痛风宁胶囊对小鼠高尿酸血症和肾脏功能的改善作用

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樊海瑞, 赵岩, 傅警龙, 张海波, 王德超, 郜玉钢, 张连学

FAN Hairui, ZHAO Yan, FU Jinglong, ZHANG Haibo, WANG Dechao, GAO Yugang, ZHANG Lianxue

痛风宁胶囊对小鼠高尿酸血症和肾脏功能的改善作用

Improvement effects of Tongfengning Capsule on hyperuricemia and renal function in mice

吉林大学学报(医学版), 2017, 43(05): 893-896

Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2017, 43(05): 893-896

10.13481/j.1671-587x.20170507

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收稿日期: 2017-04-08

引用本文

樊海瑞, 赵岩, 傅警龙, 张海波, 王德超, 郜玉钢, 张连学. 痛风宁胶囊对小鼠高尿酸血症和肾脏功能的改善作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(05): 893-896. 复制到剪切板

FAN Hairui, ZHAO Yan, FU Jinglong, ZHANG Haibo, WANG Dechao, GAO Yugang, ZHANG Lianxue. Improvement effects of Tongfengning Capsule on hyperuricemia and renal function in mice[J]. Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2017, 43(05): 893-896. 复制到剪切板

痛风宁胶囊对小鼠高尿酸血症和肾脏功能的改善作用

樊海瑞¹ , 赵岩¹ , 傅警龙² , 张海波² , 王德超² , 郜玉钢¹ , 张连学¹

1. 吉林农业大学中药材学院人参工程技术研究中心, 吉林长春 130118;
2. 长中风湿骨病医院风湿科, 吉林长春 130000

收稿日期: 2017-04-08

基金项目: 国家农业部公益性行业科研专项资助课题（201303111）；吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（20150204049YY，20140204013YY，20140311050YY）

作者简介: 樊海瑞(1990-), 女, 山东省济宁市人, 在读医学硕士, 主要从事天然药物化学成分和生物活性方面的研究。

通信作者: 赵岩, 教授, 硕士研究生导师(E-mail:zhyjlu79@163.com);
张海波, 副主任医师(E-mail:fengshiyiyuan@163.com)

[摘要]: 目的: 探讨痛风宁胶囊（TFN）对高尿酸血症模型小鼠血清中尿酸（UC）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平以及小鼠肝脏匀浆液中黄嘌呤氧化酶（XOD）和腺苷脱氨酶（ADA）活性的影响，观察TFN对高尿酸小鼠肾脏组织病理学变化的改善作用，阐明其作用机制。方法: 采用酵母膏合并氧嗪酸钾盐诱导建立小鼠高尿酸血症模型。将70只小鼠分为空白对照组，模型组，低（200 mg·kg^-1）、中（400 mg·kg^-1）和高剂量（800 mg·kg^-1）TFN组，别嘌醇（50 mg·kg^-1）和痛风舒（TFS，600 mg·kg^-1）阳性药对照组，每组10只，灌胃给药。实验结束后检测小鼠血清中UC、Cr和BUN水平以及小鼠肝脏匀浆液中XOD和ADA活性，HE染色观察小鼠肾脏组织病理表现。结果: 与空白对照组比较，模型组小鼠血清中UC、Cr和BUN水平明显升高（P < 0.01），肝组织中XOD和ADA活性亦升高（P < 0.01）；与模型组比较，阳性药对照组，低、中和高剂量TFN组小鼠血清中UC、Cr和BUN水平明显降低（P < 0.01），肝组织中XOD和ADA活性降低（P < 0.05或P < 0.01），其中高剂量TFN组效果最为明显。光镜下观察，与模型组比较，阳性药对照组和高剂量TFN组小鼠肾脏肾小球萎缩、肾间质纤维化和肾小管扩张等病理变化得到一定程度上改善。结论: TFN对小鼠高尿酸血症具有一定的改善作用，其机制与抑制UC生成和促进UC排泄有关。

关键词: 痛风宁胶囊高尿酸血症酵母膏氧嗪酸钾盐

Improvement effects of Tongfengning Capsule on hyperuricemia and renal function in mice

FAN Hairui¹, ZHAO Yan¹, FU Jinglong², ZHANG Haibo², WANG Dechao², GAO Yugang¹, ZHANG Lianxue¹

1. Research Center of Ginseng Engineering Technology, College of Chinese Medicine Material, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;
2. Department of Rheumatism, Changzhong Rheumatism Hospital, Changchun 130000, China

[Abstract]: Objective: To discuss the influence of Tongfengning Capsule(TFN)in the levels of uricacid(UC), creatinine (Cr) and urea nitrogen(BUN) in mouse serum and the activities of the xanthine oxidase(XOD), adenosine deaminase (ADA) activity in the liver homogenate of the mice with hyperuricemia, and to observe the improvement effect of TFN on the pathological changes of liver tissue and to clarify its mechanisms. Methods: The models of mouse hyperuricemia were induced by yeast extract with potassium oxonate. Seventy mice were divided into blank control group, model group, low(200 mg·kg^-1), medium(400 mg·kg^-1)and high(800 mg·kg^-1) doses of TFN groups, allopurinol positive drug control group(50 mg·kg^-1), Tongfengshu(TFS, 600 mg·kg^-1) positive drug control group(n=10). The levels of UC, Cr, BUN in serum and the activities of XOD, ADA in homoggenate were detected and the histopathological changes of the kidney tissue of the mice were measured with HE staining. Results: Compared with blank control group, the levels of serum UC, Cr and BUN of the mice in model group were significantly increased(P < 0.01), and the activities of XOD and ADA in liver tissue were also increased(P < 0.01). Compared with model group, the levels of serum UC, Cr and BUN of the mice in positive drug control groups and different doses of TFN groups were decreased (P < 0.01), and the activities of XOD and ADA in liver tissue were also decreased (P < 0.05), especially in high dose of TFN group.Compared with model group, the pathologic changes such as renal glomerulus atrophy, renal interstitial fibrosis and expansion of renal tubule of the mice in positive drug control groups and high dose of TFN group were improved to a certain extent. Conclusion: TFN has improvement effcet on the hyperuricemia in the mice and its mechanism is related to the inhibition of uricogenesis and the promotion of UC excretion.

Key words: Tongfengning Capsule hyperuricemia yeast extract potassium oxonate

痛风是一组嘌呤代谢紊乱、血尿酸水平升高所致组织损伤的一类异质性疾病，并常累及肾脏，引起肾尿酸结石及肾间质病变^[1]。目前用于治疗痛风的药物主要有秋水仙碱、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)抑制剂、非甾体抗炎药(NSAIDs)、促肾上腺皮质激素类(ACTH)和皮质类固醇类药物等^[2]。此类药物虽作用迅速、效果明显，但患者需长期使用且常伴有严重的不良反应，如秋水仙碱具有恶心、腹泻等不良反应，非甾体抗炎药会导致肾损伤或胃肠道溃疡、出血等，IL-1β抑制剂有加重痛风症状的危险^[3]。介于以上不良反应，临床上痛风的治疗会遇到对各种药物使用的限制问题。而传统中医药在治疗疾病方面具有不良反应小等优点，因此开发和利用治疗痛风的中药迫在眉睫。我国相关专业人士在创建痛风相关模型、药物疗效等领域进行了大量研究，并且证实中药具有治疗痛风及其并发症的效果^[4-8]。痛风宁(Tongfengning, TFN)胶囊组方由土茯苓、泽兰、蚕砂、黄柏、大黄和金钱草等21味中药组成，是长春中医药大学风湿医院临床多年应用的经验方，在临床上使用十几年^[9]。本研究主要观察不同剂量TFN对酵母膏灌胃诱导小鼠高尿酸血症的改善作用，为进一步开发和利用TFN提供理论依据。

1 材料与方法 1.1 实验动物、药物、主要试剂和仪器

KM雄性小鼠，SPF级，体质量(20±2) g，购于长春市生物制品研究所有限责任公司，动物许可证号：SCXK(吉)2011-0003。TFN(规格：0.5 g，批准文号：吉药制字Z2007A050) 由长春市长中风湿骨病医院提供，痛风舒(Tongfengshu, TFS)片(规格：0.3 g，生产批号：20141201)，山西仁源堂药业有限公司生产；别嘌醇片(规格：0.1 g，生产批号：20150422)，为世贸天阶制药(江苏)有限责任公司产品；酵母膏(规格：500 g，产品批号：20160220)，北京奥博星生物技术责任有限公司；氧嗪酸钾盐(CAS，2207-75-2)，美国Sigma公司；尿酸(UC)试剂盒(生产批号：1062693)、肌酐(Cr)试剂盒(生产批号：1064381)、尿素氮(BUN)试剂盒(生产批号：1062696)、黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒(生产批号：1059874) 和腺苷脱氨酶(ADA)试剂盒(生产批号：1065878) 均购自长春百金生物科技有限公司；其他试剂均为分析纯。酶标仪(SPECTRAMAX，190)，美谷分子仪器(上海)有限公司。

1.2 实验动物模型的制备及分组

取70只健康小鼠适应性饲养1周后随机分为7组，即空白对照组，模型组，别嘌醇阳性药对照组，TFS阳性药对照组，低、中、高剂量TFN组，每组10只。参照文献[10-11]略做改变制作小鼠高尿酸血症模型，除空白对照组之外，其他各组小鼠均以酵母膏30 g·kg^-1灌胃给药进行造模，每天1次，第14天灌胃酵母膏后再腹腔注射氧嗪酸钾盐300 mg·kg^-1。第8天开始灌胃给药，共给药7 d。根据人与实验动物给药量的剂量换算^[12]，给药组低、中、高剂量分别为200、400和800 mg·kg^-1，阳性药别嘌醇片剂量为50 mg·kg^-1，阳性药TFS剂量为600 mg·kg^-1。给药期间空白对照组和模型组小鼠均灌胃等量生理盐水。

1.3 检测指标及方法^[13]

第14天给药1 h后，空白对照组、模型组小鼠腹腔注射生理盐水，其余各组小鼠腹腔注射氧嗪酸钾盐300 mg·kg^-1，注射1 h后摘眼球取血，3 000 r·min^-1离心10 min，分离血清，按试剂盒说明书操作，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中尿酸(UC)、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平。取各组小鼠肝脏迅速与生理盐水1:9混合，匀浆。匀浆液取上清用于测定小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)和腺苷脱氨酶(ADA)活性。

1.4 小鼠肾脏组织病理表现观察

第14天给药1 h后，小鼠脱颈椎处死，取其肾脏组织，用预冷生理盐水清洗并称质量，然后将一侧肾脏用10%甲醛溶液固定24 h，脱水石蜡包埋，切片，置于干净载玻片后，用苏木素-伊红(HE)染色，光镜下观察肾组织病理表现。

1.5 统计学分析

采用SPSS 16.0统计软件进行统计学分析。小鼠血清中UC、Cr和BUN水平及肝脏生化指标等均以x±s表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间比较采用SNK-q法检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 各组小鼠血清中UC、Cr和BUN水平

与空白对照组比较，模型组小鼠血清中UC、Cr和BUN水平均明显升高(P < 0.01)，表明高尿酸血症小鼠模型造模成功。与模型组比较，别嘌醇阳性对照组、TFS阳性对照组和各剂量TFN组小鼠血清中UC、Cr和BUN水平均明显降低(P < 0.01)，其中高剂量TFN组(800 mg·kg^-1)与空白对照组最为接近，其效果最明显。见表 1。

表 1 各组小鼠血清中UC、Cr和BUN水平 Table 1 Levels of serum UC, Cr and BUN in mice in various groups

(n=10, x±s)
Group	Dose(mg·kg^-1)	UC[ρ_B/(g·L^-1)]	Cr[c_B/(μmol·L^-1)]	BUN[c_B/(pmol·L^-1)]
Blank control	0	52.56±8.44	108.45±11.03	15.42±5.46
Model	0	102.78±10.51^*	187.38±15.97^**	27.59±7.31^*
Allopurinol	50	57.95±7.49^△△	113.94±11.06^△△	16.42±4.54^△△
TFN	600	58.41±9.62^△△	113.21±10.45^△△	16.55±6.41^△△
Low	200	70.84±8.58	167.62±15.00	22.13±7.50
Medium	400	60.90±9.69^△	132.00±13.24^△	18.76±7.32^△
High	800	57.63±8.51^△△	113.26±12.89^△△	16.31±6.50^△△
^P < 0.05, ^* P < 0.01 vs blank control group；^△P < 0.05, ^△△P < 0.01 vs model group.

表选项

2.2 各组小鼠肝组织中XOD和ADA活性

与空白对照组比较，模型组小鼠肝脏ADA、XOD的活性明显升高(P < 0.01)，表明高尿酸血症小鼠模型造模成功。与模型组比较，阳性对照组和中、高剂量TFN组小鼠肝组织中XOD活性明显降低(P < 0.05或P < 0.01)，阳性对照组和高剂量TFN组小鼠肝组织中ADA活性较模型组降低(P < 0.05)，低、中剂量TFN组小鼠肝组织中ADA活性差异无统计学意义(P＞0.05)。见表 2。

表 2 各组小鼠肝脏组织中XOD和ADA活性 Table 2 Activities of XOD and ADA in liver tissue of mice in various groups

(n=10, x±s)
Group	Dose(mg·kg^-1)	XOD[λ_B/(U·L^-1)]	ADA[λ_B/(U·mL^-1)]
Blank control	0	18.38±6.41	20.87±6.31
Model	0	31.14±11.54^*	29.21±9.35^*
Allopurinol	50	19.24±7.60^△△	23.00±7.41^△
TFN	600	20.12±7.32^△△	23.30±7.38^△
Low	200	24.13±8.65^△△	26.22±7.63^△
Medium	400	22.64±8.42^△	24.42±6.47
High	800	19.89±6.75^△△	24.15±5.56^△
^* P < 0.01 vs blank control group；^△P < 0.05, ^△△P < 0.01 vs model group.

表选项

2.3 各组小鼠肾脏组织病理表现

空白对照组小鼠肾组织结构正常，肾小球大小正常，相互间隔较均匀，肾间质含量丰富。模型组小鼠肾组织中肾小球萎缩变形，肾小管上皮细胞呈现明显的水肿现象。阳性药对照组及各剂量TFN组小鼠肾组织中肾小球结构几乎恢复正常，数目也较模型组明显增多，肾小球萎缩现象也得到一定程度的改善。阳性药对照组和高剂量TFN组小鼠肾小球、肾间质和肾小管均接近空白对照组。图 1(插页三)。

A:Blank control group;B：Model group;C:Allopurinol group;D:TFS group;E:Low dose of TFN group;F: Medium dose of TFN group;G:High dose of TFN group. 图 1 各组小鼠肾脏组织病理学变化(HE,×400) Figure 1 Pathological changes of kidney tissue of mice in various groups(HE,×400)

图选项

3 讨论

近年来，随着人们生活水平的提高以及生活方式的改变，嘌呤类食物摄入量不断增加，高尿酸血症患病率也逐年上升^[14]，并且日渐趋向年轻化^[15-16]。现代研究^[17]证明：许多中药具有降低血UC、抑制UC合成、减轻肾脏炎性改变、减少尿蛋白排出、保护肾脏的作用，且不良反应少，安全性高，中医药在治疗本病上具有标本兼治的特点，同时中药复方联合用药具有增效减毒的优势。因此研究与开发具有痛风治疗效果的中药复方具有重要意义。

本研究结果显示：TFN能够较好地改善高尿酸血症患者的肾脏病理变化，且疗效与药物浓度有关联。在本研究中，模型组小鼠血清中UC、Cr和BUN水平以及肝脏组织中XOD及ADA水平均明显升高；肾脏病理切片显示肾小球萎缩、肾小管扩张和肾间质纤维化等表现。TFN组小鼠血清中UC、Cr和BUN水平以及肝组织中XOD及ADA活性均降低；同时，与模型组比较，TFN组小鼠肾脏病理变化有所缓解，其中高剂量TFN组小鼠高尿酸血症改善效果最为明显。黄酮类化合物如槲皮素、山奈酚、木犀草素和桑色素等对于治疗痛风发挥着重要作用^[18-20]。本课题组前期研究结果显示：本组方中药物含有生物碱及黄酮类等化合物。本实验结果为进一步利用该组方治疗高尿酸血症提供了坚实的理论依据。

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