理论和实验依据。
1 资料与方法 1.1 临床资料选择2013年1月—2015年12月在内蒙古民族大学附属医院病理科进行病理学检查的100例蒙古族患者，其中宫颈癌25例、CIN 35例、慢性宫颈炎20例和子宫平滑肌瘤20例。年龄为25~68岁，平均年龄45.6岁。所有切片均经2位资深病理学教授取得相同诊断意见。
1.2 主要试剂鼠抗人p16INK4a单克隆抗体 (ZM-0205) 和超敏链酶卵白素-辣根过氧化酶试剂盒 (SP-9000通用) 均购自北京中杉金桥生物技术开发公司。
1.3 p16INK4a检测所有标本采用10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋切片，采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法 (SP法) 检测。染色严格按照试剂说明书进行操作，用磷酸缓冲液 (PBS) 代替一抗为阴性对照，用已知阳性切片作为阳性对照。
1.4 结果判定标准光学显微镜下高倍镜观察：p16INK4a蛋白阳性部位多在细胞核和/或细胞质 (多在细胞质) 中，呈黄褐色或棕黄色着色。根据p16INK4a在细胞中的反应强度，半定量划分反应等级：强阳性 (||)，广泛弥漫性着色 (76%以上的细胞着色)；阳性 (||)，较弥漫或大片状着色 (51%~75%的细胞着色)；弱阳性 (+)，小片状或灶性着色 (11%~50%的细胞着色)；阴性 (-)，个别或无着色 ( < 10%的细胞着色)。
采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。各组p16INK4a蛋白表达阳性率比较采用多个样本比较的K-W H秩和检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果在100例病变组织中，宫颈癌、CIN、慢性宫颈炎和子宫平滑肌瘤组织中p16INK4a蛋白阳性表达率分别为100.0%(25/25)、74.3%(26/35)、25.0%(5/20) 和10.0%(2/20)。宫颈癌组织中除1例p16INK4a蛋白为弱阳性表达外，其余24例均为阳性或强阳性表达。35例CIN组织中9例p16INK4a蛋白为阴性，14例为弱阳性表达，12例为阳性或强阳性表达。20例慢性宫颈炎组织中p16INK4a蛋白无阳性或强阳性表达，只有5例为弱阳性表达。20例子宫平滑肌瘤组织中p16INK4a蛋白无阳性或强阳性表达，只有2例为弱阳性表达。本研究结果显示：p16INK4a蛋白在宫颈癌、CIN、慢性宫颈炎和子宫平滑肌瘤组织中阳性表达率比较差异有统计学意义 (P < 0.05)，且宫颈癌组织中p16INK4a阳性表达率明显高于CIN、慢性宫颈炎和子宫平滑肌瘤组织。见表 1和图 1(插页四)。
| (x±s) | ||||||
| Group | n | p161INK4a protein | Positive rate (η/%) | |||
| (-) | (+) | ( |
﹙ |
|||
| Cervical cancer | 25 | 0 | 1 | 9 | 15 | 100.0 |
| CIN | 35 | 9 | 14 | 7 | 5 | 74.3 |
| Chronic cervicitis | 20 | 15 | 5 | 0 | 0 | 25.0 |
| Uterine leiomyoma | 20 | 18 | 2 | 0 | 0 | 10.0 |
| χ2=63.555, P=0.000. | ||||||
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| A: Cervical cancer; B:CIN Ⅲ; C: CINⅡ; D:CINⅠ; E: Chronic cervicitis; F:Uterine leiomyoma. 图 1 免疫组织化学染色检测不同类型病变组织中p16INK4a蛋白表达 (×100) Figure 1 Expressions of p16INK4a protein in different types of lesion tissues detected by immunohistochemical staining (×100) |
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INK4a是1993年Serrano等[3]在研究与细胞周期蛋白依赖性激酶作用的蛋白时首先确定的是一种直接参与细胞周期调控的抑癌基因，又称多肿瘤抑制基因 (MTSI)，是人类癌症中最容易被破坏的基因。研究[5]表明：INK4a基因位点异常在人类肿瘤中相当普遍，发生率可能仅次于p53，位居第2位。且在纯合缺INK4a基因的细胞中易发生恶性转化，表明INK4a基因是真正的抑癌基因[6-7]。研究[8-10]发现:INK4a在近100%的宫颈癌组织中过表达。
本研究结果显示：蒙古族患者宫颈癌、CIN、慢性宫颈炎和子宫平滑肌瘤组织中p16INK4a阳性表达率分别为100.0%、74.3%、25.0%和10.0%。在慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌中随着病变的加重，p16INK4a阳性表达率呈逐渐递增趋势，而在子宫平滑肌瘤与宫颈癌的发生发展中并无明显关联，显示该基因可能与蒙古族患者宫颈癌发病的演变过程有直接关系。p16INK4a的过表达意味着细胞的癌变程序已经被启动[11]。
TCT或HR-HPV的单一检测方法对宫颈上皮内高度病变阳性预测率低且细胞学敏感性差[12]；病理组织学诊断为形态学诊断，主观性较强，观察者间的重复率较低[13]；p16INK4a蛋白检测克服了上述缺点，且检测方法简便易行，操作容易，避免了形态学诊断的主观性，能够有效地降低漏诊率，提高灵敏度[14-16]。因此可以将p16INK4a蛋白作为筛选早期宫颈癌的一种检测手段，还有可能将INK4a基因作为早期分子诊断的一种标记性基因，加强宫颈癌的早期诊断。
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