吉林大学学报(医学版)  2018, Vol. 44 Issue (06): 1120-1123

扩展功能

文章信息

毛勇, 刘浩, 吴向阳, 高秉仁
MAO Yong, LIU Hao, WU Xiangyang, GAO Bingren
极低频电磁场暴露对SD大鼠肝、肾和脾脏功能及形态的影响
Effects of extremely low frequency electromagnetic fields exposure on function and morphology of liver, kidney and spleen of SD rats
吉林大学学报(医学版), 2018, 44(06): 1120-1123
Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2018, 44(06): 1120-1123
10.13481/j.1671-587x.20180602

文章历史

收稿日期: 2018-03-15
极低频电磁场暴露对SD大鼠肝、肾和脾脏功能及形态的影响
毛勇1 , 刘浩2 , 吴向阳1 , 高秉仁1     
1. 兰州大学第二医院心脏外科, 甘肃 兰州 730000;
2. 河南省开封市中心医院心胸外科, 河南 开封 475000
[摘要]: 目的: 探讨极低频电磁场(ELF-EMF)暴露对SD大鼠肝、肾和脾等脏器功能及形态的影响,阐明ELF-EMF辐射损伤的机制。方法: 20只雄性SD大鼠随机分为暴露组和对照组,每组10只。暴露组大鼠暴露于磁感应强度为0.1 T、频率为50 Hz的ELF-EMF装置中,每天8 h,连续暴露30 d;对照组大鼠不进行上述电磁场暴露。暴露30 d后,检测2组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(UN)和肌酐(Cr)水平,HE染色检测2组大鼠肝脏、肾脏和脾脏形态表现。结果: 与对照组比较,暴露组大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平明显升高(P < 0.05)。暴露组大鼠肝脏中央静脉及肝血窦、肾脏肾小球及间质毛细血管以及脾脏脾血窦均出现扩张充血,且部分肝细胞出现坏死;对照组大鼠肝脏、肾脏和脾脏形态无异常。结论: ELF-EMF(0.1 T、50 Hz)暴露影响SD大鼠肝、肾和脾脏功能及结构,其机制可能与ELF-EMF暴露引起的氧化应激反应有关联。
关键词: 极低频电磁场    大鼠, SD    肝脏    肾脏    脾脏    
Effects of extremely low frequency electromagnetic fields exposure on function and morphology of liver, kidney and spleen of SD rats
MAO Yong1, LIU Hao2, WU Xiangyang1, GAO Bingren1     
1. Department of Cardiac Surgery, Second Hospital, Lanzhou University, Lanzhou 730000, China;
2. Department of Cardiothoracic Surgery, Central Hospital, Kaifeng City, Henan Province, Kaifeng 475000, China
[ABSTRACT]: Objective: To discuss the effects of extremely low frequency electromagnetic fields(ELF-EMF) exposure on the function and morphology of liver, kidney and spleen of the SD rats, and to clarify the mechanism of radiation damage of ELF-EMF. Methods: Twenty male SD rats were randomly divided into exposure group and control group (n=10). The rats in exposure group were exposed in an ELF-EMF device with a magnetic induction of 0.1T and a frequency of 50 Hz; the exposure was conducted for 8 h per day for 30 d. The rats in control group didn't receive any treatment. After exposure for 30 d, the serum levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), urea nitrogen (UN), creatinine (Cr) of the rats in two groups were detected. HE staining was used to detect the morphology of the liver, kidney, spleen tissues of the rats in two groups. Results: Compared with control group, the serum levels of ALT, AST, UN, and Cr of the rats in exposure group were increased(P < 0.05). In exposure group, the dilatation and congestion were found in the central veios of liver and hepatic sinusoids, glomeruli and interstitial capillaries of kidney, and insinusoids of spleen of the rats; part of the hepatocytes showed necrosis. There was no abnormality morphology in the liver, kidney, and spleen tissues of the rats in control group. Conclusion: Exposure to ELF-EMF(0.1 T, 50 Hz) can affect the function and structures of liver, kidney and spleen tissues of the SD rats, and its mechanism may be related to oxidative stress induced by ELF-EMF.
KEYWORDS: extremely low frequency electromagnetic fields     rats, SD     liver     kidney     spleen    

极低频电磁场(extremely low frequency electromagnetic fields,ELF-EMF)是一种频率为0~300 Hz的电磁场,普遍存在于人们的日常生活中[1]。流行病学研究[2-3]显示:长期暴露于ELF-EMF会增加肿瘤和神经退行性病变的患病率,增加流产的危险性以及导致免疫损伤。动物实验[4-6]表明:ELF-EMF可引起实验动物心脏组织结构损伤和肺组织损伤,增加氧化应激反应。

磁场根据强度分为超强磁场(>5T)、强磁场(1~5T)、中强磁场(1mT~1T)和弱磁场(<1mT)[7]。不同强度电磁场对人及动物的损伤有很大差异,0.1 T ELF-EMF可由高压输电线、变压器以及各类家用电器产生,但关于0.1T ELF-EMF对于实验动物损伤的研究比较有限,其可能带来的影响有以下几个方面:①影响实验动物的血液黏度和凝血过程;②影响实验动物的昼夜节律[8-10]。目前国内外缺乏关于0.1T ELF-EMF对于动物肝、肾和脾等脏器功能影响的研究。本研究通过动物实验观察0.1T ELF-EMF对SD大鼠肝、肾和脾脏功能的影响,进一步阐明辐射损伤的作用机制。

1 材料与方法 1.1 实验动物、主要试剂和仪器

本研究经兰州大学第二医院伦理委员会批准,所有操作均严格遵守美国国立卫生研究院关于动物饲养的相关细则。20只SPF级SD大鼠购自兰州大学医学动物实验中心,雄性,7~8周龄,生产许可证号:SCXK(甘)2013-0002,使用许可证号:SYSK(甘)2013-0003,体质量270~280 g;保持环境清洁,采用专用饲料喂养,饮食饮水不限。苏木素染液和伊红染液为北京索莱宝科技有限公司产品,无水乙醇为烟台市双双化工有限公司产品,10%中性缓冲甲醛为浙江金华同和生物科技有限公司产品。显微照相系统为德国LEICA公司产品,低温高速离心机为德国Heraeus公司产品,全自动生化分析仪为日本Hitachi公司产品,加热石蜡包埋系统为德国LEICA公司产品。

1.2 实验动物分组和处理方法

将20只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组和暴露组,每组10只。将大鼠在实验室中适应性饲养2周,暴露组大鼠每日暴露于极低频正弦交变磁场,对照组大鼠不进行ELF-EMF暴露。暴露组大鼠每天暴露8 h(上午9时~下午17时),连续暴露30 d。本实验采用兰州大学核科学与技术学院设计和制作的双极磁场。该磁场由1对极间垂直距离为70 mm、匝数相同(均为160匝)的铜线圈相对放置串联而成,每个螺线管线圈内径440 mm、高70 mm,经调压变压器调制后加至线圈两端,线圈内的电流用交流电压电流表显示。磁场装置运行期间磁场环境均匀稳定,电磁场频率固定为50 Hz,磁感应强度为0~0.5 T连续可调。本研究的暴露磁感强度调为0.1 T,频率固定为50 Hz,暴露时间为每天上午9时~下午17时。

1.3 2组大鼠血液生化指标检测

暴露30 d后对2组大鼠血液进行生化检测,采用腹主动脉采血方法收集血液标本,并对血液标本进行编号,所采集的血液于低速离心机中3 000 r·min-1离心10 min,收集血清标本。血清生化检测指标包括丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、尿素氮(urea nitrogen,UN)和肌酐(creatinine,Cr)水平。

1.4 HE染色

实验终点处死大鼠,留取大鼠肝脏、肾脏和脾脏并制备成石蜡切片。采用北京索莱宝科技有限公司的HE染色试剂盒并按试剂盒说明书对肝脏、肾脏和脾脏进行石蜡切片染色,染色后的照片置于德国LEICA显微镜下观察并照相。

1.5 统计学分析

采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。2组大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平以x±s表示,组间均数比较采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 2组大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平

经过30 d(0.1 T、50 Hz)ELF-EMF暴露后,与对照组比较,暴露组大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。见表 1

表 1 2组大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平 Table 1 Levels of serum ALT, AST, UN, and Cr of rats in two groups
(n=10, x±s)
Group ALT[λB/(U·L-1)] AST[λB/(U·L-1)] UN[cB/(mmol·L-1)] Cr[cB/(μmol·L-1)]
Control 35.56±2.19 92.70±6.22 7.34±0.35 30.61±3.55
Exposure 43.20±4.05* 107.90±9.80* 8.03±0.70* 35.46±3.92*
* P<0.05 compared with control group.
2.2 2组大鼠肝脏组织形态表现

对照组大鼠肝脏组织可见中央静脉及周围肝细胞形态正常,胞质丰富,肝细胞之间可见肝血窦。暴露组大鼠暴露于ELF-EMF 30 d后,光镜下肝脏组织可见中央静脉及肝血窦扩张充血,部分肝细胞核固缩、深染、坏死,肝小叶结构不清。见图 1(插页一)。

A:Control group;B:Exposure group. 图 1 2组大鼠肝脏组织形态表现(HE,×200) Figure 1 Morphology of liver tissue of rats in two groups(HE, ×200)
2.3 2组大鼠肾脏组织形态表现

对照组大鼠肾皮质部肾小球及周围肾小管形态正常。暴露组大鼠暴露于ELF-EMF 30 d后,光镜下肾脏组织可见肾小球及间质毛细血管扩张充血,肾小管无明显改变。见图 2(插页一)。

A:Control group;B:Exposure group. 图 2 2组大鼠肾脏组织形态表现(HE,×200) Figure 2 Morphology of kidney tissue of rats in two groups(HE, ×200)
2.4 2组大鼠脾脏组织形态表现

对照组可见正常脾索及脾血窦。暴露组SD大鼠暴露于ELF-EMF30 d后,光镜下脾脏组织可见脾血窦高度扩张充血,脾索变窄,部分区域消失。见图 3(插页一)。

A:Control group;B: Exposure group. 图 3 2组大鼠脾脏组织形态表现(HE,×200) Figure 3 Morphology of spleen tissue of rats in two groups(HE, ×200)
3 讨论

本研究结果显示:0.1 T ELF-EMF暴露影响SD大鼠肝、肾和脾功能及结构。ELF-EMF暴露对于实验动物的损伤与以下机制有关:①增加氧化应激反应(包括DNA氧化损伤和脂质过氧化等),产生活性氧簇(包括过氧离子、过氧化物、氧自由基等),持续的ELF-EMF暴露引起活性氧簇水平增加,导致细胞内线粒体和内质网的破坏,引起各脏器结构的损伤;②影响酶活性和ATP合成引起细胞凋亡;③影响免疫系统[11-13]

大鼠血清ALT、AST、UN和Cr水平升高以及组织切片中部分肝细胞坏死可能与持续ELF-EMF暴露引起的氧化应激反应造成细胞损伤和坏死有关,部分国内外研究也得出了相似的结果,耿读艳等[14]将小鼠暴露于50 Hz、40~48 μT电磁场24周结果显示:暴露组小鼠ALT、AST和UN水平升高,组间比较差异有统计学意义;暴露组小鼠电镜下肝细胞内线粒体大部分嵴和膜融合,粗面内质网可见脱颗粒现象,游离核糖体数量轻度减少, 电镜下肾小球基底膜增厚; Hashish等[15]将小鼠暴露于50 Hz、1.4 mTELF-EMF 30 d后,暴露组小鼠血清中γ-谷氨酰转移酶、谷胱甘肽-S-转移酶水平明显升高,与对照组比较差异有统计学意义。Yokus等[6]指出ELF-EMF暴露可引起脂质过氧化,从而产生大量的超氧阴离子自由基,且暴露后体内丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷等氧化应激产物增加,体内产生大量骨髓来源的巨噬细胞和前体细胞,引起细胞损伤与坏死[16]。本研究结果显示:暴露组大鼠组织切片中中央静脉、肾小球及间质毛细血管以及脾血窦均表现出扩张与充血,可能与氧化应激反应引起内皮细胞损伤、细胞凋亡以及免疫反应有关。王少霞[4]将大鼠暴露于400 μT、50 Hz的电磁场60d后检测其心脏组织学特征发现:大鼠心脏组织血管扩张、充血,超微结构观察发现血浆蛋白漏出,管腔内淤血,内皮细胞凋亡或坏死。免疫系统是机体识别外来因素、最早做出响应的防御系统。郝帅等[17]将小鼠暴露于0.5 mT、50 Hz的电磁场30d后发现:ELF-EMF对小鼠血清趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和嗜酸性粒细胞趋化因子1(EOTAXIN-1)有刺激作用。ELF-EMF暴露引起的血管充血、水肿可能与氧化应激反应引起的管腔内淤血、内皮细胞凋亡和坏死有关,也可能与刺激免疫反应、引起趋化因子聚集有关[18],这需要之后更多的研究进一步验证。

本实验探讨了0.1 TELF-EMF对SD大鼠肝、肾和脾等脏器血清指标及组织学的影响,本课题组将在此基础上进行深入研究,如不同的暴露磁感应强度、不同的作用时间对大鼠肝、肾和脾脏等功能的影响,从分子水平进一步探讨ELF-EMF对SD大鼠损伤的作用机制。

参考文献
[1] de Bruyn L, de Jager L. Effect of long-term exposure to a randomly varied 50 Hz power frequency magnetic field on the fertility of the mouse[J]. Electromagn Biol Med, 2010, 29(1/2): 52–61.
[2] 邵建华, 叶红. 极低频电磁场的生物效应及其医学应用[J]. 上海中医药大学学报, 2010, 24(4): 94–98.
[3] Johansson O. Disturbance of the immune system by electromagnetic fields-A potentially underlying cause for cellular damage and tissue repairreduction which could lead to disease and impairment[J]. Pathophysiology, 2009, 16(2/3): 157–177.
[4] 王少霞.极低频电磁场暴露对大鼠心脏组织结构的影响[A].第九届全国生物医学体视学学术会议、第十二届全军军事病理学学术会议暨第八届全军定量病理学学术会议论文集[C].呼和浩特, 2014: 261-262.
[5] 张安英, 周玉荣, 邓波, 等. 红外光谱法研究极低频电磁场暴露对大鼠肺组织二级结构的影响[J]. 中国生物医学工程学报, 2009, 28(1): 65–70. DOI:10.3969/j.issn.0258-8021.2009.01.013
[6] Yokus B, Cakir DU, Akdag MZ, et al. Oxidative DNA damage in rats exposed to extremely low frequency electromagnetic fields[J]. Free Radic Res, 2005, 39(3): 317–323. DOI:10.1080/10715760500043603
[7] Rosen AD. Mechanism of action of moderate-intensity static magnetic fields on biological systems[J]. Cell Biochem Biophys, 2003, 39(2): 163–173. DOI:10.1385/CBB:39:2:163
[8] Carpenter DO. Human disease resulting from exposure to electro magnetic fields[J]. Rev Environ Health, 2013, 28(4): 159–172.
[9] 文晓成.极低频磁场影响血液流态的初步研究[D].西安: 第四军医大学, 2012.
[10] 孙兆钰, 耿读艳, 陈传芳. 极低频磁场对小鼠胚胎成纤维细胞中隐花色素生物节律的影响[J]. 中华劳动卫生职业病杂志, 2017, 35(6): 459–462. DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-9391.2017.06.015
[11] Kuzay D, Ozer C, Sirav B, et al. Oxidative effects of extremely low frequency magnetic field and radio frequency radiation on testes tissues of diabetic and healthy rats[J]. Bratisl Lek Listy, 2017, 118(5): 278–282.
[12] Ravera S, Repaei E, Morelli A, et al. Effects of extremely low frequency electromagnetic fields on the adenylate kinase activity of rod outer segmentof bovine retina[J]. Bioelectromagnetics, 2004, 25(7): 545–551. DOI:10.1002/(ISSN)1521-186X
[13] Destefanis M, Viano M, Leo C, et al. Extremely low frequency electromagnetic fields affect proliferation and mitochondrial activity of human cancer cell lines[J]. Int J Radiat Biol, 2015, 91(12): 964–972. DOI:10.3109/09553002.2015.1101648
[14] 耿读艳, 徐桂芝, 万晓伟, 等. 模拟输电环境电磁场对动物血清和细胞超微结构的影响[J]. 高电压技术, 2013, 39(1): 163–174. DOI:10.3969/j.issn.1003-6520.2013.01.024
[15] Hashish AH, EL-Missiry MA, Abdelkader HI, et al. Assessment of biological changes of continuous whole body exposure to static magnetic field and extremely low frequency electromagnetic fields in mice[J]. Ecotoxicol Environ Safety, 2008, 71(3): 895–902. DOI:10.1016/j.ecoenv.2007.10.002
[16] Pi J, Zhang Q, Fu J, et al. ROS signaling, oxidative stress and Nrf2 in pancreatic beta-cell function[J]. Toxicol Appl Pharmacol, 2010, 244(1): 77–83. DOI:10.1016/j.taap.2009.05.025
[17] 郝帅, 张颖, 周良, 等. 极低频电磁场对小鼠血清趋化因子水平的影响[J]. 环境与健康杂志, 2017, 34(5): 382–385.
[18] 孙跃, 兰天, 郭姣. 鞘氨醇激酶信号通路在肝纤维化中的作用机制[J]. 临床肝胆病杂志, 2017, 33(9): 1798–1801. DOI:10.3969/j.issn.1001-5256.2017.09.038