动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是心血管系统的常见疾病，其发生时动脉内膜脂质沉积形成粥样斑块，引起血管腔狭窄或阻塞，进而引起机体缺血和缺氧等病理改变^[1-3]。检测相关血清学指标及心肌酶学指标的变化对临床诊断和治疗AS具有重要的参考价值。urantide是在人尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ, UⅡ)基础上衍生的多肽类受体拮抗剂，其可特异性阻断UⅡ与其受体GPR14结合并抑制其进入细胞发挥生物学作用，对治疗AS具有潜在的临床应用价值^[4]。国内外研究^[5-7]显示：在AS发生发展过程中血钙、血脂和心肌酶学等血清学指标发生异常，其含量变化对评估AS严重程度具有重要的临床意义，但关于urantide对其影响少有报道。本课题组采用多肽类化合物urantide治疗AS大鼠，并监测其体质量和检测血清中Ca²⁺、总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)、肌酸激酶(creatine kinase, CK)和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)等血清学指标水平变化，初步探讨urantide对防治AS的作用机制。

SPF级健康雄性Wistar大鼠180只，3周龄，体质量为180~200 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可证号：SCXK(京)-2016-0011，生产合格证号：11400700127208。urantide由苏州强耀生物公司提供，辛伐他汀(simvastatin)购于北京诺华制药有限公司，维生素D₃(VD₃)注射液购自上海通用药业股份有限公司。全自动生化分析仪购自美国贝克曼库尔特公司，全自动封闭脱水机、组织包埋机、石蜡切片机、生物组织恒温摊片烤片机和数码显微镜购自德国莱卡公司。

高脂饲料的配制：基础饲料，35%胆固醇，10%猪油，0.2%丙硫氧嘧啶，0.5%胆酸钠，5%白糖。Wistar大鼠180只随机分为2组。其中正常对照组30只，饲以普通饲料；模型组150只，在实验开始时饲以高脂饲料，并在此基础上每只大鼠连续3 d给予腹腔注射VD₃ 150 U·kg^-1·d^-1，实验周期为4周。AS造模成功后，将150只模型组大鼠随机分为AS模型组(n=30)、阳性药(辛伐他汀)组(n=30)和urantide组(n=90，给药时间分别为3、7和14 d，每个时间点亚组30只)。正常对照组和AS组大鼠每日尾静脉注射生理盐水30 μg·kg^-1，连续14 d；辛伐他汀组每只大鼠每日灌胃给予辛伐他汀5 μg·kg^-1，连续14 d；urantide组每只大鼠每日尾静脉注射urantide 30 μg·kg^-1，给药时间分别为3、7和14 d。

每周观察各组大鼠的精神状态和饮食，并监测体质量。

病理取材前，各组大鼠禁食过夜，用0.3%戊巴比妥30 mg·kg^-1腹腔注射麻醉后，分离胸主动脉，并用真空采血管采集动脉血。1500g离心15 min后吸取上清分装于Eppendorf管中，全自动生化分析仪检测大鼠血清中Ca²⁺、TC、TG、LDL、HDL、CK和LDH水平。

取血后，立即摘取胸主动脉，4%多聚甲醛固定，大鼠胸主动脉经脱水、透明、浸蜡、包埋后制备成石蜡切片，经二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化、常规HE染色后，光镜下观察各组大鼠胸主动脉组织病理学变化。

采用SPSS 20.0统计软件进行统计学分析。各组大鼠体质量和血清中Ca²⁺、TC、TG、LDL、HDL、CK及LDH水平均以x±s表示，在符合正态分布前提下，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验。以P < 0.05表示差异有统计学意义。

HE染色结果显示：正常对照组大鼠胸主动脉三层膜结构完整，内皮细胞清晰，中膜平滑肌细胞排列整齐，外膜由疏松结缔组织构成；AS组大鼠胸主动脉内皮细胞破坏，且中膜有明显的钙化、炎细胞浸润，弹力纤维破坏、变薄，并形成脂质斑块，呈典型的AS病理改变，表明通过腹腔注射VD₃和高脂饲料喂养4周成功建立大鼠AS模型。见图 1(插页四)。

A: Normal control group; B: AS group. 图 1 2组大鼠胸主动脉形态表现（HE，×400） Fig. 1 Morphology of thoracic aorta of rats in two groups(HE, ×400)

图选项

实验开始时，各组大鼠体质量相近，组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药前，正常对照组大鼠体质量随着饲养时间的延长而增加；与正常对照组比较，其他各组大鼠体质量明显降低(P < 0.01)。实验结束时，正常对照组大鼠体质量继续增加；与AS组比较，其他各给药组大鼠体质量有不同程度的增加(P < 0.05或P < 0.01)。见表 1。

与正常对照组比较，AS组大鼠血清中Ca²⁺、TG、TC和LDL水平均明显升高(P < 0.01)，HDL水平明显降低(P < 0.01)；与AS组比较，辛伐他汀组大鼠血清中Ca²⁺、TG、TC和LDL水平明显降低(P < 0.05或P < 0.01)，HDL水平明显升高(P < 0.05或P < 0.01)；与AS组比较，urantide组大鼠血清中Ca²⁺、TG、TC和LDL水平明显降低(P < 0.05或P < 0.01)，HDL水平升高(P < 0.01)。见表 2。

与正常对照组比较，AS组大鼠血清中CK和LDH水平明显升高(P < 0.01)；与AS组比较，辛伐他汀组大鼠血清中CK和LDH水平明显降低(P < 0.01)；与AS组比较，urantide组大鼠血清CK和LDH水平明显降低(P < 0.05或P < 0.01)。见表 3。

AS发生发展的机制有很多学说，如炎症学说、内皮损伤学说、脂质浸润学说、血管平滑肌细胞增殖学说和血栓形成学说等，而每个机制均无法完全解释AS的发生。因此，AS发生发展机制和治疗药物的探讨成为医学研究的热点。

UⅡ最早是从鱼的脊髓尾部下垂体中分离出的生长抑素样环肽，其收缩血管作用是内皮素1的10倍以上, 在AS发生发展中具有重要的作用^[8]。特异性UⅡ受体拮抗剂的发展，可能使UⅡ成为心血管疾病治疗的新靶点。urantide是目前被认为最有效的UⅡ受体拮抗剂，其拮抗效应较其他化合物高50~100倍。本课题组前期研究^{[7, 9]}显示：urantide可加速AS大鼠胸主动脉的胶原蛋白降解，抑制UⅡ对动脉炎症损伤的促进作用，改善AS病变程度，但其具体的作用机制尚未阐明。

AS的发生不仅伴有血管壁成分的改变及AS斑块的沉积，而且常伴有血清学指标和心肌酶学指标的改变。研究^[10-15]显示：AS斑块中富含TC和脂质积聚是AS的一个重要特征。①胆固醇进入到血管内皮下，经巨噬细胞吞噬形成泡沫细胞，标志着AS的形成；②TG被认为是AS的独立危险因素，主要存在于富含TG的LDL中，氧化LDL可引起巨噬细胞对脂质的摄取和泡沫细胞的形成；③LDL在AS中发挥重要作用，能诱导体外培养的血管内皮中形成泡沫细胞；④相反，HDL的升高则可阻止或减轻LDL对内皮细胞的破坏，被称为“抗AS因子”，这与HDL具有转运胆固醇的能力有关。LDH和CK是临床中衡量心脏功能的常用指标。研究^[16-17]显示：在AS形成过程中，血清中LDH和CK的活性会逐渐升高，并有可能成为AS早期诊断和监测的一项新的指标。本研究结果显示：与正常对照组比较，AS组大鼠血清中TG、TC、LDL、LDH和CK水平明显升高，HDL水平明显降低；随着给药时间的延长，urantide组大鼠血清中TG、TC、LDL、LDH和CK水平降低，HDL水平升高。且urantide治疗组较AS组大鼠体质量均有所增加，体质量不同程度增加为AS大鼠的治疗与恢复提供生理基础与保障。

动脉内膜钙沉着是AS的一个显著特征，动脉粥样斑块中富含Ca²⁺，且其含量与AS的病变程度呈正相关关系^[18]。多项研究^[19-22]结果显示：UⅡ与其受体GPR14结合可通过非电压依赖性Ca²⁺通道促进Ca²⁺内流，引发血管收缩效应，进而诱发高血压和冠心病等血管疾病。本研究结果显示：AS组大鼠血清中Ca²⁺水平明显高于正常对照组，而urantide可明显降低AS大鼠血清中Ca²⁺水平。由此表明：urantide通过降低血清中Ca²⁺水平，抑制细胞Ca²⁺通道的开放及Ca²⁺内流，可减少心肌兴奋收缩偶联的发生，缓解大鼠AS症状。

综上所述，urantide可通过下调或上调大鼠血清中血脂、血Ca²⁺及心肌酶水平起到治疗AS大鼠的目的，但其作用机制仍有待于进一步研究。随着研究的深入，urantide在AS发生发展中的病理生理学作用将被进一步阐明，为其临床应用治疗AS提供实验依据。