临床上 冠心病主要表现为心绞痛、心肌梗死等心肌缺血性改变^[1]。急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是在冠状动脉闭塞或冠状动脉病变的基础上，由于冠状动脉供血急剧减少或者中断，使相应区域的心肌发生严重而持久的缺血所致^{[2, 3]}。山楂叶总黄酮(Hawthorn Leaves Flavonoids，HLF)是从花期山楂的叶子中提取的黄酮类化合物的总称，具有资源广泛、有效成分含量高等特点^{[4, 5, 6]}。现代药理学研究^{[7, 8, 9]}表明：山楂叶总黄酮具有抗动脉粥样硬化、抗氧化、降血糖和抗血小板凝聚等药理作用，但是山楂叶总黄酮对心血管作用的相关研究较少，特别是缺乏大型动物的实验数据^{[10, 11]}。本研究旨在探讨山楂叶总黄酮对实验性AMI犬的保护作用，为山楂叶总黄酮的临床应用奠定实验基础。

健康杂种犬，雌雄兼用，体质量11.5~14.5 kg，动物许可证号：SCXK-(吉)2003-0001, 吉林大学基础医学院动物实验中心提供。 山楂叶总黄酮注射液(长春普华药业有限公司，批号20040916)，复方丹参注射液(长春正大青春宝药业有限公司，批号030115)，戊巴比妥钠(中国上海禾丰制药有限公司，批号010512)，硝基四氮唑蓝(NBT，上海丽珠东风生物有限公司，批号030124)，乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸磷酸激酶(CPK)检测试剂盒(北京中山生物技术有限公司，批号20051012和20051020)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)检测试剂盒(南京建成生物技术有限公司，批号20051011、20050917和20050905)。 RM-6000 型多道生理记录仪和MFV-1100 型电磁流量计(日本光电工业株式会社)，GF-D200半自动生化测定仪(中国山东高密彩虹分析仪器有限公司)，SC-3 型电动呼吸机(中国上海医疗器械厂)，6010紫外分光光度计(中国上海分析仪器厂)。

36只健康杂种犬随机分为6组，每组6只，分别为假手术组、模型组(给予相同体积的生理盐水)、复方丹参注射液组(1.65 mg·kg ^-1)和山楂叶总黄酮低、中、高剂量组(5、10和20mg·kg^-1)，静脉滴注给药。 吉林大学学报(医学版) 第42卷 第1期 2016年1月 孙建峰，等. 山楂叶总黄酮对实验性心肌梗死犬的保护作用

犬称体质量后，以戊巴比妥钠30 mg·kg^-1静脉注射麻醉，背位固定，颈部皮肤切开，气管插管，连接电动呼吸机，分离右颈动脉，连接AP-601G放大器，测定血压。分离股动脉，心室内插管，测定左室内压、左室舒张期末压，经微分处理器EQ-601G测定左室内压最大变化速率(±dp/dt_max)。于左侧第4肋间施开胸术，暴露心脏，剪开心包。分离冠脉左回旋支的钝缘支、左冠状动脉前降支(LAD)和与钝缘支相连的各侧支及吻合支以备结扎。连接心电电极，通过AB-601生物电放大器记录标准Ⅱ导联心电图，并用AT-601放大器检测心率(HR)。稳定20 min，待各项指标趋于正常时开始记录，同时以生理盐水浸泡的棉线吸附电极标测预计梗死区24点心外膜电图(EECG)，分正常区、梗死边缘区和梗死中心区。计算实验过程中各个标测点平均ST段抬高的mV值和ST段升高总和(∑ST)，以及结扎前后的∑ST差值(△∑ST)，观察心肌缺血的程度。结扎LAD，复制AMI模型。各组犬结扎(假手术组切开缝合，不结扎)后立即用恒速输液泵从右侧股静脉给予预先配制好的药物，于给药后30、60、90、120、180、240、300和360 min测定各项指标。

给药后360 min主动脉取血5mL，2500 r·min^-1离心10 min，取上清，分别按照试剂盒说明书检测AST、CPK、LDH和SOD活性及MDA水平。

实验结束后取犬心脏，称全心质量，沿冠状沟剪去大血管根部和心房，称左心室质量。将左心室均匀地横断切成5~6片，置于NBT染液中，在37℃恒温水浴箱中染色15 min。梗死区不着色，非梗死区被NBT染为蓝色。剪去各心肌片被染为蓝色的非梗死区心肌，将未染色的梗死心肌质量除以全心质量和心室质量，分别得到梗死范围占全心质量和心室质量的百分比(%)。

采用SPSS 15.0统计软件进行统计学处理。血清酶水平及活性、MIS和∑-ST值均以 x±s表示，各组间比较采用单因素方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

与假手术组比较，模型组AST、CPK、LDH活性和MDA水平明显升高(P<0.05)，SOD活性明显降低 (P<0.05)。与模型组比较，复方丹参注射液组和山楂叶总黄酮中、高剂量组犬血清中AST、CPK、LDH活性和MDA水平降低，SOD活性升高(P<0.05或P<0.01)。见表 1。

与假手术组比较，模型组犬全心质量百分比和心室质量百分比明显升高 (P<0.05或P<0.01)。与模型组比较，复方丹参注射液组和山楂叶总黄酮各剂量组犬全心质量百分比和心室质量百分比均明显降低(P<0.05或P<0.01)。见表 2。

与假手术组比较，模型组犬结扎后不同时间点心电图的∑ST明显升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较，丹参注射液组和山楂叶总黄酮中、高剂量组犬心电图的∑ST明显降低(P<0.05或P<0.01)。见表 3。

目前研究心肌梗死的方法很多，但均存在一定的局限性，因此常采用多种方法、多种指标进行综合研究。心肌细胞内含有丰富的酶，如AST、CK和LDH等心肌酶。当冠状动脉阻塞后，冠状动脉周围的心肌细胞会立刻产生缺血缺氧现象，之后心肌细胞损伤，心肌细胞膜的完整性受到破坏，通透性增加，使心肌细胞内的心肌酶外漏到血液中，所以测定血清中心肌酶的浓度可以直接判断心肌缺血的损伤程度^[12]。本研究结果表明：山楂叶总黄酮可不同程度地减少酶的释放，其作用机制可能是降低缺血心肌细胞膜和细胞器膜的通透性，保护心肌细胞膜的完整性和稳定性，而对缺血心肌细胞产生明显保护作用^[13]。在结扎LAD所导致犬 AMI的早期， 利用心外膜电图标测ST段变化，并计算MIS大小，观察心肌血量的供应状态及缺血程度。本研究结果显示：山楂叶总黄酮能明显降低AMI犬∑ST和MIS，其可能是通过抑制心肌供氧与耗 氧失衡、增加冠状动脉血流量、降低心肌耗氧量和改善心肌氧的供求关系,从而保护心脏功能；另外还可能与保护血管内皮、舒张痉挛血管、抑制血小板聚集、改善心肌供血及增加抗氧化功能有关^{[14, 15, 16, 17]}。

综上所述，山楂叶总黄酮对实验性犬的心肌梗死有较好的保护作用，但其确切的作用机制有待于进一步研究确定。本研究结果为山楂叶总黄酮的应用与开发提供了依据。