吉林大学学报(医学版)  2019, Vol. 45 Issue (03): 606-613     DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190323

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王上宁, 王思思, 田肃岩, 李佳林, 刘伟
WANG Shangning, WANG Sisi, TIAN Shuyan, LI Jialin, LIU Wei
肺腺癌患者单孔胸腔镜肺叶切除术后早期外周血淋巴细胞亚群变化及其临床意义
Early changes of peripheral blood lymphocyte subsets in patients with lung adenocarcinoma after single-port thoracoscopic lobectomy and their clinical significances
吉林大学学报(医学版), 2019, 45(03): 606-613
Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2019, 45(03): 606-613
10.13481/j.1671-587x.20190323

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收稿日期: 2018-12-24
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王上宁, 王思思, 田肃岩, 李佳林, 刘伟. 肺腺癌患者单孔胸腔镜肺叶切除术后早期外周血淋巴细胞亚群变化及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2019, 45(03): 606-613.
WANG Shangning, WANG Sisi, TIAN Shuyan, LI Jialin, LIU Wei. Early changes of peripheral blood lymphocyte subsets in patients with lung adenocarcinoma after single-port thoracoscopic lobectomy and their clinical significances[J]. Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2019, 45(03): 606-613.
肺腺癌患者单孔胸腔镜肺叶切除术后早期外周血淋巴细胞亚群变化及其临床意义
王上宁 , 王思思 , 田肃岩 , 李佳林 , 刘伟     
吉林大学第一医院胸外一科, 吉林 长春 130021
收稿日期: 2018-12-24
基金项目: 国家自然科学基金资助课题（81502202）；吉林省财政厅科研基金资助课题（2018SCZWSZX-018）
作者简介: 王上宁(1991-), 男, 海南省澄迈县人, 医学硕士, 主要从事肺部疾病诊疗及其分子机制方面的研究。
通信作者: 刘伟, 主任医师, 博士研究生导师(Tel:0431-81875308, E-mail:drweiliu@outlook.com)
[摘要]: 目的: 观察肺腺癌患者行单孔胸腔镜肺叶切除术后早期外周血T、B和NK淋巴细胞亚群变化，探讨其与患者临床病理参数的相关性及其可能的临床意义。方法: 选取经单孔胸腔镜肺叶切除术治疗的肺腺癌患者66例，于入院当天（D0）、术后第1天（D1）和术后第5天（D5）分别抽取外周静脉血。采用血细胞计数仪和流式细胞术检测CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比，计算手术前后患者T、B和NK淋巴细胞百分比的变化（ΔD0-1、ΔD0-5和ΔD1-5），分析其术后早期变化规律及与患者临床病理参数的关系。结果: 与D0时比较，D1和D5时患者外周血中CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比降低（P < 0.01）；D5时患者外周血中CD4+T和CD8+T淋巴细胞百分比高于D1时（t=5.362，P < 0.01；t=5.202，P < 0.05）。D5与D1时患者CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比比较差异无统计学意义（P>0.05）。D0和D5时非吸烟患者CD8+T淋巴细胞百分比明显高于吸烟患者（t=2.162，P < 0.05；t=1.974，P < 0.05），而D0时吸烟患者CD19+B细胞百分比明显高于非吸烟患者（t=-1.137，P < 0.05）；D0时肿瘤T1期患者CD8+T淋巴细胞百分比明显高于T2-3期患者（t=1.684，P < 0.05）；而D5时肿瘤T1期患者CD19+B淋巴细胞百分比明显高于T2~4期患者（t=1.431，P < 0.05）；病理分期Ⅰ期患者CD19+B淋巴细胞百分比明显高于病理分期Ⅱ-Ⅲ期患者（t=2.134，P < 0.05）。男性患者术后CD4+T淋巴细胞百分比变化（ΔD1-5）明显高于同期女性（t=1.707，P < 0.05）；CD8+T淋巴细胞百分比变化（ΔD0-1和ΔD0-5）与肿瘤T分期呈负相关关系（r=-0.366，P < 0.01；r=-0.252，P < 0.05）；病理分期Ⅱ-Ⅲ期患者CD19+B淋巴细胞百分比变化（ΔD0-5和ΔD1-5）明显高于病理分期Ⅰ期患者（t=2.075，P < 0.05；t=2.140，P < 0.05）；CD56+NK淋巴细胞百分比变化（ΔD0-5）与患者年龄和吸烟状况有相关性，高龄患者（≥60岁）的ΔD0-5小于低龄患者（< 60岁）（t=1.557，P < 0.05），吸烟患者ΔD0-5小于不吸烟患者（t=-0.592，P < 0.05）；患者CD56+NK淋巴细胞百分比变化（ΔD1-5）与肿瘤T分期呈负相关关系（r=-0.286，P < 0.05）。结论: 淋巴细胞亚群百分比的变化程度与患者年龄、性别、吸烟状况和肿瘤T分期有关。
关键词: 肺肿瘤    腺癌    单孔胸腔镜    肺叶切除术    淋巴细胞亚群    免疫功能    
Early changes of peripheral blood lymphocyte subsets in patients with lung adenocarcinoma after single-port thoracoscopic lobectomy and their clinical significances
WANG Shangning , WANG Sisi , TIAN Shuyan , LI Jialin , LIU Wei     
Department of Thoracic Surgery, First Hospital, Jilin University, Changchun 130021, China
[ABSTRACT]: Objective: To observe the changes of T, B and NK lymphocyte subsets in peripheral blood of the patients with lung adenocarcinoma in the early stage after single-port thoracoscopic lobectomy, and to explore their relationships with the clinicopathological parameters of the patients and the possible clinical significances. Methods: A total of 66 patients with lung adenocarcinoma who underwent single-port thoracoscopic lobectomy were selected and the peripheral blood was respectively collected on the day of admission (D0), the 1st day (D1) and the 5th day (D5) after operation. The blood cell counter and flow cytometry were used to detect the percentages of CD4+T, CD8+T, CD19+B and CD56+NK lymphocytes. At the same time, the variations of cell percentages of T, B and NK lymphocytes (ΔD0-1, ΔD0-5 and ΔD1-5)before and after operation were calculated, respectively. The correlations between the changes of cell percentages (ΔD0-1, ΔD0-5 and ΔD1-5)of the patients in the early stage after operation and the clinicopathological parameters were analyzed. Results: Compared with D0, the percentages of CD4+T, CD8+T, CD19+B, and CD56+NK lymphocytes in peripheral blood of the patients on D1 and D5 were significantly decreased (P < 0.01).The percentages of CD4+T and CD8+T lymphocytes on D5 were significantly higher than those on D1 (t =5.362, P < 0.01;t=5.202, P < 0.05). The percentages of CD19+B and CD56+NK lymphocytes showed a decreasing trend, but there were no significant differences in the percentages of CD19+B and CD56+NK lymphocytes of the patients between D5 and D1 (P>0.05). The percentage of CD8+ T cells in smokers was lower than that in non-smokers on D0 and D5 (t=2.162, P < 0.05;t=1.974, P < 0.05).The percentage of CD19+ B lymphocytes in smokers was higher than that in the non-smokers on D0 (t=-1.137, P < 0.05). The percentage of CD8+ T lymphocytes in stage T1 was higher than that in stage T2-3 on D0 (t=1.684, P < 0.05).The percentage of CD19+ B lymphocytes in stage T1 was higher than that in stage T2-3 (t=1.431, P < 0.05), which was in stage Ⅰ higher than that in stage Ⅱ-Ⅲ on D5 (t=2.134, P < 0.05).The variation in CD4 + T lymphocyte percentage of the male patients (ΔD1-5) was higher than that of the female patients (t=1.707, P < 0.05).The variations in CD8+ T lymphocyte percentage (ΔD0-1 and ΔD0-5) had negative relationship with T stage(r=-0.366, P < 0.01;r=-0.252, P < 0.05). The variations in CD19+ B lymphocyte percentages (ΔD0-5 and ΔD1-5) of the patients in stage Ⅱ-Ⅲ were higher than those in stage Ⅰ (t=2.075, P < 0.05;t=2.140, P < 0.05). The variation of cell percentages of CD56+ NK lymphocytes(ΔD0-5) had significantly relationships with the age and smoking status of the patients.The ΔD0-5 in the older patients (≥ 60 years) was lower than that in the younger patients (< 60 years) and the ΔD0-5 in the smokers was lower than those in the non-smokers (t=1.557, P < 0.05).The variation of lymphocyte percentage of CD56+ NK (ΔD1-5) had negative relationship with T stage (r=-0.592, P < 0.05). Conclusion: The change degrees of percentages of lymphocyte subsets are correlated with the patients' age, gender, smoking status, and T stage.
KEYWORDS: lung neoplasms     adenocarcinoma     single-port thoracoscope     lobectomy     lymphocyte subsets     immune function    

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，目前其发病率和死亡率均居恶性肿瘤首位；其中，80%肺癌为非小细胞肺癌，且以肺腺癌多见[1-2]。外科手术仍是肺癌根治的唯一有效手段，而单孔胸腔镜手术是当今最先进的微创外科技术[3]。既往研究[4]显示：手术可导致患者免疫功能的诸多改变，诱发炎症反应并受天然免疫系统的调节，可出现代偿性淋巴细胞减少等免疫细胞抑制现象；当损伤部位开始愈合，抗炎反应受获得性免疫细胞的调节而成为主要反应。胸部微创技术不断进步使得手术创伤更轻、对免疫功能影响更小，但围术期手术应激和创伤以及肿瘤本身造成的患者免疫功能变化仍难以避免，并直接影响免疫系统在术后对抗炎症反应、促进组织修复、对抗肿瘤和抵抗感染等方面的作用，并与围术期并发症发生、患者预后密切相关[5]。以往关于肺癌开胸和传统胸腔镜手术创伤对免疫功能影响的研究多集中于免疫细胞数量、蛋白因子分泌、生化指标检测和生存率分析等[6]。目前尚无关于肺癌患者单孔胸腔镜肺叶切除术后早期机体免疫功能变化情况与患者临床病理因素关系的报道[7]。由于正常的免疫功能与淋巴细胞亚群比例有关，故本研究主要探讨肺腺癌单孔胸腔镜患者术后外周血中淋巴细胞亚群的变化及其临床意义。本研究通过检测肺腺癌患者行单孔胸腔镜肺叶切除术后早期外周血CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK淋巴细胞亚群的变化，结合患者临床病理因素，分析上述指标与患者临床病理参数进行的关系，观察不同临床病理参数患者免疫功能的变化。

1 资料与方法 1.1 主要试剂和仪器

抗CD3 FITC、抗CD4 APC-CY7、抗CD8 APC、抗CD19 PE、抗CD56 PE-CY7和红细胞裂解液(美国BD公司)，Ficoll分离液(美国GE Healthcare Life Sciences公司)，1×PBS和0.1% BSA液洗涤(美国BI公司)。Sysmex XN-9000全自动血液体液分析仪(日本Sysmex公司)，FACS Canto Plus流式细胞分析仪(美国BD公司)。

1.2 病例筛选和样本收集

选取2018年3—8月本科收治的住院肺腺癌患者80例。肺癌术前诊断标准：术前行肺部二期增强CT检查，诊断为肺占位性病变，考虑肺癌可能或支气管镜活检病理诊断为肺腺癌症。纳入标准：①术后病理诊断为肺腺癌，且根据第8版TNM分期分为Ⅰ~Ⅲ期；②手术术式为单孔胸腔镜肺叶切除术式；③术前影像学检查无远处淋巴结转移和脏器转移；④手术和麻醉时间均在3 h内；⑤术中胸腔无严重粘连；⑥术中、术后未发生围术期并发症；⑦既往无肿瘤病史及胸部手术史，无全身免疫性疾病。排除标准：①术前存在心、肝和肾等脏器严重病变；②既往有恶性肿瘤病史；③术中发现肿瘤侵袭胸壁或胸腔严重粘连；④术中输血者；⑤围手术期全身性感染或术后出现肺漏气、乳糜胸、肺不张和支气管胸膜瘘等并发症。经上述标准筛选出符合研究标准的患者66例，其中男性23例，女性43例；年龄31~75岁，平均年龄(57.09±11.32)岁，≥60岁者36例，＜60岁者30例；24例患者既往有吸烟史，42例患者无吸烟史；病理分期为Ⅰ期者48例，Ⅱ-Ⅲ期者18例；T分期为T1者有41例，T2-3者25例；无淋巴结转移者54例，有淋巴结转移者12例。符合纳入标准的患者分别于术前(D0)、术后第1天(D1)和术后第5天(D5)抽取外周静脉血2 mL，行血细胞计数和流式细胞术检测。本研究已通过吉林大学第一医院伦理委员会审批，全部纳入患者和家属均已签署知情同意书。

1.3 血细胞计数和流式细胞术检测

① 采用紫色抗凝真空管采集外周静脉血2 mL，室温保存，于采血后2 h内完成检测。严格按照Sysmex XN-9000操作指南进行血细胞分析仪检测，样本在分析模式上机测定，获得白细胞分类计数参数，记录于SPSS表格。②将采集的2 mL外周静脉抗凝全血用1×PBS液稀释至4 mL，缓慢注入等体积Ficoll分离液液面上，以2 500 r·min-1室温离心30 min，收集单个核细胞(PBMC)，1×PBS洗涤，1 500 r·min-1离心5 min，收集细胞。1×红细胞裂解液裂解PBMC中残余红细胞，1×PBS洗涤，离心收集PBMC，并制备单细胞悬液。采用抗CD3 FITC、抗CD4 APC-CY7、抗CD8 APC、抗CD19 PE和抗CD56 PE-CY7标记淋巴细胞。反应体系共50 μL，4℃避光孵育20 min，0.1% BSA液洗涤细胞，离心收集PBMC，制备单细胞悬液，采用BD FACS Canto Plus流式细胞仪检测，采用Flowjo 10软件分析数据，获得淋巴细胞亚群CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比。将血细胞分析仪获得的白细胞分类、淋巴细胞总数与流式细胞术获得的淋巴细胞亚群百分比相乘，计算T、B和NK淋巴细胞亚群细胞数量，并将T、B和NK淋巴细胞亚群细胞百分比在D0、D1和D5之间的变化关系分别记为ΔD0-1、ΔD0-5和ΔD1-5。

1.4 统计学分析

采用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析。CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比及其变化关系(ΔD0-1、ΔD0-5和ΔD1-5)数据以x±s表示，淋巴细胞亚群百分比比较采用配对t检验，其与患者临床病理参数之间的相关性分析采用Spearman相关性分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 术后患者外周血淋巴细胞亚群百分比

肺腺癌患者行单孔胸腔镜肺叶切除术后早期(D1和D5)外周血CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比均较D0明显降低(P < 0.01)；与D1比较，D5时患者外周血CD4+T和CD8+T淋巴细胞百分比升高(t=5.362，P < 0.01；t=5.202，P < 0.05)，D1和D5时患者外周血CD19+B与CD56+NK淋巴细胞百分比比较差异无统计学意义(P>0.05)。见图 1(插页五)和表 1。

A: FSC-A/FSC-H excluded adhesions; B: SSC-A/AQUA excluded dead cells; C: SSC-A/FSC-A circle lymphocytes; D:SSC-A/ FITC excluded dead cells; E: APC/APC-CY7 was gated to delineate CD3+CD4+T and CD3+CD8+T lymphocytes; F: PE/PE-CY7 was gated to delineate CD3-CD19+B and CD3-CD56+NK lymphocytes 图 1 肺腺癌患者外周血CD4+T、CD8+ T、CD19+ B和CD56+ NK淋巴细胞流式图 Fig. 1 Flow cytometry diagrams of CD4+T, CD8+ T, CD19+ B and CD56+ NK lymphocytes in peripheral blood of patients with lung adenocarcinoma
图选项
表 1 手术前后患者外周血淋巴细胞亚群百分比 Tab. 1 Percentages of lymphocyte subsets in peripheral blood of patients before and after operation
(n=66, x±s, η/%)
Time CD4+T CD8+T CD19+T CD56+T
D0 7.06±3.65 3.04±1.69 4.35±3.81 2.37±1.54
D1 3.19±2.13* 1.87±1.24* 2.77±2.32* 1.61±1.25*
D5 4.65±2.14*△ 2.12±1.12*△ 2.31±1.94* 1.35±1.25*
*P < 0.01 vsD0；△P < 0.05 vs D1.
表选项
2.2 不同临床病理参数患者术前和术后T、B和NK淋巴细胞亚群百分比

D0和D5时未吸烟患者CD8+T淋巴细胞百分比明显高于吸烟患者(t=2.162，P < 0.05；t=1.974，P < 0.05)；而D0时吸烟患者CD19+B淋巴细胞百分比高于未吸烟患者(t=-1.137，P < 0.05)。D0和D5时吸烟与否患者其余各淋巴细胞亚群百分比比较差异均无统计学意义(P>0.05)。肿瘤分型Ⅰ期患者D5时CD19+B淋巴细胞百分比高于Ⅱ-Ⅲ期患者(t=2.134，P < 0.05)，而在D0和D1时不同临床分期患者各淋巴细胞亚群百分比比较差异无统计学意义(P>0.05)。T1期患者D0时CD8+T淋巴细胞亚群百分比较T2~4期患者升高(t=1.684，P < 0.05)，而D5时T1期患者CD19+B细胞亚群百分比高于T2-3期(t=1.431，P < 0.05)，而T1和T2-3期患者其余各淋巴细胞亚群百分比比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表 2。

表 2 手术前后不同临床病理参数患者早期淋巴细胞亚群百分比 Tab. 2 Percentages of early lymphocyte subsets of patients with different clinicopathological parameters after operation
(n=66, x±s, η/%)
Time CD4+T CD8+T CD19+B CD56+NK CD4+T CD8+T CD19+B CD56+NK CD4+T CD8+T CD19+B CD56+NK
Smoke Non-smoke Smoke Non-smoke Smoke Non-smoke Smoke Non-smoke Pathological
stage Ⅰ		 Pathological
stage Ⅱ-Ⅲ		 Pathological
stage Ⅰ		 Pathological
stage Ⅱ-Ⅲ		 Pathological
stage Ⅰ		 Pathological
stage Ⅱ-Ⅲ		 Pathological
stage Ⅰ		 Pathological
stage Ⅱ-Ⅲ		 T1 stage T2-4 stage T1 stage T2-4 stage T1 stage T2-4 stage T1 stage T2-4 stage
D0 7.51±3.26 6.81±3.86 2.46±1.32 3.37±1.79* 5.33±5.24 3.82±2.27* 2.03±1.43 2.69±1.54 6.96±3.68 7.18±3.58 3.20±1.72 2.37±1.30 3.91±3.01 5.50±5.21 2.30±1.53 2.18±1.31 7.32±3.86 6.51±3.36 3.35±1.59 2.62±1.80* 2.36±1.57 2.14±1.45 4.15±4.30 4.85±5.02
D1 3.04±1.69 3.28±2.35 1.85±1.18 1.89±1.29 3.04±2.42 2.63±2.27 1.39±0.89 1.59±1.21 3.20±2.22 3.16±1.70 1.88±1.29 1.87±1.08 2.65±2.11 3.16±2.73 1.42±1.07 1.49±0.77 3.27±2.29 2.93±1.87 1.76±1.17 2.08±1.39 1.41±1.13 1.59±0.83 2.8±2.24 2.45±1.99
D5 4.97±2.22 4.49±2.10 1.77±0.89 2.32±1.19* 2.17±1.25 2.39±2.25 1.20±0.94 1.36±1.27 4.51±2.17 5.01±2.05 2.20±1.15 1.77±0.93 2.61±2.07 1.51±0.93* 1.36±1.24 0.99±0.73 4.46±2.25 5.04±2.01 2.19±1.14 2.01±1.14 1.43±1.33 1.02±0.76* 2.61±2.21 1.88±1.30
*P < 0.05 vs before operation.
表选项
2.3 手术前后各淋巴细胞亚群百分比与患者不同临床病理因素的相关性分析

CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK淋巴细胞百分比在D0、D1和D5之间的变化程度(ΔD0-1、ΔD0-5和ΔD1-5)与淋巴转移无相关性(r=0.072，P>0.05)。男性患者CD4+T淋巴细胞百分比的ΔD1-5明显高于同期女性患者(t=1.707，P < 0.05)。CD8+T细胞淋巴百分比的ΔD0-1、ΔD0-5与肿瘤T分期呈负相关关系(r=-0.366，P < 0.01；r=-0.252，P < 0.05)。病理分期Ⅱ-Ⅲ期患者CD19+B淋巴细胞百分比的ΔD0-5和ΔD1-5明显高于Ⅰ期患者(t=2.075，P < 0.05；t=2.140，P < 0.05)；CD56+NK淋巴细胞百分比的ΔD0-5与年龄及吸烟状况有关，即≥60岁患者低于 < 60岁患者、吸烟患者CD56+NKΔD0-5低于未吸烟患者(t=1.557，P < 0.05；t=－0.592，P < 0.05)。CD56+NK淋巴细胞百分比的ΔD1-5与肿瘤T分期呈负相关关系(r=-0.286，P < 0.05)。见表 3~6。

表 3 手术前后不同临床病理参数患者CD4+T淋巴细胞百分比 Tab. 3 Percentages of CD4+T lymphocytes of patients with different clinicopathological parameters before and after operation
(x±s, η/%)
Clinicopathological parameter n CD4+T ΔD0-1 CD4+T ΔD0-5 CD4+T ΔD1-5
Gerder
  Male 23 4.83±3.00 3.11±2.28 2.67±1.80
  Female 43 4.18±3.43 3.43±3.13 2.48±2.11
  r 0.196 0.061 -0.181
  P 0.115 0.627 0.042
Age(year)
  ≥60 36 3.94±3.61 3.30±3.23 2.00±1.53
   < 60 30 4.97±2.79 3.47±2.36 3.20±2.30
  r -0.224 -0.115 0.238
  P 0.071 0.358 0.054
Smoking
  Yes 24 4.63±2.81 3.04±2.54 2.23±1.78
  No 42 4.28±3.55 3.48±3.03 2.73±2.11
  r -0.152 -0.038 0.046
  P 0.223 0.762 0.712
Pathological stage
  Ⅰ 48 4.38±3.34 3.15±2.89 2.65±2.09
  Ⅱ-Ⅲ 18 4.49±3.2 3.77±2.76 2.28±1.76
  r -0.021 0.009 0.032
  P 0.864 0.943 0.798
T stage
  T1 41 4.68±3.43 3.36±3.05 2.69±2.15
  T2-3 25 3.97±3.16 3.19±2.56 2.38±1.79
  r 0.072 0.113 0.034
  P 0.565 0.366 0.788
表选项
表 4 手术前后不同临床病理参数患者CD8+T淋巴细胞百分比 Tab. 4 Percentages of CD8+T lymphocytes in patients with different clinicopathological parameters before and after operation
(x±s, η/%)
Clinicopathological parameter n CD8+T ΔD0-1 CD8+T ΔD0-5 CD8+T ΔD1-5
Gender
  Male 23 1.45±1.08 1.10±0.89 1.05±0.77
  Female 43 1.82±1.41 1.48±1.10 1.12±0.94
  r 0.071 -0.049 -0.086
  P 0.571 0.695 0.493
Age(year)
  ≥60 36 1.55±1.26 1.46±1.16 1.06±0.78
< 60 30 1.86±1.37 1.21±0.89 1.13±0.99
  r -0.136 -0.006 0.176
  P 0.277 0.959 0.158
Smoking
  Yes 24 1.09±0.90 1.08±0.81 0.94±0.72
  No 42 2.04±1.39 1.50±1.14 1.18±0.96
  r 0.253 0.107 -0.222
  P 0.040 0.390 0.074
Pathological stage
  Ⅰ 48 1.88±1.29 1.47±1.02 1.15±0.90
  Ⅱ-Ⅲ 18 1.20±1.28 1.05±1.00 0.96±0.83
  r 0.232 0.164 -0.152
  P 0.061 0.187 0.224
T stage
  T1 41 1.97±1.29 1.55±1.07 1.15±0.88
  T2-3 25 1.32±1.27 1.01±0.95 0.97±0.92
  r 0.366 0.252 -0.214
  P 0.003 0.042 0.084
表选项
表 5 手术前后不同临床病理参数患者CD19+B淋巴细胞百分比 Tab. 5 Percentages of CD19+B lymphocytes of patients with different clinicopathological parameters before and after operation
(x±s, η/%)
Clinicopathological parameter n CD19+B ΔD0-1 CD19+B ΔD0-5 CD19+B ΔD1-5
Gender
  Male 23 4.78±4.07 5.17±4.17 2.31±1.96
  Female 43 2.52±2.26 2.79±2.33 1.86±1.79
  r 0.032 -0.061 -0.020
  P 0.800 0.627 0.873
Age(year)
  ≥60 36 3.09±2.75 3.46±2.82 1.79±1.65
   < 60 30 4.08±3.25 4.35±3.19 2.23±1.89
  r 0.092 0.004 -0.059
  P 0.463 0.975 0.637
Smoking
  Yes 24 4.61±3.96 5.15±3.93 2.29±1.95
  No 42 2.68±2.24 2.85±2.42 1.78±1.69
  r -0.093 -0.104 -0.097
  P 0.460 0.405 0.440
Pathological stage
  Ⅰ 48 2.94±2.48 3.07±2.57 1.63±1.62
  Ⅱ-Ⅲ 18 4.74±3.98 5.38±4.17 2.91±2.17
  r -0.087 -0.301 -0.262
  P 0.489 0.014 0.034
T stage
  T1 41 3.67±3.12 3.79±2.25 1.86±1.60
  T2-3 25 4.09±3.22 4.48±3.93 1.82±1.28
  r -0.091 -0.202 -0.095
  P 0.466 0.103 0.448
表选项
表 6 手术前后不同临床病理特征患者CD56+NK淋巴细胞百分比 Tab. 6 Percentages of CD56+NK lymphocytes of patients with different clinicopathological parameters before and after operation
(x±s, η/%)
Clinicopathological parameter n CD56+NK ΔD0-1 CD56+NK ΔD0-5 CD56+NK ΔD1-5
Gender
  Male 23 1.61±1.14 1.59±1.18 1.10±0.99
  Female 43 1.22±0.97 1.39±1.22 1.19±1.05
  r 0.034 -0.058 -0.021
  P 0.785 0.646 0.868
Age(year)
  ≥60 36 1.39±0.99 1.35±1.25 1.27±1.04
   < 60 30 1.32±1.11 1.58±1.15 0.80±0.61
  r -0.192 -0.086 0.099
  P 0.123 0.046 0.429
Smoking
  Yes 24 1.23±1.05 1.39±1.00 0.98±0.93
  No 42 1.43±1.04 1.50±1.31 1.21±1.01
  r 0.060 0.043 -0.069
  P 0.635 0.035 0.580
Pathological stage
  Ⅰ 48 1.41±1.03 1.55±1.30 1.24±1.15
  Ⅱ-Ⅲ 18 1.22±1.10 1.22±0.88 0.84±0.69
  r 0.107 0.030 -0.188
  P 0.392 0.809 0.132
T stage
  T1 41 1.51±1.04 1.61±1.35 1.26±1.08
  T2-3 25 1.04±0.97 1.21±0.91 1.02±0.90
  r -0.012 -0.138 -0.286
  P 0.927 0.270 0.020
表选项
3 讨论

以腺癌为主的非小细胞肺癌属高度恶性肿瘤，患者早期行手术切除是临床治疗的首选，可明显延长患者的生存期[8-9]。然而肿瘤手术治疗所造成的创伤及应激常可导致机体免疫功能的诸多改变，其中，术后免疫功能的改变已成为影响患者术后机体快速康复及预后的重要因素。NG等[10]发现:胸腔镜微创手术较传统开胸术能明显降低患者术后IL-6和超敏C反应蛋白(CPR)等急性期炎症介质的诱导和释放，减轻患者术后的免疫功能抑制，更好地保护患者的免疫功能，对控制术后感染、降低住院时间和改善肿瘤患者预后等均产生积极影响。有学者[11-12]亦发现：手术前后传统开胸手术治疗肺癌患者较胸腔镜手术患者外周血淋巴细胞百分比明显降低；胸腔镜组患者术后急性期炎症性反应发生率及术后对免疫功能的抑制作用明显降低。本研究对肺腺癌患者均采用单孔胸腔镜肺叶切除术这一微创术式进行根治性治疗，在患者的纳入标准方面剔除了其他可能影响免疫功能的因素，如患者并发其他疾病情况、手术时间、术中及术后并发症以及麻醉和机体条件差异等因素造成的对免疫功能的影响，采用血细胞分析和流式细胞术检测患者外周血中CD4+T、CD8+T、CD19+B和CD56+NK等淋巴细胞亚群百分比，更准确地反映患者术后早期免疫功能的变化。

T淋巴细胞介导的细胞免疫在术后创伤和修复中起主导作用[13]。本研究结果显示：手术应激导致CD4+T与CD8+T淋巴细胞计数明显降低，尽管CD4+T和CD8+T淋巴细胞计数在术后早期均有回升，但仍维持较低水平。2种T淋巴细胞亚群变化趋势的一致性亦体现了CD4+T淋巴细胞在引发及维持CD8+T淋巴细胞抗肿瘤免疫反应及记忆性CD8+T淋巴细胞形成中均发挥重要作用。B淋巴细胞在手术创伤和应激刺激后可介导体液免疫，分泌IgE参与Th1/Th2平衡，调节机体免疫功能[14]。本研究术后早期CD19+B淋巴细胞百分比持续降低，提示B细胞功能也受到抑制。NK细胞在机体肿瘤免疫监视和抗肿瘤免疫过程中也起重要作用[15-16]。TSUCHIYA等[17]通过实验性肺转移模型研究了癌症转移与手术应激程度的关系；手术创伤应激后机体内会诱导淋巴细胞凋亡和降低NK细胞的活性来增强癌症转移。本实验中，NK与B淋巴细胞计数的变化趋势一致，原因可能是累及其分泌IL-2和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等因子活性，使免疫监视功能受到抑制，这可能造成患者体内微小肿瘤病灶在手术过程中的免疫逃逸。肿瘤细胞自身也可通过低表达组织相容性抗原Ⅰ或分泌IL-4和转化生长因子β(TGF-β)等免疫抑制因子和诱发凋亡机制，抑制机体免疫功能并与机体免疫反应对抗[18]，因此手术本身与肿瘤细胞对机体免疫功能的抑制可增加癌症患者术后并发症发生率和促进肿瘤转移的可能。因此，在肿瘤根治性切除背景下对术后早期阶段患者机体免疫功能及时、有效的提升和保护，可能对术后快速康复和改善肿瘤患者远期预后起重要作用[19]。

术后早期的免疫功能抑制可导致术后较长时间的循环淋巴细胞数较低，提示机体免疫功能可能长期持续受到来自手术创伤应激造成的抑制[20]。在开胸术与胸腔镜微创肺切除术的多个对比研究中发现：尽管前者在术后早期可导致更为严重的淋巴细胞及其亚群的免疫抑制，但2组患者术后免疫水平差异的持续时间短暂，仅维持数小时至数天[5-14]，提示在肿瘤切除术的背景下，对术后早期阶段机体免疫功能及时、有效的保护，可维持术后早期功能性的细胞免疫，可能对术后长期抑制肿瘤生长及复发起重要作用[21]。

研究患者临床病理参数与术后早期机体免疫功能改变的关系可为临床术后早期个体化免疫支持疗法提供重要参考[9]。本研究结果显示：患者术后CD8+T淋巴细胞百分比变化(ΔD1-1和ΔD1-5)与肿瘤T分期呈正相关关系，CD56+NK淋巴细胞百分比变化与肿瘤T分期呈负相关关系，CD19+B淋巴细胞百分比变化亦与病理分期呈正相关关系，由此可见不同临床病理参数肺腺癌患者其循环淋巴细胞的动员和分布能力受损程度并不相同，性别、年龄和吸烟状况均影响患者术后早期淋巴细胞的抑制程度；由于本研究病例数相对较少以及对患者免疫功能状态监测时间较短，本研究所得出的临床病理参数与患者术后早期机体免疫功能改变的变化趋势结论仍有待今后进一步研究来确定。NAKAMURA等[22]研究检测了287例肺癌患者术前外周血中淋巴细胞亚群百分比和NK细胞活性，发现CD3+T和CD4+T淋巴细胞百分比随年龄升高而降低；女性患者CD4+T淋巴细胞百分比明显大于男性；中晚期NK细胞的细胞毒性反应明显少于早期。此外，WATANABE等[23]对肺癌患者各种免疫反应参数与患者5年生存率的相关性进行前瞻性研究，采用延迟的超敏性皮肤试验、淋巴母细胞(LB)生成、NK细胞活性和IL-2水平评估患者免疫能力；计算上述各免疫反应强度与患者5年生存率相关性结果显示：患者治疗前免疫反应与生存率之间的相关性在淋巴母细胞形成中最为明显，IL-2的产生与免疫应答无明显相关性。上述研究也进一步证明不同患者的围手术期免疫水平变化存在差异，因此在围手术期给予个体化的免疫支持疗法，才是真正有效地改善肺癌患者术后的免疫功能、加快术后快速康复和改善肿瘤远期预后的重要途径。

综上所述，肺腺癌患者采用胸部微创手术后早期会出现免疫功能抑制。不同临床病理参数患者免疫细胞亚群的抑制程度存在差异性，于围术期给予不同患者相应的免疫疗法支持，能及时、有效地改善患者术后的免疫功能状态，因此在促进患者术后早期快速康复、改善肿瘤患者预后等方面具有重要意义。

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