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文章信息
- 班硕丰, 张诗晨, 孙一丹, 王婧, 韩冰
- BAN Shuofeng, ZHANG Shichen, SUN Yidan, WANG Jing, HAN Bing
- 核内不均一核糖核蛋白D和上皮细胞黏附分子在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其意义
- Expressions of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D and epithelial cell adhesion molecule in oral squamous cell carcinoma tissue and their significances
- 吉林大学学报(医学版), 2020, 46(03): 589-593
- Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2020, 46(03): 589-593
- 10.13481/j.1671-587x.20200312
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文章历史
- 收稿日期: 2019-09-16
2. 吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室, 吉林 长春 130021
2. Key Laboratory of Tooth Development and Jaw Bone Remodeling and Regeneration, Jilin Province, Changchun 130021, China
研究[1-2]显示:口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)发病率居世界恶性肿瘤发病率的第六位,也是最常见的头颈部恶性肿瘤,主要发生在口腔黏膜如舌、口底、颊和牙龈等处。OSCC经常发生侵袭和远处转移[3],严重威胁患者生命。核内不均一核糖核蛋白D(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D,hnRNPD)亦称AUF1,是hnRNP家族中的成员,是一种核酸结合蛋白。研究[4-5]表明:hnRNPD参与调节多种生物学途径,与炎症、癌症、心血管疾病、衰老和病毒感染等多种疾病相关。上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)是一种相对分子质量为40 000的跨膜表面糖蛋白。EpCAM在多种上皮源性癌组织中高表达,而在正常上皮组织中低表达,因此被认为是一种肿瘤标记物[6]。目前有关hnRNPD和EpCAM在OSCC组织中表达情况的报道较少,并且结论并不完全一致。本研究采用免疫组织化学SP法检测OSCC患者OSCC组织中hnRNPD和EpCAM表达情况,探讨hnRNPD和EpCAM在OSCC组织中表达的意义,为其在OSCC临床诊断和治疗中发挥作用奠定基础。
1 材料与方法 1.1 临床资料收集2018年6月—2019年6月吉林大学口腔医院手术切除的38例经病理检查确诊的OSCC组织标本(OSCC组),均为原发病灶。标本来源患者均为首次手术,术前未经放、化疗,患者临床资料完整。患者年龄24~77岁,中位年龄56岁,男性30例,女性8例;临床TNM分期:Ⅰ期6例,Ⅱ期17例,Ⅲ期10例,Ⅳ期5例;组织病理学分级:高分化12例,中分化21例,低分化5例。另在正常拔牙患者口腔内采集正常黏膜组织11例(对照组)。
1.2 主要试剂和仪器hnRNPD兔抗人多克隆抗体和EpCAM兔抗人多克隆抗体(美国Proteintech Group Inc公司),免疫组织化学试剂盒和DAB显色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司),枸橼酸盐缓冲液和抗体稀释液(北京中杉金桥生物技术有限公司); 超薄切片机(德国Leica Biosystems公司),显微镜(日本Olympus公司)。
1.3 免疫组织化学SP法检测OSCC组织和正常口腔黏膜组织中hnRNPD和EpCAM表达水平全部组织标本离体后立即置于10%中性甲醛中固定,常规石蜡包埋,3μm厚连续切片。常规脱蜡水化后,采用枸橼酸盐缓冲液微波修复,按照即用型免疫组织化学超敏SP检测试剂盒说明书进行染色。其中hnRNPD一抗(1:200)和EpCAM一抗(1:200)4℃孵育过夜,DAB显色时间控制在1.5~2.0 min,以PBS代替一抗作为空白对照组。
1.4 结果判定标准由病理科医师在双盲条件下对每个样本切片选取5个癌细胞聚集的高倍镜视野,采用Image Pro Plus v6.0分析其平均光密度(mean optical density,MOD)值,以MOD值表示样本的染色强度。
1.5 统计学分析采用SPSS25.0统计软件进行统计学分析。采用Shapiro-wilk法对OSCC组织和正常口腔黏膜组织中hnRNPD和EpCAM表达水平进行正态性检验(W检验)。采用Levene法对资料进行方差齐性检验(F检验),以P>0.05为资料符合方差齐性。若资料符合正态分布,则以
OSCC组hnRNPD主要表达在细胞核,呈棕色或褐色;而对照组hnRNPD染色呈淡黄色或黄色,且着色细胞数较少。OSCC组EpCAM主要表达在细胞膜,少量表达在细胞质,染色呈棕黄色或褐色;对照组EpCAM表达较少且染色减弱。OSCC组和对照组hnRNPD和EpCAM表达水平均呈非正态分布,方差齐性检验结果显示:hnRNPD和EpCAM表达水平方差不齐。OSCC组和对照组中hnRNPD和EpCAM表达水平比较差异有统计学意义(P < 0.01)。见图 1(插页八)和表 1。
Group | n | MOD of hnRNPD(×10-2) | Z | P | MOD of EpCAM(×10-2) | Z | P |
OSCC Control |
38 11 |
1.88(1.89, 3.13) 0.11(0.07, 0.25) |
-4.936 | <0.01 | 0.35(0.56, 1.77) 0.09(0.07, 0.14) |
-2.780 | 0.005 |
38例OSCC患者OSCC组织中hnRNPD表达水平和EpCAM表达水平分别为[1.88(1.06, 3.96)]×10-2和[0.35(0.09, 1.50)]×10-2, 两者相关性较弱(Spearman相关系数ρ=0.227,P=0.17),OSCC组织中hnRNPD与EpCAM的表达无相关性。
2.3 不同临床病理特征患者OSCC组织中hnRNPD和EpCAM表达水平对38例OSCC组织样本按照性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、病理分期和淋巴结转移情况分别分组,组间比较采用非参数秩和检验分析结果显示:不同性别和不同年龄OSCC患者OSCC组织中EpCAM表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);不同临床病理特征OSCC患者OSCC组织中hnRNPD表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表 2。
Clinicopathological parameter | n | MOD of hnRNPD(×10-2) | Z | P | MOD of EpCAM(×10-2) | Z | P |
Gender | |||||||
Male Female |
30 8 |
2.11(2.05, 3.55) 1.28(0.89, 1.97) |
-1.575 | 0.115 | 0.40(0.67, 2.16) 0.07(0, 0.52) |
-2.471 | 0.013 |
Age(year) | |||||||
≤60 >60 |
24 14 |
1.28(1.52, 3.20) 2.36(1.76, 3.78) |
-1.332 | 0.183 | 0.25(0.26, 1.66) 0.55(0.27, 2.75) |
-1.967 | 0.049 |
Size of tumor | |||||||
≤4 cm >4 cm |
27 11 |
1.52(1.69, 3.21) 2.10(1.37, 3.95) |
-0.531 | 0.595 | 0.35(0.46, 2.10) 0.42(0.11, 1.66) |
-0.113 | 0.910 |
TNM stage | |||||||
Ⅰ-Ⅱ Ⅲ-Ⅳ |
23 15 |
1.52(1.62, 3.16) 2.10(1.53, 3.86) |
-0.403 | 0.687 | 0.32(0.24, 1.83) 0.63(0.32, 2.42) |
-0.911 | 0.362 |
Pathological stage | |||||||
Ⅰ Ⅱ-Ⅲ |
12 26 |
1.27(2.05, 3.55) 2.36(2.08, 3.71) |
-1.727 | 0.084 | 0.33(0.16, 0.90) 0.39(0.59, 2.33) |
-0.408 | 0.683 |
Lymph node metastasis | |||||||
Positive Negative |
28 10 |
1.52(0.83, 3.94) 2.03(1.85, 3.27) |
-0.431 | 0.667 | 0.64(0.04, 3.21) 0.31(0.34, 1.66) |
-0.729 | 0.466 |
作为一种核酸结合蛋白,hnRNPD通过与多种mRNA和DNA序列结合来调控基因表达,其参与机体多种病理生理过程,如细胞增殖、分化、衰老、免疫和癌变等。研究[7-9]表明:hnRNPD在多种恶性肿瘤,如甲状腺癌、乳腺癌、宫颈癌、食管癌和小鼠肺部肿瘤等组织中均呈现过表达,显示其与肿瘤的发生发展有着密切关联。但也有研究[10]表明:hnRNPD有抑制肿瘤的作用。hnRNPD减少了促血管生成因子的产物[11]可能是其抑制肿瘤的机制之一。EpCAM不仅在细胞间黏附中发挥作用,还在细胞信号传导、增殖和分化等方面发挥重要作用,在人体部分正常上皮细胞和大多数恶性肿瘤细胞中均表达[10],并且在多数上皮性肿瘤[6]、腺癌[12]和急性髓细胞性白血病[13]组织中表达上调。在正常细胞中,EpCAM似乎被隔离在紧密的连接中,因此抗体难以接近,而在癌细胞中,EpCAM广泛分布在细胞表面[14-15]。LEE等[16]研究证明:EpCAM在腺样囊性癌中表达上调并与多个临床特征相关。EpCAM在乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、尿路上皮癌和胆囊癌等组织中的高表达与预后不良相关,而在肾癌和甲状腺癌组织中的高表达则与生存率提高有关[6, 17],这可能是因为EpCAM参与细胞黏附,也有研究[18]证明:EpCAM基因突变可导致先天性簇状肠病和林奇综合征。
OSCC严重威胁患者生命,其发生与多种信号通路和相关蛋白的表达有关[19]。本研究结果显示:OSCC组织中hnRNPD和EpCAM表达水平均上调,显示二者与OSCC发生发展相关。KUMAR等[20]研究亦证明:OSCC组织中hnRNPD高表达,同时显示hnRNPD表达与肿瘤大小和肿瘤分期有关;ZHANG等[21]研究显示:hnRNPD是OSCC患者生存相关的剪切因子之一,与肿瘤的发生有关。本文作者进一步分析发现:hnRNPD表达水平与患者临床病理参数无明显关联,原因可能为本实验样本量较少;EpCAM表达水平仅与患者的性别和年龄有关联。SEN等[22]研究证明:OSCC组织中EpCAM高表达,并且其表达情况与肿瘤大小、病理分级、局部肿瘤复发情况和患者生存率有关联,而LAIMER等[23]研究结果则显示:OSCC组织中EpCAM表达与肿瘤分级、临床分期、淋巴结转移和受体状态无明显相关性。对于EpCAM与临床病理特征的关系尚无定论。HAYRY等[24]在研究中采用EpCAM作为标志物,对头颈部鳞状细胞癌转移的淋巴结细胞检测的效果较好。恶性肿瘤的发生发展中往往有2种或多种物质发生协同或拮抗作用[25-26]。本文作者对hnRNPD和EpCAM表达相关性分析结果显示:OSCC组织中hnRNPD和EpCAM表达水平相关关系较弱,提示在OSCC的发生发展中,hnRNPD和EpCAM所在的信号通路可能是2个关联较少或不相关联的系统。
综上所述,hnRNPD和EpCAM与OSCC存在密切关联。未来仍需进一步研究二者参与OSCC发生发展的机制,以期为将hnRNPD和EpCAM表达水平作为OSCC诊断和治疗的靶点提供进一步的理论基础。
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