围绝经期综合征(perimenopausal syndrome，PMS)是女性常见病和多发病，临床表现常见潮热盗汗、耳鸣失眠、情绪不稳定和眩晕等，严重影响中老年女性生活质量^[1]。现临床上多采用激素替代疗法，可有效改善相关临床症状，但不良反应较多^[2]。随着社会老年化的发展，围绝经期女性越来越多，2型糖尿病PMS引起临床研究人员的重视。目前对2型糖尿病PMS的治疗主要通过给予激素改善患者因激素不足引起的相关症状^[3]，但采用激素治疗存在适应证、禁忌证和不良反应，容易引起血栓的形成，并增加肿瘤发生的概率^[4]。研究^[5]显示：雌激素具有抗氧化作用，雌激素水平下降可以引起氧化应激损伤并导致胰岛素抵抗和β细胞功能受损。氧化应激在2型糖尿病围绝经期中起重要作用。大豆异黄酮存在于植物中，结构与雌二醇(estradiol, E2)相似，可以与雌激素受体结合，能够替代机体内雌激素，可防治骨质疏松和改善糖尿病症状^[6-8]。目前关于大豆异黄酮对2型糖尿病围绝经期氧化应激影响的研究尚未见报道，本研究通过采取手术去势方法建立2型糖尿病去卵巢大鼠模型，模拟卵巢功能渐衰的过程，观察各组大鼠性激素水平和抗氧化能力的变化，探讨大豆异黄酮对2型糖尿病围绝经期模型大鼠氧化应激损伤的保护作用，为PMS的临床研究提供理论依据。

60只洁净级健康雌性Wistar大鼠，6月龄，体质量为(200±20)g，购自河北医科大学实验动物中心，合格证号：SYXK(冀)2018-008。链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)购自美国Sigma公司，青霉素购自北京鼎国昌盛生物有限责任公司，水合氯醛购自国药集团上海化学试剂公司，大鼠E2试剂盒、促卵泡生成素(follicle stimulating hormone, FSH)和促黄体生成素(luteinizing hormone, LH)试剂盒购自美国R&D公司，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)、一氧化氮(NO)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)和活性氧(active oxygen, ROS)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。超纯水机购自重庆前沿水处理设备有限公司, BS210S分析天平购自北京市赛多利斯天平责任有限公司, 血糖仪购自美国理康公司。

造模雌性大鼠喂食高糖高脂饲料(含20%蔗糖、2.5%胆固醇和15%猪油)，8周后腹腔注射STZ 30 mg·kg^-1[9]。于第9周尾静脉取血，测定空腹血糖，以FBG≥7.8 mmol·L ^-1且伴有胰岛素抵抗为2型糖尿病模型造模成功的标准^[10]。将60只大鼠随机取10只为对照组(n=10), 其余大鼠采用高糖高脂饲料喂养及切除双侧卵巢的方法建立2型糖尿病围绝经期大鼠模型, 造模成功的46只大鼠随机分为假手术组(n=9)，模型组(n=8), 低(n=9)、中(n=10)和高(n=10)剂量大豆异黄酮组。2型糖尿病造模成功的大鼠以3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，于背部中下1/3处沿背部中线解剖，切除两侧卵巢(假手术组大鼠切除两侧卵巢下方的部分脂肪组织)，缝合，术后肌肉注射青霉素，每天1次，连续注射3 d，第4天开始阴道涂片观察动情周期，连续观察6 d，以动情周期无变化为确定围绝经期模型建立成功的标准^[11]。除对照组外，将其余大鼠随机分为假手术组，模型组，低、中和高剂量大豆异黄酮组。手术后第10天，低剂量大豆异黄酮组大鼠灌胃给予90 mg·kg^-1(成人每日推荐量的3倍)大豆异黄酮，中剂量大豆异黄酮组大鼠灌胃给予180 mg·kg^-1 (成人每日推荐量的6倍)大豆异黄酮，高剂量大豆异黄酮组大鼠灌胃给予360 mg·kg^-1(成人每日推荐量的12倍)大豆异黄酮，每天1次；对照组、假手术组和模型组大鼠分别灌胃给予等体积蒸馏水，每天1次，连续8周，每5 d测量大鼠体质量和FBG水平。

各组大鼠给药8周后，禁止喂食12 h。腹腔注射3.5%水合氯醛(10 mL·kg^-1)麻醉后，仰位固定大鼠，腹主动脉取血，室温放置20 min，4 000 r·min^-1离心10 min，分离血清。采用ELISA法测定各组大鼠血清E2、FSH和LH水平，测定各组大鼠血清SOD、GSH-PX、NO、MDA和ROS水平，实验过程严格按照试剂盒说明书操作。

采用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析。各组大鼠体质量，FBG水平和血清E2、FSH、LH、SOD、GSH-Px、NO、MDA及ROS水平均符合正态分布，以x±s表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用独立样本t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

注射STZ后第2天，模型组，低、中和高剂量大豆异黄酮组大鼠均出现多尿多饮，毛色暗淡干枯。实验过程中对照组大鼠无死亡，假手术组大鼠死亡1只，模型组大鼠死亡2只，中和高剂量大豆异黄酮组大鼠无死亡，低剂量大豆异黄酮组1只大鼠FBG水平未达到糖尿病标准，因此剔除。

与对照组比较，假手术组和模型组大鼠体质量明显降低(P < 0.05)，FBG水平明显升高(P < 0.05)。假手术组和模型组大鼠体质量、FBG水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较，低、中和高剂量大豆异黄酮组大鼠体质量明显升高(P < 0.05)，FBG水平明显降低(P < 0.05)。与低剂量大豆异黄酮组比较，中和高剂量大豆异黄酮组大鼠体质量升高(P < 0.05)，FBG水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表 1。

对照组和假手术组大鼠血清E2、FSH和LH水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较，模型组大鼠血清E2水平明显降低(P < 0.05)，FSH和LH水平明显升高(P < 0.05)；与模型组比较，低、中和高剂量大豆异黄酮组大鼠血清E2水平明显升高(P < 0.05)，FSH和LH水平明显降低(P < 0.05)。低、中和高剂量大豆异黄酮组大鼠血清E2、FSH和LH水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表 2。

与对照组比较，假手术组和模型组大鼠血清SOD、GSH-Px和NO水平明显降低，MDA和ROS水平明显升高(P < 0.05)。模型组大鼠血清SOD、GSH-Px和NO水平明显低于假手术组(P < 0.05)，MDA和ROS水平明显高于假手术组(P < 0.05)。与模型组比较，低、中和高剂量大豆异黄酮组大鼠血清SOD、GSH-Px和NO水平明显升高(P < 0.05)，MDA和ROS水平明显降低(P < 0.05)。低、中和高剂量大豆异黄酮组大鼠血清SOD、GSH-Px、NO、MDA和ROS水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表 3。

妇女进入围绝经期，卵巢功能逐渐衰退，雌激素分泌减少，垂体促性腺激素水平代偿性增高，导致下丘脑及神经系统中枢功能失调，引起PMS^[12]。雌激素作为一种重要激素，在肾上腺素的作用下主要由卵巢分泌，对女性生理健康发育至关重要。E2是女性性激素中最主要的雌激素之一，是促进女性内外生殖器发育、维持女性性功能及第二性征的重要激素^[13]。研究^[14]表明：E2能够增加氧化酶表达，起增强抗氧化的作用。FSH与LH均由肾上腺垂体分泌，FSH具有促进卵泡生长发育和生殖细胞成熟的作用，LH具有促进黄体酮分泌的作用^[15-16]。

大豆异黄酮主要来源于豆科植物，是一种弱雌激素，与E2结构相似，能与内源性雌激素受体结合发挥微弱的雌激素效应^[17]。研究^[18]表明：大豆异黄酮在内源性雌激素水平较低时，表现出雌激素促效剂作用，当体内雌激素水平升高时，表现出抗雌激素样作用。王继峰等^[19]研究表明：大豆黄酮类提取物能够减弱去卵巢引起的体质量增加、进食和饲料转化率增加等病理改变，能够平衡大鼠机体。本研究结果表明:给予高糖高脂喂养后，大鼠体质量均明显减少，FBG水平≥7.8 mmol·L^-1，说明2型糖尿病模型大鼠建模成功；模型组大鼠切除两侧卵巢后较假手术组大鼠体质量增加，血清E2水平降低，FSH和LH水平升高，动情周期发生变化，说明模型组大鼠去卵巢后产生一定的肥胖效应，雌激素水平受到影响，2型糖尿病围绝经期大鼠模型建立成功。2型糖尿病围绝经期模型大鼠给予低、中和高剂量大豆异黄酮后体质量明显升高，说明不同剂量大豆异黄酮均具有减缓2型糖尿病去卵巢大鼠体质量减少的作用，与马善峰等^[20]研究结果一致，初步推断大豆异黄酮具有平衡大鼠机体能量，调节体质量的作用。此外，模型组大鼠FBG水平明显高于假手术组，表明卵巢功能损伤导致的胰岛素抵抗也是引起FBG水平升高原因之一。给予不同剂量大豆异黄酮均可升高2型糖尿病去卵巢大鼠血清E2水平，降低FSH和LH水平，说明不同剂量大豆异黄酮均可起到调节体内雌激素水平的作用，与黎桂玉等^[21]研究结果一致。性激素具有调节氧化应激的作用，围绝经期女性体内性激素和促性腺激素水平紊乱，导致脂质过氧化作用增强，自由基清除酶活性下降。给予不同剂量大豆异黄酮均可明显降低2型糖尿病围绝经期模型大鼠血清MDA和ROS水平，升高SOD、GSH-Px和NO水平，说明大豆异黄酮具有类似于E2的抗氧化作用，可以提高2型糖尿病围绝经期模型大鼠的抗氧化能力。

综上所述，大豆异黄酮可通过调节大鼠体质量、抑制FBG水平升高、升高血清雌激素水平，从而提高氧化应激能力，对2型糖尿病围绝经期大鼠有保护作用。