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文章信息
- 毛勇, 刘浩, 吴向阳, 高秉仁
- MAO Yong, LIU Hao, WU Xiangyang, GAO Bingren
- 极低频电磁场暴露对SD大鼠肝、肾和脾脏功能及形态的影响
- Effects of extremely low frequency electromagnetic fields exposure on function and morphology of liver, kidney and spleen of SD rats
- 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(06): 1120-1123
- Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2018, 44(06): 1120-1123
- 10.13481/j.1671-587x.20180602
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文章历史
- 收稿日期: 2018-03-15
2. 河南省开封市中心医院心胸外科, 河南 开封 475000
2. Department of Cardiothoracic Surgery, Central Hospital, Kaifeng City, Henan Province, Kaifeng 475000, China
极低频电磁场(extremely low frequency electromagnetic fields,ELF-EMF)是一种频率为0~300 Hz的电磁场,普遍存在于人们的日常生活中[1]。流行病学研究[2-3]显示:长期暴露于ELF-EMF会增加肿瘤和神经退行性病变的患病率,增加流产的危险性以及导致免疫损伤。动物实验[4-6]表明:ELF-EMF可引起实验动物心脏组织结构损伤和肺组织损伤,增加氧化应激反应。
磁场根据强度分为超强磁场(>5T)、强磁场(1~5T)、中强磁场(1mT~1T)和弱磁场(<1mT)[7]。不同强度电磁场对人及动物的损伤有很大差异,0.1 T ELF-EMF可由高压输电线、变压器以及各类家用电器产生,但关于0.1T ELF-EMF对于实验动物损伤的研究比较有限,其可能带来的影响有以下几个方面:①影响实验动物的血液黏度和凝血过程;②影响实验动物的昼夜节律[8-10]。目前国内外缺乏关于0.1T ELF-EMF对于动物肝、肾和脾等脏器功能影响的研究。本研究通过动物实验观察0.1T ELF-EMF对SD大鼠肝、肾和脾脏功能的影响,进一步阐明辐射损伤的作用机制。
1 材料与方法 1.1 实验动物、主要试剂和仪器本研究经兰州大学第二医院伦理委员会批准,所有操作均严格遵守美国国立卫生研究院关于动物饲养的相关细则。20只SPF级SD大鼠购自兰州大学医学动物实验中心,雄性,7~8周龄,生产许可证号:SCXK(甘)2013-0002,使用许可证号:SYSK(甘)2013-0003,体质量270~280 g;保持环境清洁,采用专用饲料喂养,饮食饮水不限。苏木素染液和伊红染液为北京索莱宝科技有限公司产品,无水乙醇为烟台市双双化工有限公司产品,10%中性缓冲甲醛为浙江金华同和生物科技有限公司产品。显微照相系统为德国LEICA公司产品,低温高速离心机为德国Heraeus公司产品,全自动生化分析仪为日本Hitachi公司产品,加热石蜡包埋系统为德国LEICA公司产品。
1.2 实验动物分组和处理方法将20只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组和暴露组,每组10只。将大鼠在实验室中适应性饲养2周,暴露组大鼠每日暴露于极低频正弦交变磁场,对照组大鼠不进行ELF-EMF暴露。暴露组大鼠每天暴露8 h(上午9时~下午17时),连续暴露30 d。本实验采用兰州大学核科学与技术学院设计和制作的双极磁场。该磁场由1对极间垂直距离为70 mm、匝数相同(均为160匝)的铜线圈相对放置串联而成,每个螺线管线圈内径440 mm、高70 mm,经调压变压器调制后加至线圈两端,线圈内的电流用交流电压电流表显示。磁场装置运行期间磁场环境均匀稳定,电磁场频率固定为50 Hz,磁感应强度为0~0.5 T连续可调。本研究的暴露磁感强度调为0.1 T,频率固定为50 Hz,暴露时间为每天上午9时~下午17时。
1.3 2组大鼠血液生化指标检测暴露30 d后对2组大鼠血液进行生化检测,采用腹主动脉采血方法收集血液标本,并对血液标本进行编号,所采集的血液于低速离心机中3 000 r·min-1离心10 min,收集血清标本。血清生化检测指标包括丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、尿素氮(urea nitrogen,UN)和肌酐(creatinine,Cr)水平。
1.4 HE染色实验终点处死大鼠,留取大鼠肝脏、肾脏和脾脏并制备成石蜡切片。采用北京索莱宝科技有限公司的HE染色试剂盒并按试剂盒说明书对肝脏、肾脏和脾脏进行石蜡切片染色,染色后的照片置于德国LEICA显微镜下观察并照相。
1.5 统计学分析采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。2组大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平以x±s表示,组间均数比较采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果 2.1 2组大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平经过30 d(0.1 T、50 Hz)ELF-EMF暴露后,与对照组比较,暴露组大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。见表 1。
(n=10, x±s) | ||||
Group | ALT[λB/(U·L-1)] | AST[λB/(U·L-1)] | UN[cB/(mmol·L-1)] | Cr[cB/(μmol·L-1)] |
Control | 35.56±2.19 | 92.70±6.22 | 7.34±0.35 | 30.61±3.55 |
Exposure | 43.20±4.05* | 107.90±9.80* | 8.03±0.70* | 35.46±3.92* |
* P<0.05 compared with control group. |
对照组大鼠肝脏组织可见中央静脉及周围肝细胞形态正常,胞质丰富,肝细胞之间可见肝血窦。暴露组大鼠暴露于ELF-EMF 30 d后,光镜下肝脏组织可见中央静脉及肝血窦扩张充血,部分肝细胞核固缩、深染、坏死,肝小叶结构不清。见图 1(插页一)。
2.3 2组大鼠肾脏组织形态表现对照组大鼠肾皮质部肾小球及周围肾小管形态正常。暴露组大鼠暴露于ELF-EMF 30 d后,光镜下肾脏组织可见肾小球及间质毛细血管扩张充血,肾小管无明显改变。见图 2(插页一)。
2.4 2组大鼠脾脏组织形态表现对照组可见正常脾索及脾血窦。暴露组SD大鼠暴露于ELF-EMF30 d后,光镜下脾脏组织可见脾血窦高度扩张充血,脾索变窄,部分区域消失。见图 3(插页一)。
3 讨论本研究结果显示:0.1 T ELF-EMF暴露影响SD大鼠肝、肾和脾功能及结构。ELF-EMF暴露对于实验动物的损伤与以下机制有关:①增加氧化应激反应(包括DNA氧化损伤和脂质过氧化等),产生活性氧簇(包括过氧离子、过氧化物、氧自由基等),持续的ELF-EMF暴露引起活性氧簇水平增加,导致细胞内线粒体和内质网的破坏,引起各脏器结构的损伤;②影响酶活性和ATP合成引起细胞凋亡;③影响免疫系统[11-13]。
大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平升高以及组织切片中部分肝细胞坏死可能与持续ELF-EMF暴露引起的氧化应激反应造成细胞损伤和坏死有关,部分国内外研究也得出了相似的结果,耿读艳等[14]将小鼠暴露于50 Hz、40~48 μT电磁场24周结果显示:暴露组小鼠ALT、AST和UN水平升高,组间比较差异有统计学意义;暴露组小鼠电镜下肝细胞内线粒体大部分嵴和膜融合,粗面内质网可见脱颗粒现象,游离核糖体数量轻度减少, 电镜下肾小球基底膜增厚; Hashish等[15]将小鼠暴露于50 Hz、1.4 mTELF-EMF 30 d后,暴露组小鼠血清中γ-谷氨酰转移酶、谷胱甘肽-S-转移酶水平明显升高,与对照组比较差异有统计学意义。Yokus等[6]指出ELF-EMF暴露可引起脂质过氧化,从而产生大量的超氧阴离子自由基,且暴露后体内丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷等氧化应激产物增加,体内产生大量骨髓来源的巨噬细胞和前体细胞,引起细胞损伤与坏死[16]。本研究结果显示:暴露组大鼠组织切片中中央静脉、肾小球及间质毛细血管以及脾血窦均表现出扩张与充血,可能与氧化应激反应引起内皮细胞损伤、细胞凋亡以及免疫反应有关。王少霞[4]将大鼠暴露于400 μT、50 Hz的电磁场60d后检测其心脏组织学特征发现:大鼠心脏组织血管扩张、充血,超微结构观察发现血浆蛋白漏出,管腔内淤血,内皮细胞凋亡或坏死。免疫系统是机体识别外来因素、最早做出响应的防御系统。郝帅等[17]将小鼠暴露于0.5 mT、50 Hz的电磁场30d后发现:ELF-EMF对小鼠血清趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和嗜酸性粒细胞趋化因子1(EOTAXIN-1)有刺激作用。ELF-EMF暴露引起的血管充血、水肿可能与氧化应激反应引起的管腔内淤血、内皮细胞凋亡和坏死有关,也可能与刺激免疫反应、引起趋化因子聚集有关[18],这需要之后更多的研究进一步验证。
本实验探讨了0.1 TELF-EMF对SD大鼠肝、肾和脾等脏器血清指标及组织学的影响,本课题组将在此基础上进行深入研究,如不同的暴露磁感应强度、不同的作用时间对大鼠肝、肾和脾脏等功能的影响,从分子水平进一步探讨ELF-EMF对SD大鼠损伤的作用机制。
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