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文章信息
- 郑芳, 欧阳征仁, 欧阳靖霖, 周诗力, 罗文
- ZHENG Fang, OUYANG Zhengren, OUYANG Jinglin, ZHOU Shili, LUO Wen
- 乳腺癌患者超声图像特征与人类上皮生长因子受体2和Ki-67阳性表达的关联性分析
- Analysis on correlations between ultrasound features and positive expressions of CerbB-2and Ki-67 in patients with breast cancer
- 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 1073-1077
- Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2018, 44(05): 1073-1077
- 10.13481/j.1671-587x.20180535
-
文章历史
- 收稿日期: 2018-01-23
2. 湖南环境生物职业技术学院内科学教研室, 湖南 衡阳 421001
2. Department of Internal Medicine, Hunan Vocational College of Environmental Biology, Hengyang 421001, China
乳腺彩色多普勒超声检查是乳腺癌早期发现、早期诊断的重要手段。研究[1]显示:多普勒超声检查在乳腺癌诊断中占据重要的地位。Ki-67为常见的核蛋白质,与细胞增殖有密切关联[1]。研究[2]提示:Ki-67与恶性肿瘤的转移和分化密切关联。人类上皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)也称为CerbB-2,属于原癌基因,与细胞生长和分化有关,与乳腺癌的恶性程度呈正相关关系。如何通过无创的影像学技术直接或间接反映乳腺癌的预后因子,探寻二者间的关联性,一直是国内外学者研究的热点声,然而将彩色超声与CerbB-2和Ki-67等指标联系的研究较少。本研究旨在通过超声检查分析乳腺癌影像学特征与CerbB-2和Ki-67表达的关系,为乳腺癌诊断、治疗及预后评估提供依据。
1 资料与方法 1.1 临床资料选择2014年11月—2016年11月在南华大学附属第二医院接受治疗的107例乳腺癌患者作为研究对象,患者年龄45~75岁,平均年龄(62.8±4.7)岁。按照病理分型:浸润性导管癌58例,黏液癌36例,浸润性小叶癌13例。根据国际TNM(2011)标准[4]进行划分临床分期:Ⅰ期乳腺癌患者59例,Ⅱ期乳腺癌患者35例,Ⅲ期乳腺癌患者13例。病例纳入标准:①患者经临床病理诊断确诊为乳腺癌;②均符合国际乳腺癌TNM(2011)标准;③均不伴有其他乳腺疾病;④患者及家属均同意参与本次研究,并签署知情同意书。病例排除标准:①并发肿瘤远处转移或自身患有其他恶性肿瘤者;②伴有其他乳腺疾病(如乳腺囊肿和乳腺炎等)者;③伴有神经系统疾病及行为失常者。
1.2 试剂和主要仪器CerbB-2试剂盒和Ki-67试剂盒(福州迈新生物技术公司)。彩色多普勒超声检测仪(GE LOGIQ E9,美国通用电气公司)。
1.3 常规超声检测应用彩色多普勒超声检测仪,将探头的频率设置为7.5 MHz,患者取仰卧位,暴露患者乳腺,采用直接探测法在患者乳房象限行扇形检查,发现病灶部位时,记录乳腺肿块的边界、形状、纵横比、内部回声、后放回声、钙化及血流的情况。肿块的血流信号参照Adler半定量分级法:0级,无明显血流;1级,小于2处的点状血流;2级,发现1条血管或3~4处点状血流;3级,发现大于1条的血管或4处以上的点状血流。
1.4 免疫组织化学法检测Ki-67和CerbB-2的表达术中或穿刺活检取乳腺癌组织,严格按照试剂盒的说明操作进行检测,制作5μm的石蜡切片,采用脱蜡、酒精水化以及水冲洗2次,之后行3次PBS液冲洗,每次3 min,行振荡处理。pH6.0的枸橼酸盐内煮沸15 min,加入H2O2孵育10 min后用PBS液冲洗3次,每次3 min。加入50μL一抗溶液,孵育60 min后,用PBS液冲洗3次,每次3 min;除去PBS溶液,加入100μLDBS溶液,5 min后冲洗、苏木素染色,之后行PBS冲洗、乙醇脱水以及二甲苯溶液过滤封片。CerbB-2和Ki-67免疫染色阳性判定[5]:CerbB-2检测以细胞膜上出现黄色或棕黄色为阳性,Ki-67检测在细胞浆内出现黄色或棕黄色为阳性。采用400倍显微镜观察切片,在每个切片中观察10个视野,每个视野计数100个细胞,记录阳性细胞百分率,以组织中阳性细胞数比值将其分为阴性和阳性,阴性:阳性细胞数0%~10%;阳性:阳性细胞数>10%。
1.5 统计学分析采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析。超声征象特征及Ki-67和CerbB-2在乳腺癌组织中的阳性表达率以百分率(%)表示,采用Spearman相关分析评估乳腺癌Ki-67和CerbB-2表达的关联性。采用χ2检验比较不同乳腺癌超声图像特征患者Ki-67、CerbB-2表达的差异,采用Cox比例风险回归模型进行乳腺癌患者5年生存结局的多因素生存分析。分析乳腺癌患者超声特征与Ki-67和CerbB-2表达的相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果 2.1 乳腺癌超声图像特征107例乳腺癌患者中,病灶直径为0.8~9.8 cm,病灶直径>2 cm者67例(62.6%),形态不规则者54例(50.5%),边界不清晰者55例(51.4%),肿瘤纵横比>1者43例(40.2%),内部回声不均匀者67例(62.6%),肿瘤的后方回声衰减32例(29.9%),肿块中发现细小钙化者33例(30.8%),CDFI显示血流分级2~3级者52例(48.6%)。乳腺癌超声图像显示:形态不规则,边界不清晰,后方回声衰减,2~3级血流。见图 1(插页六)。
2.2 Ki-67蛋白和CerbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达107例乳腺癌组织中Ki-67蛋白阳性表达率为81.21%(87/107),CerB-2蛋白阳性表达率为73.83%(79/107)。Spearman相关性分析结果显示:Ki-67与CerbB-2表达呈正相关关系(r=0.264,P=0.001)。见图 2(插页六)。
2.3 Ki-67蛋白和CerbB-2蛋白的表达与超声图像特征的关系肿瘤纵横比>1、内部回声不均匀、后方回声衰减、肿块内微小钙化、血流分级2~3级与乳腺癌组织中Ki-67蛋白表达有关(P<0.05),而边界、直径、形状与Ki-67蛋白表达无关(P>0.05);乳腺癌边界、直径、形状、肿瘤纵横比>1、内部回声不均匀、后方回声衰减、肿块内微小钙化、血流分级2~3级与乳腺癌组织中CerbB-2蛋白表达有关(P<0.05)。见表 1和2。
[n(η/%)] | |||||
Ultrasound feature | n | Ki-67 expression | χ2 | P | |
+ | - | ||||
Edge | |||||
Clear | 52 | 21(40.38) | 31(59.62) | 3.182 | 0.072 |
Unclear | 55 | 29(55.77) | 26(44.23) | ||
Tumor size | |||||
≥2 cm | 67 | 38(56.72) | 29(43.28) | 5.134 | 0.064 |
<2 cm | 40 | 17(42.5) | 23(57.5) | ||
Shape | |||||
Irregular | 54 | 34(62.92) | 20(37.08) | 9.006 | 0.053 |
Regular | 53 | 22(41.51) | 31(58.49) | ||
Aspect ratio | |||||
<1 | 64 | 15(23.44) | 49(76.56) | 23.578 | <0.01 |
≥1 | 43 | 30(69.77) | 13(30.23) | ||
Internal echo | |||||
Uniformity | 40 | 5(12.50) | 35(87.50) | 20.075 | <0.01 |
Heterogeneous | 67 | 40(59.70) | 27(40.30) | ||
Back echo | |||||
No attenuation | 75 | 26(34.67) | 49(65.33) | 8.428 | 0.004 |
Attenuation | 32 | 19(59.38) | 13(40.62) | ||
Internal calcification | |||||
Yes | 33 | 22(66.67) | 11(33.33) | 13.022 | <0.01 |
No | 74 | 23(31.08) | 51(68.92) | ||
Blood flow grade | |||||
0 | 28 | 3(29.63) | 25(70.37) | 9.254 | 0.007 |
1 | 27 | 8(29.63) | 19(70.37) | ||
2 | 25 | 15(0.60) | 10(9.40) | ||
3 | 27 | 19(70.37) | 8(29.63) |
[n(η/%)] | |||||
Ultrasound feature | n | CerbB-2 expression | χ2 | P | |
+ | - | ||||
Edge | |||||
Clear | 52 | 8(15.39) | 44(84.61) | 18.614 | <0.01 |
Unclear | 55 | 41(74.55) | 14(25.45) | ||
Tumor size | |||||
≥2 cm | 67 | 41(61.19) | 26(38.81) | 10.036 | 0.002 |
<2 cm | 40 | 9(22.50) | 31(77.50) | ||
Shape | |||||
Irregular | 54 | 35(64.82) | 19(35.18) | 9.156 | 0.003 |
Regular | 53 | 11(20.37) | 42(79.63) | ||
Aspect ratio | |||||
<1 | 64 | 16(25.00) | 48(75.00) | 11.841 | <0.01 |
≥1 | 43 | 32(74.42) | 11(25.58) | ||
Internal echo | |||||
Uniformity | 40 | 6(15.00) | 34(85.00) | 10.572 | 0.001 |
Heterogeneous | 67 | 42(62.69) | 25(37.31) | ||
Back echo | |||||
No attenuation | 75 | 30(40.00) | 45(60.00) | 9.168 | 0.003 |
Attenuation | 32 | 22(68.75) | 10(31.25) | ||
Internal calcification | |||||
Yes | 33 | 22(66.67) | 11(33.33) | 12.164 | <0.01 |
No | 74 | 21(28.38) | 53(81.62) | ||
Blood flow grade | |||||
0 | 28 | 3(3.33) | 25(96.67) | 13.251 | <0.01 |
1 | 27 | 10(37.04) | 17(62.96) | ||
2 | 25 | 17(68.00) | 8(32.00) | ||
3 | 27 | 22(81.48) | 5(18.52) |
多因素Cox模型回归分析结果显示:影响乳腺癌患者5年生存结局的独立因素包括CerbB-2蛋白(
Factor | β | SE | OR | χ2 | 95%CI | P |
CerbB-2 () | 0.424 | 0.631 | 2.517 | 9.137 | 4.846-12.674 | 0.002 |
Ki-67 () | 0.645 | 0.073 | 3.133 | 7.736 | 5.954-10.245 | 0.006 |
Blood flow 2-3 grade | 0.266 | 0.587 | 2.520 | 9.326 | 8.014-11.241 | 0.036 |
Rear echo attenuation | 0.637 | 0.137 | 3.371 | 10.214 | 3.862-17.914 | 0.001 |
Aspect ratio>1 | 0.325 | 0.335 | 3.625 | 6.356 | 2.371-10.221 | 0.002 |
Internal echo | 0.235 | 0.124 | 0.213 | 10.154 | 8.106-12.374 | 0.086 |
χ2=47.20,ν=5,P<0.001. |
彩色多普勒超声是乳腺癌诊断的重要辅助检查之一,近年来,其在乳腺癌患者术前诊断中应用越来越广泛,可提高乳腺癌临床检出率。研究[6-7]显示:常规彩色多普勒血流成像(color doppler flow ima-ging, CDFI)易受检测部位、肿瘤组织深浅和血流速度等影响,对相对细小血管分支及低速血流信号难以检测。乳腺癌的超声表现为低回声,边缘毛刺、角状边缘、前后径大于横径、肿块后方回声衰减、点状钙化和高回声晕[8]。本研究中,107例乳腺癌患者中,病灶直径>2 cm者占62.6%,形态不规则者占50.5%,边界不清晰者占51.4%,肿瘤纵横比>1者占40.2%,内部回声不均匀者占62.6%,肿瘤的后方回声衰减占29.9%,肿块中发现细小钙化者占30.8%,血流分级2~3级者占48.6%,该结果与其他研究结果基本一致[9-10]。
研究[21]表明:Ki-67与细胞内的逆转录密切关系,在细胞分裂增殖期活跃。关于肿瘤的形态与生物学标记物之间的关系,各研究报道结果相异,肿瘤形态不规则及其肿瘤纵横比>1提示肿瘤细胞向肿瘤周围转移速度不一样[22-23]。本研究中,肿瘤的纵横比与Ki-67蛋白及CerbB-2蛋白有关联,其主要原因可能是其均在细胞增殖和分化过程中发挥作用。乳腺癌边缘毛刺征及周边高回声晕是其特征性指标,本研究结果显示:边缘有毛刺征者Ki-67蛋白和CerbB-2蛋白的阳性表达率均高于无此征象者,说明Ki-67蛋白和CerbB-2蛋白阳性表达者肿瘤细胞分化差,恶性度高,具有更高的侵袭性行为。乳腺癌的钙化是组织细胞变性、坏死和钙盐沉着造成的。本研究中,微小钙化者Ki-67蛋白和CerbB-2蛋白的阳性表达率均高于无此征象者,提示存在微钙化的肿瘤的侵袭性强,预后不良。
本研究存在一定的缺陷,如未进行随访,未进行生存分析;本研究中样本量不足,数据的统计学意义可能不充分。
综上所述,乳腺癌的超声声像图表现与Ki-67蛋白和CerbB-2蛋白表达等有密切关联,通过对乳腺癌声像图特征的分析,可为乳腺癌的生物学行为及临床预处理和判断患者预后等提供依据。
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